酪徑基是否能夠大幅度增強雙嗎I噪生物堿類化合物的抗污損活性呢？為了解答運個問題， 我們對化合物8的酪徑基進(jìn)行了乙酷化修飾，得到化合物8a(4-[二（1H-嗎I噪-3-基）甲 基-乙酸苯醋，DIM-Ph-4-OAc)，并對其進(jìn)行了抗污損活性測試。結(jié)果顯示該化合物8a的抗 紋藤壺和苔薛蟲幼蟲附著的ECs。值分別為4. 34和4. 50μM，其活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于化合物8。同 時，DIM-C1僅連有苯環(huán)結(jié)構(gòu)的化合物7的抗紋藤壺幼蟲附著活性巧Cse= 3. 57μΜ)也低于 DIM-Ph-4-OH。因此我們可W推測，酪徑基是增強該類化合物抗污損活性的重要官能團(tuán)。
[0081] 由表1可知，化合物3(3, 3'-二-1Η-嗎I噪-3-基-1,2-丙二醇）的抗紋藤壺污損 活性巧Cw= 18.57μΜ)最低。該化合物的分子結(jié)構(gòu)與其他已分離得到的生物堿類化合物 相比，最明顯的差別在于，與DIM-C1相連的燒控鏈的C2和C3分別連有醇徑基，運兩個醇徑 基使化合物3親脂性降低，極性變大。通常來說，親脂性較高的化合物可W通過被動擴散通 過有類脂層屏障的生物膜到達(dá)細(xì)胞內(nèi)而發(fā)揮作用。與其他7種雙嗎I噪生物堿化合物相比， 化合物3的低親脂性使其不易通過被動擴散進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部而發(fā)揮污損作用，從而導(dǎo)致在低 濃度條件下，其抗污損作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于其他7種化合物。Xu等（2010)報道，對于巧喃酬類化 合物而言，其抗污損作用會隨著與其α位相連碳鏈上的徑基數(shù)目的增多而降低，并由此合 成出了親脂性極高的高效低毒抗污損活性化合物下締徑酸內(nèi)醋化utenolide)。本文所提出 的低親脂性導(dǎo)致化合物3的抗污損作用降低與Xu等（2010)報道的低親脂性降低巧喃酬類 化合物的抗污損活性的現(xiàn)象一致。
[0082] 通過上述構(gòu)效關(guān)系初步分析可W推斷，雙嗎I噪亞甲基可能為該類化合物發(fā)揮 低毒、高效抗污損活性的基本結(jié)構(gòu)單位，親水性基團(tuán)的增加可能會降低雙嗎I噪生物堿的 抗污損活性，酪徑基作為活性增強基團(tuán)有效地改善了該類化合物的防污效果。同時， DIM-Ph-4-OH不僅是雙嗎I噪生物堿化合物中抗紋藤壺幼蟲附著作用最強的化合物，而且毒 性極低，較高的LCw/ECs。值、幼蟲復(fù)蘇率、W及小鼠大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞的存活率充分證明 了該化合物對祀向生物幼蟲附著的抑制作用并非通過化合物本身對幼體的劇烈毒性而實 現(xiàn)，而是通過一種特殊的作用機制實現(xiàn)。因此，與其他雙嗎I噪生物堿類似物相比，化合物8 在實際應(yīng)用中對生態(tài)環(huán)境造成的傷害相對較小，甚至無害。但是，在充分考慮到目前化合物 8的合成成本的情況下，進(jìn)一步的海區(qū)掛板實驗選擇了可W低價購買到大量純品、并且抗污 損活性較好且毒性較低的DIM,W進(jìn)行雙嗎I噪生物堿化合物實際應(yīng)用前景的評估。在后續(xù)研 究中，如果解決了DIM-Ph-4-OH的樣品供應(yīng)問題，我們也期待進(jìn)行該化合物的海區(qū)抗污損 效應(yīng)實驗。在構(gòu)效關(guān)系的探討中，由于從菌株UST4-50的發(fā)酵液EA粗浸膏中分離得到的化 合物量和數(shù)目均有限，只能對雙嗎I噪生物堿化合物的抗污損活性構(gòu)效關(guān)系進(jìn)行初步探討， 對于得到的一些猜測性的結(jié)果還需要在W后的研究中進(jìn)一步證實。
