本發(fā)明屬于食品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及到一種面粉中糖脂含量的測定方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

植物半乳糖脂是指廣泛存在于植物體內(nèi)含有半乳糖殘基的極性脂類。半乳糖脂廣泛分布于植物界 ,是植物組織中最主要的糖脂成分，主要成分是單半乳糖脂和雙半乳糖脂。面粉中含有0.5%-3%的脂質(zhì)，其中糖脂占26.4%。而單半乳糖甘油二脂和雙半乳糖甘油二脂又占糖脂的69%。面粉中極性脂類能改善面團的持氣性，對增加面包體積起良好作用。脂類和碳水化合物都存在于小麥籽粒中，它們的互作對食品的烘烤品質(zhì)起著重要作用。脂類影響了淀粉凝膠的流變學(xué)特性，拖延面包心紋理結(jié)構(gòu)的形成，使面包膨脹時間延長。同時，在對小麥籽粒的硬度研究中發(fā)現(xiàn)面粉中極性脂，尤其是淀粉表面極性脂與籽粒硬度緊密相關(guān)。軟質(zhì)蛋白Friabilin其類脂結(jié)合區(qū)域是一個富含色氨酸結(jié)構(gòu)域，和淀粉表面易于結(jié)合，從而影響小麥硬度。色氨酸區(qū)d-螺旋間形成膜固著環(huán)與淀粉表面雙分子極性脂緊密結(jié)合，軟麥淀粉表面束縛態(tài)極性脂(糖脂和磷脂)含量明顯高于硬麥。

在半乳糖脂定量分析方面，多數(shù)是先通過柱層析和薄層析(TLC)分離純化得到半乳糖脂， 然后進行甲基化酸水解，再利用氣液色譜技術(shù)析脂肪酸甲酯含量，最后換算成半乳糖脂的含量。但操作繁瑣，技術(shù)要求高，結(jié)果重現(xiàn)性差，成功率低。也有用高分辨質(zhì)譜ESI-QTOF/MS來定量分析，但是這種方法所使用的儀器比較昂貴，不能大批量和大范圍條件下應(yīng)用。另外，也有利用半乳糖脂含有大量的多不飽和脂肪酸,在200nm波長左右處有光吸收高峰的特點,用反相高效液相色譜法（HPLC)來分析測定；這種測定方法快捷方便，但設(shè)備費用較高，限制了其應(yīng)用的范圍。為了快速方便的測量面粉和淀粉中的糖脂含量，也有人提出直接測定總糖含量的方法來估算其糖脂含量，但這種方法不夠精確，誤差較大。因此，建立一種準(zhǔn)確、快速、且成本低的測定面粉和淀粉中糖脂含量的方法十分必要。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于提供一種面粉中糖脂含量的測定方法及其應(yīng)用，該方法能夠快速準(zhǔn)確地測定面粉或淀粉中極性糖脂含量。

為實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

本發(fā)明提供了一種面粉中糖脂含量的測定方法，包括以下步驟：

（1）采用比色法測定面粉中相應(yīng)組分的總糖含量；

（2）結(jié)合步驟（1）中得到的總糖含量，根據(jù)方程y₁=0.0271x-0.0288計算出雙半乳糖甘油二脂的含量，其中x為總糖含量，y₁為雙半乳糖甘油二脂含量；結(jié)合步驟（1）中得到的總糖含量，根據(jù)方程y₂=2.3567x-1.2032計算出單半乳糖甘油二脂的含量，其中x為總糖含量，y₂單半乳糖甘油二脂含量。

上述的面粉中糖脂含量的測定方法在小麥粉中的應(yīng)用，具體步驟如下：

（1）先將40~80目的小麥粉加水飽和的正丁醇溶液中攪拌浸漬得到混合物a，小麥粉與水飽和的正丁醇溶液的質(zhì)量比為1:（6~7），浸漬時間為1~2h；然后將混合物a于溫度30~40℃下振蕩浸提48~72 h，接著于3000~4000 rpm離心15~20 min，得到黃色透明的上清液；

