一清洗液12形成為緩沖液的鹽并不特別限定，但優(yōu)選Tris、HEPES、PIPES、磷酸等鹽。并且，優(yōu)選第一清洗液12包含不阻礙核酸向載體的吸附、逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)、PCR反應(yīng)等的量的乙醇。在這種情況下，乙醇濃度并不特別限定。
[0119]此外，也可以使第一清洗液12含有離液物質(zhì)。例如，若使第一清洗液12含有鹽酸胍鹽，則既能夠維持或強(qiáng)化吸附于磁性粒子30等的核酸的吸附，又能夠清洗磁性粒子30等。
[0120]第二清洗液14是與第二油22以及第三油24均相分離的液體。第二清洗液14可以是基本上與第一清洗液12相同或不同的組成，優(yōu)選事實上不含有離液物質(zhì)的溶液。用于不使離液物質(zhì)被帶入之后的溶液。作為第二清洗液14，例如可以由5mM Tris鹽酸緩沖液構(gòu)成。如上所述，第二清洗液14優(yōu)選包含醇。
[0121]第三清洗液16是與第三油24以及第四油26均相分離的液體。第三清洗液16可以是基本與第二清洗液14相同或不同的組成，但不含有醇。另外，第三清洗液16為了防止將醇帶入反應(yīng)容器400而可以含有檸檬酸。
[0122]3-1-4.磁性粒子
[0123]磁性粒子30是吸附核酸的粒子，為了能夠利用位于容器組裝體1之外的磁鐵3而使之移動，優(yōu)選具有較強(qiáng)的磁性。磁性粒子30，例如可以是硅珠或涂覆了硅涂層的粒子。磁性粒子30也可以優(yōu)選涂覆了硅涂層的粒子。
[0124]3-1-5.溶出液
[0125]溶出液32是與第四油26相分離的液體，其在溶出容器300中的流路2內(nèi)作為夾在第四油26、26之間的液柱而存在。溶出液32是使吸附于磁性粒子30的核酸從磁性粒子30溶出至溶出液32中的液體。另外，溶出液32通過加熱而在第四油26中成為液滴。溶出液32例如能夠使用純水。這里，“液滴”是被自由表面包圍的液體。
[0126]3-1-6.試劑
[0127]試劑34包含反應(yīng)所需要的成分。試劑34在反應(yīng)容器400中的反應(yīng)為PCR的情況下，為了對溶出至溶出液的液滴36 (參照圖8)中的靶核酸(DNA)進(jìn)行擴(kuò)增，能夠含有DNA聚合酶等酶和引物(核酸)、以及用于檢測擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光探針中的至少一個，這里，引物、酶以及熒光探針全部含有。試劑34與第四油26不相溶，若與包含核酸的溶出液32的液滴36接觸，則溶解而發(fā)生反應(yīng)，其在反應(yīng)容器400內(nèi)的流路2的重力方向上的最下部的區(qū)域以固體狀態(tài)存在。例如，試劑34可以使用冷凍干燥(freeze dry) 了的試劑。
[0128]3-2.容器組裝體的操作
[0129]作為容器組裝體1的操作的一個例子，使用圖7以及圖8進(jìn)行說明。
[0130]容器組裝體1的操作包括如下工序:
[0131](A)將吸附容器100、清洗容器200、溶出容器300以及反應(yīng)容器400接合來組裝容器組裝體1的工序；
[0132](B)將含有核酸的檢體導(dǎo)入收納有吸附液10的吸附容器100的工序；
[0133](C)從第二清洗容器220向吸附容器100移動磁性粒子30的工序；
[0134](D)擺動吸附容器100使核酸吸附于磁性粒子30的工序；
