00 μ L/孔的T-PBS (含0. 1 % Tween-20的無鉀離子的PBS)洗板三次， 每次5分鐘。于37°C烘箱中干燥酶標(biāo)板1-2小時(shí)。
[0122] (2)每孔加入用反應(yīng)緩沖液（50mM HEPES pH 7. 4, 50mM MgCl2, 0· 5mM MnCl2, 0· 2mM Na3V04, ImM DTT)稀釋的ATP溶液49 μ L，每孔中加入1 μ L化合物，加入待測(cè)試化合物，再加 入50 μ L用反應(yīng)緩沖液稀釋的各激酶域重組蛋白啟動(dòng)反應(yīng)，每次實(shí)驗(yàn)需設(shè)無 ATP對(duì)照孔兩 孔。置37°C搖床（lOOrpm)反應(yīng)1小時(shí)。棄去孔中液體，T-PBS洗板三次。
[0123] (3)加入抗體 PY99 100 μ L/ 孔（抗體用含 BSA 5mg/mL 的 T-PBS 1:500 稀釋）， 37°C搖床反應(yīng)0. 5小時(shí)。棄去孔中液體，T-PBS洗板三次。
[0124] (4)加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠二抗100 μ L/孔（抗體用含BSA 5mg/ml的 T-PBS 1:2000稀釋），37°C搖床反應(yīng)0. 5小時(shí)。棄去孔中液體，T-PBS洗板三次。
[0125] (5)加入211^/1^的(^顯色液10(^17孔（用含有0.03%!120 2的0.邡檸檬酸-檸 檬酸鈉緩沖液（pH = 5. 4)稀釋），25°C避光反應(yīng)1-10分鐘。
[0126] (6)加入2M H2S0450 μ L/孔中止反應(yīng)，用可調(diào)波長式微孔板酶標(biāo)儀VERSAmax讀數(shù)， 波長為490nm。
[0127] (7)結(jié)果分析
[0128]
[0129] 2.受體酪氨酸激酶ALK酶活抑制IC5。評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)
[0130] 表1 :本發(fā)明提供的雜環(huán)取代的吲哚并萘酮衍生物對(duì)ALK酶活抑制水平
[0131]
[0132] 本發(fā)明提供的雜環(huán)取代的吲哚并萘酮衍生物為四環(huán)類化合物，該類衍生物主要在 alectinib 8位取代基兩雜環(huán)中間引入一個(gè)亞甲基或氮甲基作為連接物，從而降低了該類 衍生物的剛性；同時(shí)在雜環(huán)上引入羥基或烷氧基，有效增強(qiáng)了其溶解性。代表性化合物的測(cè) 試結(jié)果顯示，本發(fā)明的雜環(huán)取代的吲哚并萘酮衍生物在〇. 1 μ Μ的濃度下，化合物S1-S12對(duì) ALK均有抑制作用，半數(shù)以上的化合物的IC5。值小于ΙΟηΜ，一些化合物的活性與陽性對(duì)照相 當(dāng)或者更優(yōu)（陽性化合物alectinib在相同分析條件下，半數(shù)抑制濃度為0. 01~0. 02 μ Μ 之間）。因此，本發(fā)明提供的雜環(huán)取代的吲哚并萘酮衍生物或其異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的 鹽、酯、前藥或溶劑合物是非常有潛力的ALK選擇性抑制劑。
[0133] 上述例子僅作為說明的目的，本發(fā)明的范圍并不受此限制。對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員 來說進(jìn)行修改是顯而易見的，本發(fā)明僅受所附權(quán)利要求范圍的限制。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種通式（I)表示的雜環(huán)取代的剛巧并蔡麗衍生物，其異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的 鹽、醋、前藥或溶劑合物：其中， 環(huán)A為未取代或被C1~C3直鏈或支鏈烷基取代的4-10元飽和或不飽和雜環(huán)，所述雜 環(huán)包含選自氧、氮和硫原子中的1-3個(gè)雜原子，所述雜環(huán)可W為單環(huán)或雙環(huán)，其中，單環(huán)雜 環(huán)可W為化咯環(huán)、脈巧環(huán)、脈嗦環(huán)、嗎晰環(huán)、1，2, 3, 6-四氨化巧環(huán)、四氨化喃環(huán)、氮雜環(huán)了焼 環(huán)或氧雜環(huán)了焼環(huán)，雙環(huán)雜環(huán)可W為8-氧-3-氮雜雙環(huán)巧.2. 