罐內(nèi)種 子培養(yǎng)基的2%，然后蓋好罐上的接種帽，通過無(wú)菌通風(fēng)培養(yǎng)制得種子罐菌種液。
[0016] 其中，發(fā)酵液制備步驟:將發(fā)酵設(shè)備的管道、無(wú)菌空氣過濾系統(tǒng)進(jìn)行滅菌處理;其 中通風(fēng)量每100公斤培養(yǎng)液每分鐘通入氮?dú)?.1立方米，通入時(shí)間為3小時(shí)，發(fā)酵罐培養(yǎng):種 子罐培養(yǎng)基配方中各組分的重量百分比為:核桃仁2.5%、花生仁2.5%、酪蛋白酸鈉0.3%、L一 精氨酸〇. 3%、磷酸氫二鉀0.2%、番茄粉0.2%、卷心菜粉0.1%、牛肉膏0.5%、酵母浸粉0.2%、蛋 白胨1%、丁酸鈣0.5%、快速滲透劑T 0.2%、檸檬酸胺0.2%、絲氨酸0.1%、葡萄糖酸0.6%、氯化 鈉0.3%、乳糖2%、葡萄糖2%、乙酸鈉0.7%、可溶性淀粉0.2%、無(wú)水氯化鈣0.1%、50萬(wàn)單位脂肪 酶1%、10萬(wàn)單位無(wú)花果酶1%、聚醚消泡劑0. 1%、自來(lái)水83.2%，PH自然；制備發(fā)酵罐培養(yǎng)基： 首先將所述發(fā)酵罐培養(yǎng)基配方中的水投入到經(jīng)滅菌處理的發(fā)酵罐中，然后開動(dòng)攪拌機(jī)，結(jié) 束向攪拌罐中加入核桃仁、花生仁、酪蛋白酸奶和無(wú)水氯化鈣進(jìn)行攪拌并過濾收集漿液，將 漿液加熱至53°C ~57°C后在攪拌下加入脂肪酶進(jìn)行酶解后再加入無(wú)花果酶進(jìn)行酶解得到 酶解液，將所述的酶解液和余量的水投入至滅菌的發(fā)酵罐并加入余量的原料進(jìn)行攪拌，轉(zhuǎn) 速為80-140轉(zhuǎn)/每分鐘，經(jīng)過高溫滅菌及降溫處理后，PH值自然，發(fā)酵30-40小時(shí)。
[0017] 得到發(fā)酵罐培養(yǎng)基;制備誘導(dǎo)液:將丁酸鈣、快速滲透劑T、乳糖放至20kg中的自來(lái) 水中進(jìn)行攪拌溶化后得到誘導(dǎo)液;接種:通過差壓法將種子罐菌種送至發(fā)酵罐中，將所述發(fā) 酵罐培養(yǎng)基接入種子罐菌中，其中接種量是每l〇〇kg發(fā)酵罐培養(yǎng)基接入種子罐菌種8kg，并 在接種過程中加入誘導(dǎo)液進(jìn)行誘導(dǎo)，得到發(fā)酵液;收集濕菌泥:開動(dòng)管式離心機(jī)，調(diào)整轉(zhuǎn)速 8000轉(zhuǎn)/分鐘，以每分鐘進(jìn)料20公斤的進(jìn)料速度進(jìn)行例行，棄上清，收集濕菌泥。然后進(jìn)行二 次離心，轉(zhuǎn)速為13000/分鐘，棄上清，收集濕菌泥。其中，無(wú)菌空氣用量為每100公斤種子培 養(yǎng)基每分鐘用無(wú)菌空氣0.05立方，PH值自然，攪拌速度80-180轉(zhuǎn)/每分鐘，罐壓0.05兆帕，溫 度31-37°C，培養(yǎng)時(shí)間20~24小時(shí)。
[0018] 進(jìn)一步的，制備試管培養(yǎng)基過程中的酶解液和制備一級(jí)種子培養(yǎng)液過程中的酶解 液的制備是通過過濾后的漿液中加入50萬(wàn)單位的脂肪酶10g酶解10~30分鐘，再加入10萬(wàn)單 位的無(wú)花果酶l〇g酶解20~70分鐘得到。
[0019] 進(jìn)一步的，制備種子培養(yǎng)基過程中酶解液和制備發(fā)酵罐培養(yǎng)基過程中酶解液的制 備是通過過濾后漿液中加入50萬(wàn)單位的脂肪1000g，酶解10~40分鐘，再加入10萬(wàn)單位的無(wú) 花果酶1000g，酶解20~70分鐘得到。
[0020] 進(jìn)一步的，混合發(fā)酵菌的形式包括囊劑、粉劑、片劑、膏劑、液體、奶制品，其中粉劑 包括用無(wú)菌粉碎機(jī)將凍干料粉碎成細(xì)度為80目的粉菌;囊劑的復(fù)配包括將凍干料粉碎成細(xì) 度為80目的菌粉10g，與代謝物干燥粉15g、微晶纖維素20g、硅膠粉20g、乳糖10g，硬脂酸鎂 15g、L-谷氨酰胺10g放入固體攪拌混合機(jī)中混合均勻，在無(wú)菌條件下分裝入膠囊;膏劑包括 粉菌進(jìn)行低溫濃縮后的膏狀物。