[0135](E)使吸附著核酸的磁性粒子30從吸附容器100依次通過第一油20、第一清洗液12、第二油22、第二清洗液14、第三油24、第三清洗液16以及第四油26向溶出容器300移動的工序；
[0136](F)在溶出容器300內(nèi)，使核酸從磁性粒子30溶出至溶出液32的工序；以及
[0137](G)使包含核酸的液滴與反應(yīng)容器400內(nèi)的試劑34接觸的工序。
[0138]以下，依次針對各工序進(jìn)行說明。
[0139](A)組裝容器組裝體1的工序
[0140]如圖7(a)所示，組裝的工序是以對吸附容器100至反應(yīng)容器400進(jìn)行接合而形成從吸附容器100連續(xù)至反應(yīng)容器400的流路2的方式來組裝容器組裝體1。此外，在圖7 (a)中，吸附容器100安裝有蓋110，但將蓋110安裝于柱塞部130是在(B)工序之后進(jìn)行的。
[0141]更具體而言，向反應(yīng)容器400的反應(yīng)接受部404插入溶出容器300的溶出插入部302，向溶出容器300的溶出接受部304插入第三清洗容器230的第三插入部232，向第三清洗容器230的第三接受部234插入第二清洗容器220的第二插入部222，向第二清洗容器220的第二接受部224插入第一清洗容器210的第一插入部212，向第一清洗容器210的第一接受部214插入吸附容器100的吸附插入部122。
[0142](B)導(dǎo)入檢體的工序
[0143]導(dǎo)入的工序以如下方式進(jìn)行:例如將附著有檢體的棉棒從吸附容器100的安裝有蓋110的開口插入吸附液10中，并將該棉棒浸漬在吸附液10中。更具體而言，將棉棒從吸附容器100的位于插入注射器部120狀態(tài)下的柱塞部130的一方的端部的開口插入。接下來，將棉棒從吸附容器100取出，并安裝蓋110。這是圖7(a)的狀態(tài)。另外，檢體也可以利用移液管等向吸附容器100導(dǎo)入。另外，若檢體為糊狀、固體狀，則例如可以利用匙、鑷子等以使其附著于柱塞部130的內(nèi)壁或投入柱塞部130的內(nèi)壁的方式向吸附容器100導(dǎo)入。如圖7(a)所示，注射器部120以及柱塞部130之中填充吸附液10至中間，在供蓋110安裝的開口側(cè)殘留有空間。
[0144]檢體中包含成為靶的核酸。以下，有時將其簡稱為靶核酸。靶核酸例如是DNA、RNA(DNA:Deoxyribonucleic Acid 和 / 或 RNA:Ribonucleic Asid)。革巴核酸被從檢體提取出來并溶出至后述的溶出液32后，例如被用作PCR的模板。作為檢體，可以舉出血液、鼻腔粘液、口腔粘薄膜、其他各種生物體樣本等。
[0145](C)移動磁性粒子的工序
[0146]如圖7(a)所示，移動磁性粒子30的工序以如下方式進(jìn)行:在對夾在第二清洗容器220的第三油24、24之間且以液柱狀存在的磁性粒子30施加配置于容器外部的磁鐵3的磁力的狀態(tài)下，使磁鐵3朝向吸附容器100移動。
[0147]配合該磁性粒子30的移動或比此更早地使蓋110以及柱塞部130向從注射器部120抽出的方向移動來使吸附液10內(nèi)的檢體從柱塞部130內(nèi)向注射器部120內(nèi)移動。通過該柱塞部130的移動，被前端部134堵塞的流路2與吸附液10連通。
[0148]磁性粒子30隨著磁鐵3的移動在流路2內(nèi)上升，如圖7 (b)所示，到達(dá)存在檢體的吸附液10內(nèi)。
[0149](D)使核酸吸附于磁性粒子的工序
