欧美在线观看视频网站,亚洲熟妇色自偷自拍另类,啪啪伊人网,中文字幕第13亚洲另类,中文成人久久久久影院免费观看 ,精品人妻人人做人人爽,亚洲a视频

一種能同時產(chǎn)果膠酶和半纖維素酶的枯草芽孢桿菌及篩選方法和應(yīng)用

文檔序號:9804400閱讀:737來源:國知局
一種能同時產(chǎn)果膠酶和半纖維素酶的枯草芽孢桿菌及篩選方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于工業(yè)微生物技術(shù)領(lǐng)域,尤其是一能同時產(chǎn)果膠酶和半纖維素酶的枯草 芽孢桿菌及篩選方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 大麻,為一年生的???,大麻屬植物,高度約3米。學(xué)名為Cannabis satival,也稱 為漢麻、寒麻、線麻、花麻等。大麻種植對氣候和土壤的要求很低,而且在生長過程中無需農(nóng) 藥以及外界的施肥,抗蟲害能力強,生長迅速,種植收獲期短等,最重要的是大麻纖維具有 許多特有的優(yōu)異性能,如抗靜電、防過敏,良好的保溫性、散熱性,防菌、防腐、抗紫外等。大 麻纖維是重要的紡織纖維作物。
[0003] 與其他麻類相比(苧麻,亞麻等),大麻纖維的生物脫膠研究相對較少,脫膠難度也 要高于其他麻類。其膠質(zhì)含量高達40~50%,其中以多聚糖類為主;而且其纖維結(jié)構(gòu)比較特 殊,單纖維長度差異較大,纖維分離性差等,這些原因都大大增加了大麻的脫膠難度。要使 大麻纖維具有可紡織性,必須除去大多數(shù)的膠質(zhì),使其單纖維相互分離變得柔軟,這一過程 就稱為脫膠。目前,麻纖維的脫膠在工業(yè)上多采用化學(xué)脫膠法,即采用強酸,強堿,表面活性 劑,螯合劑等在高溫高壓下對原麻進行處理。此種脫膠的方法雖然所用時間比較短,在幾小 時之內(nèi)就能得到精干麻,但是脫膠后的工業(yè)廢水會給環(huán)境帶來極大的污染;而且高溫高壓 下所需能耗高,給脫膠工業(yè)增大了成本;最重要的是,所使用的化學(xué)試劑嚴重損傷了纖維的 結(jié)構(gòu),降低了纖維的質(zhì)量。隨著環(huán)保意識的增強,此種方法已不再被人們所倡導(dǎo)。
[0004] 為了克服這些缺點,改進工業(yè)上的脫膠工藝,近些年來國內(nèi)外對麻纖維的微生物 脫膠或是用微生物所產(chǎn)的酶脫膠進行了廣泛地研究,同時取得了不少研究成果。生物脫膠 作為一種新型的麻纖維的脫膠方法,其廣闊的開發(fā)前景是顯而易見的。生物脫膠主要是利 用微生物產(chǎn)生的果膠酶和半纖維素酶等分解膠質(zhì)成分,但不損傷纖維結(jié)構(gòu);具有生產(chǎn)成本 低,反應(yīng)條件溫和,污染少,節(jié)水節(jié)能等優(yōu)點。
[0005] 目前,國內(nèi)外對麻類的生物脫膠的研究多集中在苧麻,亞麻,紅麻等生物脫膠方 面,而對大麻纖維的生物脫膠研究卻相對較少,在以往的研究當中,大麻纖維處理周期過長 成為應(yīng)用于生產(chǎn)實際的主要瓶頸。因此,尋找更為合適的脫膠菌株和脫膠條件,縮短脫膠處 理時間成為當務(wù)之急。
[0006] 通過檢索,發(fā)現(xiàn)如下一篇與本發(fā)明專利申請相關(guān)的專利公開文獻:
[0007] 大麻脫膠工業(yè)用酶制劑的制備方法及其應(yīng)用(CN1374398),酶制劑的制備方法包 括高酶活菌種的斜面培養(yǎng)和保存、搖瓶培養(yǎng)、種子罐培養(yǎng)和發(fā)酵罐生產(chǎn),選用枯草芽孢桿菌 No. 13菌株,保藏號為CCTCC NO.M200038。大麻脫膠的方法包括發(fā)酵酶液過濾渣,稀釋酶液3 ~6倍,放入脫膠罐中,將稀釋酶液的pH調(diào)至7.5~9.0,原麻預(yù)處理,脫膠液與原麻浴比(10 ~20):1,脫膠時間2~10小時。本發(fā)明方法無污染,制成的大麻麻條平均長度、細度、斷裂強 度,均好于化學(xué)法。