[0021] 其中，雙歧桿菌乳酸菌混合發(fā)酵菌可以運(yùn)用在農(nóng)作物的培育中，將雙歧桿菌乳酸 菌混合發(fā)酵菌按1:3000倍稀釋后噴施在黃瓜、茄子的開花到收獲的生長(zhǎng)過程;可將雙歧桿 菌乳酸菌混合發(fā)酵菌按1:5000倍的稀釋后澆灌于果樹的根本。
[0022] 有益效果:通過本發(fā)明制備出的雙歧桿菌混合菌具有菌的活性高、活菌收率高，保 質(zhì)期時(shí)間長(zhǎng)，最大程度的使雙歧桿菌產(chǎn)生更多的有效物質(zhì)，避免了雙歧桿菌受到氧氣、水 分、光線、保護(hù)基質(zhì)等條件的影響，可以運(yùn)用在人體、禽畜、蔬菜以及水果的保健、生長(zhǎng)上，在 人體上可用于便秘、腹瀉、腹痛等腸道紊亂綜合癥，胃腸道炎、預(yù)防癌癥、預(yù)防治療結(jié)腸炎、 食欲不振、消化不良、營(yíng)養(yǎng)吸收差，糾正兒童偏食、厭食等病癥;改善脂肪代謝紊亂，防止動(dòng) 脈硬化和高血壓，預(yù)防調(diào)節(jié)肥胖、減肥等效果，還可提高人體免疫力、緩解失眠等亞健康狀 態(tài)，提高鈣、磷、鐵的吸收利用率、促進(jìn)鐵和維生素 D的吸收，清除人體自由基、抗衰老、延緩 肌膚老化等;在禽畜上防止仔豬腹瀉，有效改善豬的消化機(jī)能，降低豬肉中膽固醇含量，提 高瘦肉率，日增重明顯，減少豬的死亡率，降低飼養(yǎng)成本;還可提高肉雞的出肉率，腹瀉明顯 下降，減少死淘率，達(dá)到提前出欄的效果，減少蛋雞死亡率，延長(zhǎng)產(chǎn)蛋高峰期，提高產(chǎn)蛋率， 減少蛋的破損率，提高雞體的自身抗病能力，減少抗生素用量，增加動(dòng)物的抗應(yīng)激性;在蔬 菜上該產(chǎn)品可改善作物營(yíng)養(yǎng)，增殖作物根際有益菌，激活植物細(xì)胞，提高光合作用和抗逆性 能力，減少蟲害，增產(chǎn)增收;在水果上具有縮短果實(shí)成熟期，達(dá)到提前上市，增強(qiáng)了果樹的抗 病能力，成品蘋果保質(zhì)期長(zhǎng)，含糖高，汁多，口感好，增產(chǎn)顯著。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 實(shí)施例1 制備擴(kuò)大菌種液 培養(yǎng)基的配制：核桃仁10克、花生仁10克、酪蛋白酸鈉5克、L一精氨酸3克、番茄粉3 克、牛肉膏6克、酵母浸粉2克、蛋白胨5克、檸檬酸胺0.1克、絲氨酸0.6克、氯化鈉3克、 乳糖5克、葡萄糖8克、乙酸鈉8克、無(wú)水氯化鈣0.1克、磷酸氫二鉀3.2克、50萬(wàn)單位脂肪酶10 克、10萬(wàn)單位無(wú)花果酶10克、自來(lái)水1 〇〇〇毫升，PH自然。
[0024]操作:原料的預(yù)處理： 先取配方中的水300毫升，放入研磨機(jī)中，然后放入核桃仁、花生仁、酪蛋白酸鈉、無(wú)水 氯化鈣，然后開動(dòng)研磨機(jī)將其打成漿狀，過濾棄渣收集漿液，然后再將配方中剩余的水，加 入到漿液中，將漿液加熱至55°C±2°C，在攪拌下加入50萬(wàn)單位的脂肪酶10克酶解10分鐘， 再加入10萬(wàn)單位的無(wú)花果酶10克酶解30分鐘即可得到酶解液;然后向酶解液中加入配方中 的其它原料，攪拌溶化分裝于25X200的試管中，每支試管裝20毫升，用硅膠塞牛皮紙封口， 放入醫(yī)用消毒器中0.1 - 0.14兆帕滅菌20分鐘，培養(yǎng)基滅菌完畢，得到試管培養(yǎng)基。