[008引表2.化合物l，8,8a和嗎I噪（indole)的抗苔薛蟲Bugulaneritina幼蟲附著的 活性。
[0084]
[0086]數(shù)據(jù)=平均數(shù)+SD(η= 3),卸<0. 05 ;**p<0. 01 (單因素AN0VA)
[0087] 例3-廣譜高效的海區(qū)抗污損效應(yīng)
[0088] 海區(qū)野外掛板抗污損測試是抗污損化合物由實驗室邁向?qū)嶋H應(yīng)用領(lǐng)域的關(guān)鍵一 步。在本申請中，圖3直觀地展示了涂有油漆的PVC板浸入海水5個月后的污損情況，將運 些照片使用生物統(tǒng)計軟件ImageJ進(jìn)行處理后，得到生物污損面積占整個涂漆面積的百分 比（圖4)。由圖4可知，5個月后，陰性對照組（即僅涂有底漆的PVC板）的表面污損生物 覆蓋率可達(dá)100%;比較陽性對照組（Sea-Nine211?)和實驗組值IM)生物污損面積發(fā)現(xiàn)， DIM在野外掛板實驗中的抗污損活性可W與商業(yè)防污殺蟲劑Sea-Nine211?相當(dāng)。DIM在濃 度為5% (w/w)時，生物污損面積占總面積的50%左右，而在濃度為10% (w/w)和15% (w/ W)時，僅有少數(shù)污損生物附著，污損面積僅有5%-18%。運充分顯示了DIM在野外掛板實 驗中具有良好的抗污損活性。此外，依據(jù)PVC板目前的污損情況分析，在未來幾個月中，化 合物DIM在10% (w/w)和15% (w/w)濃度條件下可能仍會持續(xù)發(fā)揮其抗污損作用，該化合 物在上述兩個濃度條件下的野外抗污損活性的保持時間應(yīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)長于5個月。DIM優(yōu)秀的海 區(qū)抗污損效應(yīng)充分說明了該化合物可有效地用于在天然環(huán)境中防止多種海洋生物的附著， 并且是能夠被滲入涂料中的防污劑的優(yōu)異候選物。Burgess等（2003)和C址ill等（2013) 報道，防污劑的滲出速率和保留量直接決定了防污漆的抗污損效果，而滲出速率是由防污 漆配方中高分子共聚物的含量決定的，運也就意味著在今后的雙嗎I噪類生物堿化合物的防 污漆實際應(yīng)用中，可W通過控制樹脂等基料的含量來調(diào)節(jié)滲出速率，由此提高DIM的抗污 損性能，從而在保證防污漆防污效果良好的前提下延長防污漆的使用壽命。
[008引討論
[0090] 本發(fā)明提供了一系列W3, 3' -二嗎I噪亞甲基為基本骨架，并且具有強抗污損活性 的雙嗎I噪生物堿類化合物。此外，化合物DIM和DIM-Ph-4-OH在完全抑制紋藤壺幼蟲附著的 濃度下對小鼠大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞無毒，從而說明運些化合物通過低毒甚至無毒的抗污損 作用機制發(fā)揮其抗污損活性，而不是通過其強烈的細(xì)胞毒活性抑制幼蟲附著。海區(qū)野外掛 板實驗顯示，該類化合物具有廣譜的抗生物污損作用，在一定質(zhì)量濃度下巧％，10%，15% (w/w))，其有機涂料的防污壽命可達(dá)3個月甚至更長。總而言之，本發(fā)明所述的DIM等雙嘲 噪生物堿類化合物具有相對簡單的化學(xué)結(jié)構(gòu)、良好的抗污損作用、W及對目標(biāo)污損生物的 化毒性等優(yōu)點，這使其成為被纔入到抗污損涂料中的理想的高效環(huán)保型防污劑。
[0091] 文獻(xiàn)
[0092]A.R.Mulla,S.，SudalaiA.，Y.Pathan,M.，A.Siddique,S.，M.Inamdar,S.，S. Chavan,S.，and民eddy,民.S.，2012.Efficient,rapidsynthesisofbis(indolyl)methane usingethylammoniumnitrateasanionoicliquid,ammoniumnitrateasanionic liquid.RSC.Advances. 2, 3525 - 3529.