[0008] 通過對比,本發(fā)明專利申請與上述專利公開文獻存在本質(zhì)的不同。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處,提供一株能同時生產(chǎn)果膠酶和半纖 維素酶的菌株,該菌株可以在溫和的條件下應(yīng)用于大麻纖維的生物脫膠中。
[0010] 為了實現(xiàn)上述目的,本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下:
[0011] -種能同時產(chǎn)果膠酶和半纖維素酶的枯草芽孢桿菌,名稱為16#,分類名稱為:枯 草芽孢桿菌Bacillus subtilis,保藏編號為:CGMCC No. 11898,保藏日期:2015年12月22 日,北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號,保藏單位:中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生 物中心。
[0012] 而且,步驟如下:
[0013]⑴菌株的篩選和分離:
[0014] 篩選來自處理生活垃圾的土壤中的菌株,并將其凍干成菌粉;
[0015] ①富集培養(yǎng):稱取采集到并凍干的菌粉置于大麻富集液體培養(yǎng)基中,所述菌粉與 大麻富集液體培養(yǎng)基的比例g:mL為1:150,在37°C下,180~220r/min富集培養(yǎng)24小時;
[0016] ②初篩:富集培養(yǎng)后的菌液按照10倍梯度稀釋:用滅過菌的生理鹽水將富集的菌 液稀釋成…'…'…'…'…'…',^不同稀釋度的樣品懸液屈蕩混勻后分別吸取 10- 5、10-6、10-7的菌懸液200yL,涂布于果膠篩選固體培養(yǎng)基或木聚糖篩選固體培養(yǎng)基中,在 37°C下倒置培養(yǎng)24小時,通過剛果紅顯色,測量透明圈直徑R和菌落直徑r,以R/r的比值來 初步判斷菌株的產(chǎn)酶能力;
[0017] 然后挑取長勢較好,R/r的比值較大的單菌落,點接到果膠篩選固體培養(yǎng)基或木聚 糖篩選固體培養(yǎng)基中,在37°C下倒置培養(yǎng)24小時,挑選R/r的比值較大的單菌落在LB固體培 養(yǎng)基中分尚純化;
[0018] 這樣分離純化后所得的細菌既能產(chǎn)果膠酶又能產(chǎn)木聚糖酶,然后把這些細菌保藏 于終質(zhì)量濃度為15%的甘油管中,于-80°C凍存?zhèn)溆茫?br>[0019] ③復(fù)篩:先將初篩所保藏的細菌在LB固體培養(yǎng)基中活化,以一環(huán)的接種量接種到 裝有50mL的液體LB的250mL的三角搖瓶的培養(yǎng)基中,37°C下?lián)u瓶培養(yǎng)16~24小時作為種子 液,菌體濃度0D6QQ達到2~2.6;
[0020] 稱取4-10g原麻,先沸水浴處理20~30min后裝入250mL的三角搖瓶中,接種5~ 10mL,以浴比1: 20~25加入含有0.2 %氮源的自來水,所述氮源為硫酸銨、硝酸銨、尿素、草 酸銨、碳酸銨中的一種或幾種的混合物,在37°C下、180~220r/min脫膠10~12小時后取出, 檢測殘膠率,選取殘膠率低的菌株作為脫膠菌,命名為16#;
[0021 ]⑵菌株的鑒定:
