層或盤管加熱到 95°C，再改用直接蒸汽加熱，當罐中溫度達到121°C時，保持25分鐘即可達到滅菌效果，然后 關閉蒸汽，開始降溫，當罐中溫度降至37°C時備用，得到種子培養(yǎng)基。
[0032] 然后將培養(yǎng)好的一級菌種液在無菌條件下加入到種子罐中去，接種量分別是罐內(nèi) 種子培養(yǎng)基的2%，進行混合培養(yǎng)混合培養(yǎng)，然后蓋好種子罐上的接種帽開始攪拌培養(yǎng)，培養(yǎng) 條件為:溫度37°C，PH自然。攪拌速度80轉(zhuǎn)/分鐘，罐壓0.05兆帕，培養(yǎng)時間16小時即達到質(zhì) 量要求。如果罐壓降低，可通過氮氣保持，過高可通過罐頂?shù)呐艢忾y排出，得到種子罐菌種。
[0033] 實施例5 發(fā)酵液的制備 配方:核桃仁2.5%、花生仁2.5%、酪蛋白酸鈉0.3%、L 一精氨酸0.3%、磷酸氫二鉀0.2%、番 茄粉0.2%、卷心菜粉0.1%、牛肉膏0.5%、酵母浸粉0.2%、蛋白胨1%、丁酸鈣0.5%、快速滲透劑T 0.2%、檸檬酸胺0.2%、絲氨酸0.1%、葡萄糖酸0.6%、氯化鈉0.3%、乳糖2%、葡萄糖2%、乙酸鈉 0.7%、可溶性淀粉0.2%、無水氯化鈣0.1%、50萬單位脂肪酶1%、10萬單位無花果酶1%、聚醚 消泡劑0 · 1%、自來水83 · 2%，PH自然。
[0034]操作:原料的預處理：（1)首先取配方中的水30公斤，放入研磨機中，然后加入配方 中的核桃仁、花生仁及酪蛋白酸鈉、無水氯化鈣，開動研磨機將其打成漿狀，過濾棄渣收集 漿液，將漿液加熱至55°C ± 2°C，在攪拌下加入50萬單位的脂肪酶1000克，酶解30分鐘，然后 再加入10萬單位的無花果酶1000克，酶解60分鐘即可，得到酶解液;（2)將配方中的丁酸鈣， 快速滲透劑T，乳糖投入到20kg的自來水中，攪拌溶化后115°C滅菌15分鐘備用，得到誘導 液。
[0035]具體操作:將配方中余下的水及酶解液投入到已空罐滅菌的發(fā)酵罐中，開動攪拌 機，加入配方中其他原料，然后在不停地攪拌下通入蒸汽加溫，首先，利用發(fā)酵罐的加熱器 加熱到95°C，然后再改用直接蒸汽加熱，當罐溫度達到121°C時，保持40分鐘可達到滅菌的 效果，然后降溫，當發(fā)酵罐中溫度降至37°C時備用，得到發(fā)酵罐培養(yǎng)基。
[0036]接種:首先提尚種子罐的壓力為Ο . 1兆帕，發(fā)酵罐的壓力為Ο . 05兆帕，然后打開接 種管道的閥門，將培養(yǎng)好的種子罐菌種，通過壓差的方式輸送到發(fā)酵罐中去，然后關閉接種 管道閥門。其中接種量是每100公斤發(fā)酵罐培養(yǎng)基接入種子罐菌種8公斤。培養(yǎng)條件:發(fā)酵溫 度37°C，攪拌速度100轉(zhuǎn)/分鐘，發(fā)酵時間36小時，罐壓0.05兆帕，PH值自然，氮氣通入量每 100公斤發(fā)酵罐培養(yǎng)基每分鐘通入氮氣0.01立方米，通入時間3小時。發(fā)酵至3小時停止通入 氮氣，繼續(xù)發(fā)酵，當發(fā)酵至8小時，開始用蠕動栗向發(fā)酵罐中流加以上滅好菌的誘導液，以每 小時0.8公斤的速度流加，發(fā)酵至36小時，停止發(fā)酵，得到發(fā)酵液。