（2）將步驟（1）得到的上清液于溫度35~40℃濃縮至4~5mL，得到濃縮液b；

（3）將步驟（2）得到的濃縮液b用萃取劑c進行萃取，萃取劑c是由氯仿、甲醇和水按照體積比為2:1:0.75混合配置而成，萃取后分為上相層和下相層，取下相層黃色溶液備用；

（4）步驟（3）中上相層的混合液接著采用萃取劑c進行萃取分相，下相層黃色溶液，上相層的混合液接著采用萃取劑c進行萃取，重復(fù)用萃取劑c操作2~4次，合并下相層黃色溶液得到混合液d，接著使用氮氣將混合液d吹干得到混合物e；

（5）取1.5~2.5 mL氯仿溶液洗滌混合物e，氮氣吹干；

（6）重復(fù)步驟（5）操作2~3次，得到物質(zhì)f；

（7）將步驟（6）得到的物質(zhì)f溶于0.8~2mL甲醇中得到粗脂；

（8）取200~500μL步驟（7）中得到的粗脂，在規(guī)格200mm * 200mm的硅膠板上距離底部1~3cm處點樣，在展開劑的作用下展板，展開劑是由氯仿：甲醇：冰乙酸：丙酮：水按照體積比為10:2:2:2:1配置而成；

（9）在紫外燈254 nm波長照射下能看到不同的斑點，在標(biāo)準(zhǔn)品的對照下，分別找出目的物單半乳糖甘油二脂和雙半乳糖甘油二脂所在條帶，挖下；

（10）分別將目的物所在的條帶置于離心管中，用10~20mL溶解液g于溫度40℃下溶解5~10min，溶解液g是由氯仿與甲醇按照體積比為2:1配置而成，然后過濾，將濾液置于稱重后的離心管中；

（11）重復(fù)步驟（10），然后分別合并濾液；

（12）將步驟（11）中得到的濾液用氮氣吹干，對離心管進行稱重；

（13）用差量法分別計算出目的物的總重量；

（14）將目的物分別溶解于1 M KOH-乙醇溶液中，目的物與1 M KOH-乙醇溶液的質(zhì)量比為1:（1~2），接著于溫度70℃保溫20~30 min，然后加入3~4mL 1 mol/L 鹽酸，接著于溫度99℃保溫15 min，最后加入7.5~14mL 1mol/L KOH；

（15）移取2~6ml的步驟（14）得到溶液中的上清液置于不同離心管中，于溫度在60~80℃下蒸干，分別用3~4ml蒸餾水洗滌，向每一個離心管中均加入3~4ml菲林試劑，于溫度99℃保溫10min，加入4mL硫酸-鉬酸銨顯色劑，分別定容至10 mL；

（16）將步驟（15）的溶液分別在600nm波長下測定吸光值；

（17）根據(jù)步驟（16）測定的吸光值按照半乳糖標(biāo)線計算不同離心管中總糖含量；

（18）結(jié)合步驟（17）中得到的總糖含量，根據(jù)方程y₁=0.0271x-0.0288計算出雙半乳糖甘油二脂的含量，其中x為總糖含量，y₁為雙半乳糖甘油二脂含量；結(jié)合步驟（17）中得到的總糖含量，根據(jù)方程y₂=2.3567x-1.2032計算出單半乳糖甘油二脂的含量，其中x為總糖含量，y₂單半乳糖甘油二脂含量。

本發(fā)明與與其他方法相比優(yōu)點在于：

本發(fā)明方法測量簡便、快捷、準(zhǔn)確，提供一種簡便快速準(zhǔn)確的測定糖脂含量的方法。

具體實施方式

實施例1

一種面粉中糖脂含量的測定方法在小麥粉中的應(yīng)用，具體步驟如下：

（1）先將40~80 目10.000 g小麥品種天民198面粉加60mL水飽和的正丁醇溶液中攪拌浸漬得到混合物a，浸漬時間為1.5h；然后將混合物a于溫度35℃下振蕩浸提48 h，接著于4000 rpm離心15 min，得到黃色透明的上清液；