1]辛焼環(huán)、（1S，4巧-2, 5-二 氮雙環(huán)[2. 2. 1]庚焼環(huán)、順式-六氨化咯并化4-C]化咯環(huán)、1-氧雜-8-氮雜-螺[4. 5]癸 焼環(huán)、2, 6-二氮雜螺巧,3]庚焼環(huán)或1, 4-二氧雜-8-氮雜-螺[4.引癸焼環(huán)； 環(huán)B為含取代基的4-10元飽和或不飽和雜環(huán)，所述取代基為居基、C1~C3的烷氧基、 居基取代的C1~C3的烷基或氨基取代的C1~C3的烷基，所述雜環(huán)包含選自氧、氮和硫 原子中的1-3個(gè)雜原子，所述雜環(huán)可W為單環(huán)或雙環(huán)，其中，單環(huán)雜環(huán)為化咯環(huán)、脈巧環(huán)、脈 嗦環(huán)、嗎晰環(huán)、1，2, 3, 6-四氨化巧環(huán)、四氨化喃環(huán)、四氨巧喃環(huán)、氮雜環(huán)了焼環(huán)或氧雜環(huán)了焼 環(huán)，雙環(huán)雜環(huán)為8-氧-3-氮雜雙環(huán)巧.2. 1]辛焼環(huán)、（1S, 4巧-2, 5-二氮雙環(huán)巧.2. 1]庚焼 環(huán)、順式-六氨化咯并巧，4-C]化咯環(huán)、1-氧雜-8-氮雜-螺[4.5]癸焼環(huán)、2, 6-二氮雜螺 [3, 3]庚焼環(huán)或1，4-二氧雜-8-氮雜-螺[4.引癸焼環(huán)； L為-邸2-、-N(CH3) -、-NRz-或-NH-，其中所述取代基Rz為C1~C3的烷基； Ri為氨原子、C1~C6直鏈或支鏈烷基或者因素；所述因素為氣、氯、漠、賄。2. 如權(quán)利要求1所述的通式（I)表示的雜環(huán)取代的剛巧并蔡麗衍生物，其異構(gòu)體或其 藥學(xué)上可接受的鹽、醋、前藥或溶劑合物， 其中，環(huán)A為化咯環(huán)、脈嗦環(huán)、1，2, 3, 6-四氨化巧環(huán)、（1S，4S)-2, 5-二氮雙環(huán)巧.2. 1] 庚焼環(huán)、2, 6-二氮雜螺巧，3]庚焼環(huán)； 環(huán)B為取代基為居基取代的C1~C3的烷基的氧雜環(huán)了焼環(huán)、居基取代的四氨化喃環(huán) 或氧雜環(huán)了焼環(huán)； L 為-邸2-或-N(CH3)-; Ri優(yōu)選為Η、己基或化。3. 如權(quán)利要求2所述的通式（I)表示的雜環(huán)取代的剛巧并蔡麗衍生物，其異構(gòu)體或其 藥學(xué)上可接受的鹽、醋、前藥或溶劑合物， 其中，環(huán)A為化咯環(huán)、1，2, 3, 6-四氨化巧環(huán)、（1S，4S)-2, 5-二氮雙環(huán)巧.2. 1]庚焼環(huán)。4. 如權(quán)利要求1所述的通式（I)表示的雜環(huán)取代的剛巧并蔡麗衍生物，其異構(gòu)體或其 藥學(xué)上可接受的鹽、醋、前藥或溶劑合物，其中，所述通式（I)表示的雜環(huán)取代的剛巧并蔡 麗衍生物選自：5. -種制備權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的通式（I)表示的雜環(huán)取代的剛巧并蔡麗衍 生物的方法，反應(yīng)路線如下：步驟a ;化合物i與N-Boc保護(hù)的環(huán)A發(fā)生取代反應(yīng)，生成化合物ii ;所述取代反應(yīng)在 N-甲基化咯焼麗中進(jìn)行，所述取代反應(yīng)的反應(yīng)溫度為110~140。更優(yōu)選為12(TC ; 步驟b ;化合物ii在Η氣己酸下脫去Boc保護(hù)基，得到化合物iii ; 步驟C ;化合物iii與因代焼技生 取代反應(yīng)生成化合物iv ; 步驟d ;化合物iv經(jīng)Suzuki偶聯(lián)反應(yīng)得到化合物V ;所述Suzuki偶聯(lián)反應(yīng)的催化劑優(yōu) 選為鉛類催化劑，更優(yōu)選為Pd2(P化3)4 ;所述Suzuki偶聯(lián)反應(yīng)優(yōu)選在堿存在下進(jìn)行，所述堿 優(yōu)選為崎(：〇3。