[0037] 實施例6 收集濕菌泥 開動管式離心機，調(diào)整轉(zhuǎn)速8000轉(zhuǎn)/分鐘，以每分鐘進料20公斤的進料速度進行離心， 離心完畢后收集濕菌泥，然后對發(fā)酵液進行第二次離心，離心前調(diào)整離心機轉(zhuǎn)速13000/分 鐘，以每分鐘進料20公斤的速度進行離心，然后收集濕菌泥。
[0038] 實施例7 濕菌泥冷凍干燥 懸菌液的制備:取濕菌泥1000克，加入無菌蒸餾水4000毫升，脫脂奶粉600克，乳糖300 克，98%的甘油200克，麥芽糊精150克。
[0039]操作:首先取配方中的水1500毫升加熱至60°C-65°C，在攪拌下加入麥芽糊精，溶 化后再加入配方中余下的水，然后再加入配方中其它的原料。在37°C-40°C的條件下充分 攪拌1小時，即成為懸菌液，然后將該懸菌液放入37°C的恒溫室或箱中恒溫60分鐘進行預 凍。
[0040]冷凍干燥前的預凍，將恒溫60分鐘的懸菌液分裝于凍干盤中，然后放入冷凍干燥 機的預凍室內(nèi)在零下40°C-45°C的條件下預凍6小時，凍結(jié)后進行抽真空干燥。
[0041 ]真空干燥:將預凍好的料盤放入真空干燥室開始抽真空干燥，干燥條件為:真空度 為10-15帕，溫度零下50°C，干燥室溫度32°C，干燥時間55小時。凍干完畢后收集凍干料，用 無菌粉碎機粉碎成細度為80目的菌粉密封包裝備用，得到凍干菌粉。
[0042] 實施例8 膠囊復配 取80目的凍干菌粉10克，代謝物干燥粉15克，微晶纖維素20克，硅膠粉20克，乳糖10克， 硬脂酸鎂15克，L 一谷氨酰胺10克。
[0043]操作:將以上各物料放入固體攪拌混合機中混合均勻，然后在無菌條件下分裝入 膠囊中，裝瓶或壓片即為成品。
[0044] 實施例9 表1 人體應用效果
_J,_3_l_?_3_J 說明： 男性:服用10天對便秘、腹瀉、腹痛、結(jié)腸炎、消化不良有改善者360人，服用15天明顯改 善者365人，服用28天顯著改善者380人，服用100天達到正常狀態(tài)的385人，停服180天未出 現(xiàn)反復的382人，出現(xiàn)反復的3人，達到預期滿意效果。
[0045] 女性:服用10天對便秘、腹瀉、腹痛、結(jié)腸炎、消化不良有改善者365人，服用15天明 顯改善者375人，服用28天顯著改善者387人，服用100天達到正常狀態(tài)的390人，停服180天 未出現(xiàn)反復的386人，出現(xiàn)反復的4人，達到預期滿意效果。
[0046] 實施例10 表2 Λ體府用效里
說明： 男性:服用10天對小兒食欲不振、厭食、腸道炎有改善者380人，服用15天明顯改善者 385人，服用28天顯著改善者383人，服用100天達到正常狀態(tài)的395人，膚色改善者280人，腹 部脂肪明顯減少者達260人，大腦記憶明顯改善者達330人，達到預期滿意效果。停服180天 反復2人。
[0047]女性:服用10天對小兒食欲不振、厭食、腸道炎有改善者392人，服用15天明顯改善 者396人，服用28天顯著改善者391人，服用100天達到正常狀態(tài)的397人，膚色改善者287人， 腹部脂肪明顯減少者達275人，大腦記憶明顯改善者達379人，停服180天食欲不振反復2人， 達到預期滿意效果。
[0048] 實施例11 胃癌細胞抑制生長試驗(MGC 803細胞株）
注:按0.5%的加入量直接將0.5克本發(fā)明生產(chǎn)的載體菌加入到100毫升含有癌細胞的培 養(yǎng)液中，37°C厭氧培養(yǎng)36小時，72小時，得出以上結(jié)果，并且按以上操作重復做了 24批次，得 出相冋效果。