[0150]使核酸吸附的工序通過使吸附容器100擺動而進(jìn)行。吸附容器100的開口被蓋110密封至吸附液10不會泄露，因此該工序能夠高效地進(jìn)行。通過該工序，靶核酸因離液劑的作用而吸附于磁性粒子30的表面。在該工序中，在磁性粒子30的表面還可以吸附靶核酸以外的核酸、蛋白質(zhì)。
[0151]作為使吸附容器100擺動的方法，可以使用公知的漩渦振蕩器等裝置，也可以通過操作者的手振蕩混合。另外，也可以利用磁性粒子30的磁性，邊從外部施加磁場邊擺動吸附容器100。
[0152](E)移動吸附著核酸的磁性粒子的工序
[0153]移動吸附著核酸的磁性粒子30的工序通過邊從吸附容器100、清洗容器200以及溶出容器300的外部施加磁鐵3的磁力邊移動磁鐵3來使磁性粒子30在吸附液10、第一油?第四油20、22、24、26以及第一清洗液?第三清洗液12、14、16中移動。
[0154]磁鐵3例如可以使用永磁鐵、電磁鐵等。另外，磁鐵3可以通過操作者的手進(jìn)行移動，也可以利用機(jī)械裝置等進(jìn)行移動。磁性粒子30具有被磁力吸引的性質(zhì)，因此利用該性質(zhì)來改變磁鐵3相對于吸附容器100、清洗容器200以及溶出容器300的配置，使該磁鐵3在流路2內(nèi)移動。磁性粒子30通過各清洗液時的速度并不特別限定，可以在同一清洗液內(nèi)沿著流路2的長邊方向往復(fù)地移動。此外，在使磁性粒子30以外的粒子等在管內(nèi)移動時，例如能夠利用重力、電位差來進(jìn)行移動。
[0155](F)使核酸溶出的工序
[0156]使核酸溶出的工序在溶出容器300內(nèi)，使核酸從磁性粒子30溶出至溶出液的液滴36。圖7中的溶出液32在溶出容器300的流路的較細(xì)部分作為液柱而存在，在如上述那樣使磁性粒子30移動期間，加熱反應(yīng)容器400，內(nèi)容液膨脹，從而如圖8所示，作為液滴36而在溶出容器300內(nèi)向上方移動。而且，如圖8(a)所示，若磁性粒子30到達(dá)溶出容器300的溶出液的液滴36，則吸附于磁性粒子30的靶核酸因溶出液的作用而溶出至溶出液的液滴36內(nèi)。
[0157](G)與試劑34接觸的工序
[0158]與試劑34接觸的工序使包含核酸的液滴36與位于反應(yīng)容器400內(nèi)的最下部的試劑34接觸。具體而言，如圖8(b)所示，推動蓋110、并利用柱塞部130的前端部134來下壓第一油20，從而將施加有磁鐵3的磁力的磁性粒子30維持在規(guī)定位置，并在這種狀態(tài)下使溶出了靶核酸的溶出液的液滴36向反應(yīng)容器400移動，與位于反應(yīng)容器400的最下部的試劑34接觸。液滴36接觸的試劑34溶解并與溶出液中的靶核酸混合，從而例如能夠?qū)嵤┦褂脽嵫h(huán)的PCR。
[0159]4.PCR 裝置
[0160]使用圖9和圖10對使用容器組裝體1進(jìn)行核酸溶出處理和PCR的PCR裝置50進(jìn)行說明。圖9是PCR裝置50的示意結(jié)構(gòu)圖。圖10是PCR裝置50的框圖。
[0161]PCR裝置50具有旋轉(zhuǎn)機(jī)構(gòu)60、磁鐵移動機(jī)構(gòu)70、按壓機(jī)構(gòu)80、熒光測定器55、以及控制器90。
[0162]4-1.旋轉(zhuǎn)機(jī)構(gòu)