（2）將步驟（1）得到的上清液于溫度35℃濃縮至5mL，得到濃縮液b；

（3）將步驟（2）得到的濃縮液b用萃取劑c進行萃取，萃取劑c是由氯仿、甲醇和水按照體積比為2:1:0.75混合配置而成，萃取后分為上相層和下相層，取下相層黃色溶液備用；

（4）步驟（3）中上相層的混合液接著采用萃取劑c進行萃取分相，下相層黃色溶液，上相層的混合液接著采用萃取劑c進行萃取，重復(fù)用萃取劑c操作2次，合并下相層黃色溶液得到混合液d，接著使用氮氣將混合液d吹干得到混合物e；

（5）取1.5 mL氯仿溶液洗滌混合物e，氮氣吹干；

（6）重復(fù)步驟（5）操作2次，得到物質(zhì)f；

（7）將步驟（6）得到的物質(zhì)f溶于1.6mL甲醇中得到粗脂；

（8）取400μL步驟（7）中得到的粗脂，在規(guī)格200mm * 200mm的硅膠板上距離底部2cm處點樣，在展開劑的作用下展板，展開劑是由氯仿：甲醇：冰乙酸：丙酮：水按照體積比為10:2:2:2:1配置而成；在距離層析板邊緣0.5 cm處，停止層析，取出薄層層析板放置在實驗臺上，用吹風(fēng)機吹干；

（9）在紫外燈254 nm波長照射下能看到不同的斑點，在標(biāo)準(zhǔn)品的對照下，分別找出目的物單半乳糖甘油二脂和雙半乳糖甘油二脂所在條帶，挖下；

（10）將目的物所在的條帶分別置于不同離心管中，用15mL溶解液g于溫度40℃下溶解5min，溶解液g是由氯仿與甲醇按照體積比為2:1配置而成，然后過濾，將濾液置于稱重后的離心管中；

（11）重復(fù)步驟（10），然后分別合并濾液；

（12）將步驟（11）中得到的濾液用氮氣吹干，對離心管進行稱重；

（13）用差量法分別計算出不同目的物的總重量；

（14）分別將目的物溶解于1 M KOH-乙醇溶液中，目的物與1 M KOH-乙醇溶液的質(zhì)量比為1:2，接著于溫度70℃保溫20~30 min，然后加入3mL 1 mol/L 鹽酸，接著于溫度99℃保溫15 min，最后加入7.5mL 1mol/L KOH水溶液；

（15）分別移取步驟（14）中溶液2ml上清液，在80℃下蒸干，用3 ml蒸餾水洗滌，向離心管中加入3ml菲林試劑，99℃水浴10 min，加入4 ml硫酸-鉬酸銨顯色劑，定容至10mL；

（16）將步驟（15）的溶液分別在600nm波長下測定吸光值；

（17）根據(jù)步驟（16）測定的吸光值，按照半乳糖標(biāo)線計算糖含量；天民198中雙半乳糖甘油二脂的糖含量為3.040 mg/g，單半乳糖甘油二脂的糖含量為0.7483 mg/g；

（18）結(jié)合步驟（17）中得到的不同組分總糖含量，根據(jù)方程y₁=0.0271x-0.0288計算出雙半乳糖甘油二脂的含量，其中x為雙半乳糖甘油二脂的糖含量，y₁為雙半乳糖甘油二脂含量；結(jié)合步驟（17）中得到的總糖含量，根據(jù)方程y₂=2.3567x-1.2032計算出單半乳糖甘油二脂的含量，其中x為單半乳糖甘油二脂的糖含量，y₂單半乳糖甘油二脂含量；根據(jù)公式計算出天民198中雙半乳糖甘油二脂的含量為0.0536mg/g，單半乳糖甘油二脂的含量為0.5603 mg/g；