[0093]Banerjee,S.，Kong,D.，Wang,Z.，Bao,B.，Hi1Iman,G.G.，Sarkar,F. H.，2011.Attenuationofmulti-targetedproliferation-linkedsignalingby 3, 3>-diindolylmethane(DIM)frombenchtoclinic.Muta.民es. 728, 47 - 66.
[0094]Bell,R.，Carmeli,S.，R.，Sar,N.，1994.VibrindoleA,ametaboliteofthe marinebacterium.Vibrioparahaemolyticus,isolatedfromthetoxicmucusofthe boxfishOstracioncubicus.J.Nat.Prod. 57, 1587 - 1590.
[0095]BurgessJ.G.，BoydK.，ArmstrongE.，JiangZ.，YanL.，BerggrenM.,May U.，PisacanaT.，GranmoA.，AdamsD.，2003.Thedevelopmentofamarinenatural product-basedantifoulingpaint.Biofouling19,197 - 205.
[0096]Cahill,P.L.，Heasman,K.，Jeffs,A.，Kuhajek,J.，2013.Laboratoryassessment oftheAFpotentialofasoluble-matrixpaintlacedwiththenaturalcompound polygodial.Biofouling29, 967-975.
[0097]Cai,S.X.，Li,D.H.，Zhu,T.J.，Wang,F.P.，Xiao,X.，Gu,Q.Q.，2010.Twonew indolealkaloidsfromthemarine-derivedbacteriumAeromonassp.CBlOl.Helv. Qiim.Acta. 93, 791 - 795.
[0098]Callow,M.E.，Callow,J.E.，2002.Marinebiofouling:astickyproblem. Biologist(Xondon) 49, 10 - 14.
[0099]Clare,A.S.，Rittschof,D.，Gerhart,D.J.，Maki,J.S.，1992.Molecular approachestonontoxicantifouling.J.Invert.民eprod.Dev. 22, 67-76.
[0100]Clark,民.，Lee,S.H.，2014.Synergisticanti-cancereffectsofcapsaicin and3,-diindolymethaneinhumancolorectalcancer,involvementofNF-kBand p53.FA沈BJ. 29, 644.
[0101]Davidson,I.C.，Brown,C.W.，Sytsma,M.D.，Ruiz,G.M.，2009.T^eroleof containershipsastransfermechanismsofmarinebiofoulingspecies.Biofouling 25,645 - 655.
[0102] Dobretsov,S.，Dahms,比U.，Qian,P.Y.，2006.Inhibitionofbiofoulingby marinemicroorganismsandtheirmetabolites.Biofouling22,43-54.
[0103]i^setani,N.，2004.Biofoulingandantifouling·Nat.F*rod.R邱·21，94 - 104.
[0104]Fusetani,N.，2011.Antifoulingmarinenaturalproducts.Nat.Prod. Rep. 28,400 - 410.
[0105] Hall, J. Μ·，Barhoover, Μ· A.，Kazmin, D.，McDonnell, D. Ρ·，Greenlee, W. F.，Thomas,民.S.，2010. Activation of the aryl-hydrocarbon receptor inhibits invasive and metastatic features of human breast cancer cells and promotes breast cancer cell differtiation. Mol. Endocrinol. 24,359-369.
[0106] Harder, T. N.，Thiyagarajan, V.，Qian, P. Y.，2001. Effect of cyprid age on the settlement of Balanus amphitrite Darwin in response to natural biofilms. Biofouling 17,211 -219.
[0107] Hiraishi, A.，1992. Direct automated sequencing of 16S rDNA amplified by polymerase chain-reaction from bacterial cultures without DNA purification. Lett. Appl. Microbiol. 15, 210 - 213.
[0108]