[0025]接種:在無(wú)菌條件下，分別打開購(gòu)進(jìn)的凍干管菌種，因用的是4株菌種，在此須分別 接種培養(yǎng)，然后分別向每個(gè)開啟的凍干管中加入以上滅好菌的試管培養(yǎng)基1毫升，搖動(dòng)溶化 備用，得到凍干管菌懸液，然后取以上滅好菌的試管培養(yǎng)基4支，再將以上溶化好的凍干管 菌懸液各取1毫升分別加入到4支試管中，用膠塞，外用保鮮膜、牛皮紙包扎，保持不透氣狀 態(tài)，放入搖床上震蕩培養(yǎng)，以180-190轉(zhuǎn)/分鐘，溫度37°C的條件下培育36小時(shí)即可，此稱為 擴(kuò)大菌種液。
[0026] 實(shí)施例2 制備一級(jí)種子培養(yǎng)液 配方:核桃仁20克、花生仁20克、酪蛋白酸鈉10克、L一精氨酸5克、番茄粉6克、牛肉膏8 克、酵母浸粉3克、蛋白胨3克、檸檬酸胺0.15克、絲氨酸0.8克、葡萄糖酸0.4克、氯化鈉3克、 乳糖10克、葡萄糖15克、乙酸鈉6克、無(wú)水氯化鈣0.1克、磷酸氫二鉀2克、50萬(wàn)單位脂肪酶10 克、10萬(wàn)單位無(wú)花果酶10克、自來(lái)水1 〇〇〇毫升，PH自然。
[0027]操作：原料的預(yù)處理：首先取配方中的水600毫升，放入研磨機(jī)中，然后加入核桃 仁、花生仁、酪蛋白酸鈉、無(wú)水氯化鈣，然后開動(dòng)研磨機(jī)將其打成漿狀，過濾棄渣收集漿液， 然后將配方中剩余的水加入到漿液中，將漿液加熱至55°C ± 2°C，在攪拌下加入50萬(wàn)單位的 脂肪酶10克、酶解20分鐘，再加入10萬(wàn)單位的無(wú)花果酶10克，酶解60分鐘即可，此稱為酶解 液，然后向酶解液中加入配方中的其它原料，攪拌溶化備用，得到一級(jí)種子培養(yǎng)液。
[0028] 實(shí)施例3 制備一級(jí)菌種液 將一級(jí)種子培養(yǎng)液按用量分裝于三角瓶中，然后用八層紗布外加二層牛皮紙?jiān)闷?口，放入醫(yī)用消毒器中滅菌，滅菌前首先打開消毒器上的排氣閥門，等有少量蒸汽排出時(shí)關(guān) 閉。當(dāng)消毒器上的壓力達(dá)到〇 .05兆帕?xí)r，打開排氣閥門排氣6-8分鐘，然后關(guān)閉排氣閥門， 繼續(xù)加溫，當(dāng)壓力達(dá)到0.1-0.14兆帕?xí)r，保持25分鐘即可，滅菌完畢后離開加熱源，讓其自 然降溫，當(dāng)壓力表歸零時(shí)，打開消毒器，取出滅好菌的三角瓶培養(yǎng)基放超凈工作臺(tái)中讓其自 然降溫到37°C，然后將以上培養(yǎng)好的擴(kuò)大菌種液分別加入到三角瓶滅好菌的培養(yǎng)基中。接 種分別是4%、即一級(jí)種子培養(yǎng)液100毫升、加入擴(kuò)大菌種液4毫升，完畢后用無(wú)菌保鮮膜及牛 皮紙密封三角瓶口，不要透氣，然后放搖床上，150轉(zhuǎn)/分鐘，37°C，培育24小時(shí)即可，得到一 級(jí)菌種液。
[0029] 實(shí)施例4 種子罐菌種培養(yǎng) 配方:核桃仁1.5%、花生仁1.5%、酪蛋白酸鈉0.2%、L一精氨酸0.3%、番茄粉0.2%、牛肉 膏0.4%、蛋白胨0.2%、丁酸鈣0.5%、檸檬酸胺0.02%、絲氨酸0.04%、葡萄糖酸0.5%、氯化鈉 0.3%、乳糖0.5%、葡萄糖1%、乙酸鈉0.3%、無(wú)水氯化鈣0.03%、可溶性淀粉0.3%、50萬(wàn)單位脂 肪酶1%、10萬(wàn)單位無(wú)花果酶1%、磷酸氫二鉀0.2%、聚醚消泡劑0.01%、自來(lái)水90%，PH自然。
[0030] 操作:原料的預(yù)處理;首先，取配方中的水20公斤，放入研磨機(jī)中，然后加入配方中 的核桃仁、花生仁及酪蛋白酸鈉、無(wú)水氯化鈣，開動(dòng)研磨機(jī)將其打成漿狀，過濾棄渣收集漿 液，將漿液加熱至55°C±2°C，在攪拌下加入50萬(wàn)單位的脂肪酶1000克，酶解10分鐘，然后再 加入10萬(wàn)單位的無(wú)花果酶1000克，酶解30分鐘即可，此稱為酶解液。
[0031] 將配方中余下的水及酶解液投入到已空罐滅好菌的種子罐中，開動(dòng)攪拌機(jī)，加入 配方中所需要的原料，然后在不停地?cái)嚢柘峦ㄈ胝羝訙兀紫壤霉迠A