[0022]菌株的個體形態(tài)鑒定:對所篩得的脫膠細菌首先進行形態(tài)學(xué)鑒定,發(fā)現(xiàn)16#菌菌落 呈乳白色,菌落較大、粘稠、表面光滑不透明,邊緣整齊,較老的菌體表面起褶皺;經(jīng)過革蘭 氏染色都顯陽性,桿短小,且在菌體中央形成芽孢,初步斷定為芽孢桿菌屬;
[0023] 16SrDNA基因序列測定和分析:以16#菌株的基因組DNA為模板進行PCR擴增16S rDNA并測序;
[0024] 在NCBI上進行Blast分析表明:16#菌株的16S rDNA序列與枯草芽孢桿菌16S rDNA 序列的一致性高達99%,即得能同時產(chǎn)果膠酶和半纖維素酶的枯草芽孢桿菌。
[0025]而且,所述步驟⑴①中大麻富集液體培養(yǎng)基為:
[0026] 大麻粉末2.0g,硝酸銨0.2g,磷酸氫二鉀0.05g,硫酸鈉0.05g,蒸餾水100mL,pH 7.0〇
[0027] 而且,所述步驟⑴②中果膠篩選固體培養(yǎng)基為:果膠0.5g,硝酸銨0.2g,磷酸氫二 鉀0 · lg,硫酸鈉0 · 05g,硫酸鎂0 · 06g,瓊脂粉2 · 0g,剛果紅0 · 02g,蒸餾水100mL,pH 7 · 0~ 7.5;或者,所述步驟⑴②中木聚糖篩選固體培養(yǎng)基為:木聚糖l.Og,硝酸鉀O.lg,硫酸鎂 0.05g,氯化鈉0.05g,磷酸氫二鉀0.05g,剛果紅0.02g,瓊脂粉2.0g,蒸餾水100mL,pH 7.0~ 7.5。
[0028] 而且,所述步驟⑴②中LB固體培養(yǎng)基為:
[0029] 胰蛋白胨1 · 0g,酵母提取物0 · 5g,氯化鈉1 · 0g,瓊脂粉2 · 0g,蒸餾水100mL,pH 7 · 0。
[0030] 而且,所述步驟⑴③中液體LB為;
[0031 ] 胰蛋白胨l.〇g,酵母提取物〇.5g,氯化鈉 l.Og,蒸餾水100mL,pH 7.0。
[0032] -種如上所述的能同時產(chǎn)果膠酶和半纖維素酶的枯草芽孢桿菌在大麻脫膠中的 應(yīng)用。
[0033]而且,以所述枯草芽孢桿菌為脫膠菌接種于液體種子培養(yǎng)基,置于37°C搖床中, 180~220rpm培養(yǎng)至16~24h,以體積比5%~10%接種量轉(zhuǎn)接到脫膠培養(yǎng)基中,脫膠培養(yǎng)基 中含有麻類原麻纖維,麻類與脫膠培養(yǎng)基的比例g:mL為1:20~30,脫膠溫度為25~45°C,搖 床轉(zhuǎn)速為180~220rpm,脫膠24~96h,即得脫膠后的大麻。
[0034]而且,所述液體種子培養(yǎng)基為LB液體培養(yǎng)基、肉湯培養(yǎng)基或無機鹽培養(yǎng)基;或者, 所述麻類為大麻、苧麻或亞麻;或者,所述脫膠培養(yǎng)基為慪麻液,該慪麻液為水或者為含有 質(zhì)量百分數(shù)〇. 05%~1 %氮源的水溶液,或者,為0.05g/mL大麻,0.002g/mL氮源,pH 7.0。 [0035]而且,所述氮源為硫酸銨、硝酸銨、尿素、草酸銨、碳酸銨中的一種或幾種的混合 物;或者,所述液體種子培養(yǎng)基為LB液體培養(yǎng)基:1000mL培養(yǎng)基中含NaCl 1
當前第1頁1 2 3 
網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點贊!
1
桂东县| 东海县| 濮阳市| 麻江县| 峨眉山市| 平南县| 枣阳市| 合水县| 宁安市| 云浮市| 德阳市| 大名县| 曲周县| 望都县| 陕西省| 弥勒县| 富裕县| 恭城| 永城市| 冀州市| 南乐县| 贵南县| 千阳县| 洪湖市| 阜新| 潜山县| 石城县| 荔浦县| 凤凰县| 金塔县| 绥江县| 塘沽区| 太保市| 吴川市| 东至县| 香格里拉县| 霍林郭勒市| 湘阴县| 海盐县| 大同县| 濮阳市|