[0049] 實施例12 結(jié)腸癌細胞抑制生長試驗(MC-38細胞株）
注:按0.5%的加入量直接將0.5克本公司生產(chǎn)的載體菌加入到100毫升含有癌細胞的培 養(yǎng)液中，37°C厭氧培養(yǎng)36小時，72小時，得出以上結(jié)果，并且按以上操作重復做了 31批次，得 出相冋效果。
[0050] 實施例13 畜禽試驗結(jié)果:太湖豬(增重效果）
其中：在豬的全價飼料中添加0.15%的載體菌粉，飼喂60天達到的效果。
[0051 ] 實施例14 畜禽試驗結(jié)果:羅曼肉雞(增重效果）
其中，在雞的全價飼料中添加〇. 1%的載體菌粉，飼喂40天達到的效果。
[0052] 實施例15 畜禽試驗結(jié)果:海蘭蛋雞(產(chǎn)蛋率）
其中，在蛋雞的全價飼料中加入〇. 1%的載體菌粉，自由采食達到以上效果。
[0053] 實施例16 美國八號果蔬試驗
其中，在水中加入0.25%的載體菌粉，花期噴灑1次，坐果期噴1次，灌根1次，達到以上效 果。
[0054] 實施例17 黃瓜果樹試驗:愛豐品種
' 其中，在水中加入0.3%的載體菌粉花期噴灑1次，果期噴灑1&，果期灌根1次，達到以上 效果。
[0055] 實施例18 前子果蔬試驗:京前10號
其中，在水中加入0.3%的載體菌粉花期噴灑1次，初果期噴灑1次，灌根1次，達到以上效 果。
【主權項】
1. 一種雙歧桿菌乳酸菌混合發(fā)酵菌酶解法制備工藝，其特征在于，所述的步驟包括:制 備擴大菌種液和一級種子培養(yǎng)液得到一級菌種液，再將一級菌種液與種子培養(yǎng)基在種子罐 混合培養(yǎng)得到種子罐菌種，再將所述的種子罐菌種與發(fā)酵罐培養(yǎng)基混合培養(yǎng)并通過誘導液 進行發(fā)酵得到發(fā)酵液，當發(fā)酵完畢后，進行發(fā)酵液離心，得到濕菌泥，其中濕菌泥即為雙歧 桿菌乳酸菌的混合發(fā)酵菌泥;其中所述的擴大菌種液制備包括酶解法制備試管培養(yǎng)基和接 種兩部分;其中所述的一級種子培養(yǎng)液制備包括酶解法制備一級種子培養(yǎng)液;所述的種子 培養(yǎng)基的制備包括酶解法制備種子培養(yǎng)基;所述的發(fā)酵罐培養(yǎng)基的制備包括酶解法制備發(fā) 酵罐培養(yǎng)基。2. 根據(jù)權利要求1所述的一種雙歧桿菌乳酸菌混合發(fā)酵菌酶解法制備工藝，其特征在 于，所述的擴大菌種液的制備包括以下步驟： 酶解法制備試管培養(yǎng)基:將l〇g核桃仁、l〇g花生仁、5克酪蛋白酸鈉、0.1克無水氯化鈣 不分前后順序投入到300ml水中進行研磨并打成漿狀過濾得到漿液，再在漿液中加入700ml 水并進行加熱至53°C~57°C并進行攪拌，在攪拌中加入脂肪酶進行酶解，酶解后再加入無花 果酶進行酶解得到酶解液，然后向酶解液中加入3gL-精氨酸、3g番茄粉、6g牛肉膏、2g酵母 浸粉、5g蛋白胨、0. lg梓檬酸銨、0.6g絲氨酸、3g氯化鈉、5g乳糖、8g葡萄糖、8g乙酸鈉、3.2g 磷酸氫二鉀進行攪拌溶解后分裝于試管中，每支試管中分裝20ml，將所述多個試管放入醫(yī) 用消毒器中，采用〇. 1~. 14Mpa滅菌20分鐘后得到試管培養(yǎng)基； 接種：在無菌條件下