[0163]旋轉(zhuǎn)機(jī)構(gòu)60包括旋轉(zhuǎn)用馬達(dá)66和加熱器65，其通過驅(qū)動旋轉(zhuǎn)用馬達(dá)66使容器組裝體1以及加熱器65旋轉(zhuǎn)。旋轉(zhuǎn)機(jī)構(gòu)60使容器組裝體1和加熱器65旋轉(zhuǎn)而上下反轉(zhuǎn)，由此包含靶核酸的液滴在反應(yīng)容器400的流路內(nèi)移動，進(jìn)行熱循環(huán)處理。
[0164]加熱器65包括未圖示的多個加熱器，例如可以包括溶出用、高溫用以及低溫用的加熱器。溶出用加熱器對容器組裝體1的液柱狀的溶出液進(jìn)行加熱，促進(jìn)靶核酸從磁性粒子向溶出液的溶出。高溫用加熱器將反應(yīng)容器400的流路的上游側(cè)的液體加熱至比低溫用加熱器更高的溫度。低溫用加熱器對反應(yīng)容器的流路的底部402進(jìn)行加熱。利用高溫用加熱器與低溫用加熱器，能夠在反應(yīng)容器400的流路內(nèi)的液體形成溫度梯度。在加熱器65設(shè)置有溫度控制裝置，該溫度控制裝置能夠根據(jù)來自控制器90的指令將容器組裝體1內(nèi)的液體設(shè)定為適于處理的溫度。
[0165]加熱器65具有將反應(yīng)容器400的底部402的外壁露出的開口。熒光測定器55從該開口測定溶出液的液滴的亮度。
[0166]4-2.磁鐵移動機(jī)構(gòu)
[0167]磁鐵移動機(jī)構(gòu)70是使磁鐵3移動的機(jī)構(gòu)。磁鐵移動機(jī)構(gòu)70將容器組裝體1內(nèi)的磁性粒子吸引至磁鐵3，并且通過使磁鐵3移動來使磁性粒子在容器組裝體1內(nèi)移動。磁鐵移動機(jī)構(gòu)70具有一對磁鐵3、升降機(jī)構(gòu)以及擺動機(jī)構(gòu)。
[0168]擺動機(jī)構(gòu)是使一對磁鐵3在圖9的左右方向(也可以是圖9的前后方向)上擺動的機(jī)構(gòu)。一對磁鐵3以從左右方向夾著安裝于PCR裝置50的容器組裝體1的方式配置(參照圖7、圖8)，能夠在與容器組裝體1的流路正交的方向(這里為圖9的左右方向)上使磁性粒子與磁鐵3的距離接近。因此，若使一對磁鐵3在左右方向上如箭頭那樣擺動，則容器組裝體1內(nèi)的磁性粒子配合磁鐵3的動作而在左右方向上移動。升降機(jī)構(gòu)使磁鐵3在上下方向上移動，從而能夠配合磁鐵3的移動而使磁性粒子在圖9的上下方向上移動。
[0169]4-3.按壓機(jī)構(gòu)
[0170]按壓機(jī)構(gòu)80是推動容器組裝體1的柱塞部的機(jī)構(gòu)，柱塞部被按壓機(jī)構(gòu)80推動，由此溶出容器300內(nèi)的液滴被擠出至反應(yīng)容器400內(nèi)，從而能夠在反應(yīng)容器400內(nèi)實施PCR。
[0171]在圖9中，以按壓機(jī)構(gòu)80配置于正立的容器組裝體1的上方的方式示出按壓機(jī)構(gòu)80，但按壓機(jī)構(gòu)80按動柱塞部的方向也可以不是圖9中的上下方向，而例如是相對于上下方向傾斜45度的方向。這樣一來，容易將按壓機(jī)構(gòu)80配置在不與磁鐵移動機(jī)構(gòu)70干涉的位置。
[0172]4-4.熒光測定器
[0173]熒光測定器55是對反應(yīng)容器400的液滴的亮度進(jìn)行測定的測定器。熒光測定器55配置在與反應(yīng)容器400的底部402對置的位置。此外，熒光測定器55為了能夠應(yīng)對多重PCR (multiplex PCR)，優(yōu)選能夠檢測多個波長域的亮度。
[0174]4-5.控制器
[0175]控制器90是對PCR裝置50進(jìn)行控制的控制部?？刂破?