6. -種制備權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的通式（I)表示的雜環(huán)取代的剛巧并蔡麗衍 生物的方法，反應(yīng)路線如下：步驟a ;化合物vii-a與N-Boc保護(hù)的雜環(huán)發(fā)生碳-氮或碳-碳偶聯(lián)反應(yīng)，生成化合物 viii-a ;所述偶聯(lián)反應(yīng)優(yōu)選為在催化劑例如四Η苯基麟鉛作用下發(fā)生的Suzuki偶聯(lián)反應(yīng) 或在催化劑例如Η(二亞予基丙麗）二鉛作用下發(fā)生的碳氮偶聯(lián)反應(yīng)； 步驟b ;化合物viii-a在Η氣己酸下脫去Boc保護(hù)基，得到化合物ix-a ; 步驟C ;化合物ix-a與因代燒發(fā)生 反應(yīng)，生成化合物x-a，如果環(huán)A為部分不飽和環(huán)，則進(jìn)一步通過氨化還原反應(yīng)將環(huán)A轉(zhuǎn)化為 飽和環(huán)。7. -種制備權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的通式（I)表示的雜環(huán)取代的剛巧并蔡麗衍 生物的方法，反應(yīng)路線如下：步驟a ;化合物vii-b與N-Boc保護(hù)的雜環(huán)發(fā)生碳氮或碳碳偶聯(lián)反應(yīng)，生成化合物 viii-b，所述偶聯(lián)反應(yīng)優(yōu)選為在催化劑例如四Η苯基麟鉛作用下發(fā)生的Suzuki偶聯(lián)反應(yīng) 或在催化劑例如Η(二亞予基丙麗）二鉛作用下發(fā)生的碳氮偶聯(lián)反應(yīng)； 步驟b ;化合物viii-b在Η氣己酸燈FA)下脫去Boc保護(hù)基，得到化合物ix-b ; 步驟C ;化合物ix-b與因代焼發(fā)生 反應(yīng)，生成化合物x-b，如果環(huán)A為部分不飽和環(huán)，則進(jìn)一步通過氨化還原反應(yīng)將環(huán)A轉(zhuǎn)化為 飽和環(huán)。8. 權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的通式（I)表示的雜環(huán)取代的巧隙并蔡麗衍生物，其 異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽、醋、前藥或溶劑合物在制備用于預(yù)防和/或治療與漸變性 淋己瘤酶相關(guān)的細(xì)胞異常增殖、形態(tài)變化或運(yùn)動(dòng)功能亢進(jìn)疾病，或者與血管新生或癌轉(zhuǎn)移 相關(guān)的疾病的藥物中的用途。9. 權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的通式（I)表示的雜環(huán)取代的巧隙并蔡麗衍生物，其 異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽、醋、前藥或溶劑合物在制備用于治療和/或預(yù)防腫瘤生長 或轉(zhuǎn)移的藥物中的用途。10. -種藥物組合物，其中所述藥物組合物包含治療有效量的權(quán)利要求1-4中任意一 項(xiàng)所述的通式（I)表示的雜環(huán)取代的剛巧并蔡麗衍生物，其異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的 鹽、醋、前藥或溶劑合物中的一種或多種；W及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種雜環(huán)取代的吲哚并萘酮衍生物或其光學(xué)異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、前藥或溶劑合物，其制備方法，藥物組合物及其在制備酪氨酸激酶抑制劑，特別是酪氨酸激酶ALK選擇性抑制劑中的用途。該類化合物或其藥物組合物作為酪氨酸激酶抑制劑，特別是作為酪氨酸激酶ALK選擇性抑制劑可用于預(yù)防和/或治療與漸變性淋巴瘤激酶相關(guān)的細(xì)胞異常增殖、形態(tài)變化或運(yùn)動(dòng)功能亢進(jìn)等疾病，或者與血管新生或癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的疾病，尤其是用于治療和/或預(yù)防腫瘤生長或轉(zhuǎn)移等疾病藥物中的用途。
【IPC分類】C07D487/10, C07D405/12, A61P35/04, A61P35/00, C07D405/14, C07D487/08
【公開號(hào)】CN105566307
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410534720
【發(fā)明人】張翱, 耿美玉, 宋子蘭, 艾菁, 郭俊峰, 彭霞, 季寅淳, 丁健
【申請(qǐng)人】中國科學(xué)院上海藥物研究所
【公開日】2016年5月11日
【申請(qǐng)日】2014年10月11日