（19）重復(fù)步驟（1）到（11），將步驟（11）中得到的濾液用氮氣吹干；

（20）將步驟19中獲得物質(zhì)溶于800 ul甲醇中，在檢測波長為 205 nm，流動相95%的甲醇，5%的0.2%乙酸溶劑系統(tǒng),流速1mL/min,柱溫為室溫,Symmetry?c18(25Omm×4.6mm), 進樣量為10 uL的條件下，對樣品進行高效液相測定，用外標(biāo)法進行定量分析，分別得出極性脂單半乳糖甘油二脂和雙半乳糖甘油二脂的含量；天民198中雙半乳糖甘油二脂的含量為0.0588 mg/g，單半乳糖甘油二脂的含量為0.6005 mg/g。

實施例2

一種面粉中糖脂含量的測定方法在小麥粉中的應(yīng)用，具體步驟如下：

（1）先將40 目10.000 g小麥品種周麥32面粉加60mL水飽和的正丁醇溶液中攪拌浸漬得到混合物a，浸漬時間為1.5h；然后將混合物a于溫度35℃下振蕩浸提48 h，接著于4000 rpm離心15 min，得到黃色透明的上清液；

（2）將步驟（1）得到的上清液于溫度40℃濃縮至5mL，得到濃縮液b；

（3）將步驟（2）得到的濃縮液b用萃取劑c進行萃取，萃取劑c是由氯仿、甲醇和水按照體積比為2:1:0.75混合配置而成，萃取后分為上相層和下相層，取下相層黃色溶液備用；

（4）步驟（3）中上相層的混合液接著采用萃取劑c進行萃取分相，下相層黃色溶液，上相層的混合液接著采用萃取劑c進行萃取，重復(fù)用萃取劑c操作2次，合并下相層黃色溶液得到混合液d，接著使用氮氣將混合液d吹干得到混合物e；

（5）取1.5 mL氯仿溶液洗滌混合物e，氮氣吹干；

（6）重復(fù)步驟（5）操作2次，得到物質(zhì)f；

（7）將步驟（6）得到的物質(zhì)f溶于1.6mL甲醇中得到粗脂；

（8）取400μL步驟（7）中得到的粗脂，在規(guī)格200mm * 200mm的硅膠板上距離底部2cm處點樣，在展開劑的作用下展板，展開劑是由氯仿：甲醇：冰乙酸：丙酮：水按照體積比為10:2:2:2:1配置而成；在距離層析板邊緣0.5 cm處，停止層析，取出薄層層析板放置在實驗臺上，用吹風(fēng)機吹干；

（9）在紫外燈254 nm波長照射下能看到不同的斑點，在標(biāo)準(zhǔn)品的對照下，找出單半乳糖甘油二脂和雙半乳糖甘油二脂目的物所在條帶，挖下；

（10）分別將目的物所在的條帶置于不同離心管中，用15mL溶解液g于溫度40℃下溶解5min，溶解液g是由氯仿與甲醇按照體積比為2:1配置而成，然后過濾，將濾液置于稱重后的離心管中；

（11）重復(fù)步驟（10），然后分別合并濾液；

（12）將步驟（11）中得到的濾液用氮氣吹干，對離心管進行稱重；

（13）分別用差量法計算出不同目的物的總重量；

（14）分別將目的物溶解于1 M KOH-乙醇溶液中，目的物與1 M KOH-乙醇溶液的質(zhì)量比為1:2，接著于溫度70℃保溫20~30 min，然后加入3mL 1 mol/L 鹽酸，接著于溫度99℃保溫15 min，最后加入7.5mL 1mol/L KOH水溶液；

（15）移取步驟（14）中溶液2ml上清液，在80℃下蒸干，用3 ml蒸餾水洗滌，向離心管中加入3ml菲林試劑，99℃水浴10 min，加入4 ml硫酸-鉬酸銨顯色劑，定容至10 mL；

（16）將步驟（15）的溶液分別在600nm波長下測定吸光值；

（17）根據(jù)步驟（16）測定的吸光值，按照半乳糖標(biāo)線計算糖含量；周麥32中雙半乳糖甘油二脂的糖含量為2.271mg/g，單半乳糖甘油二脂的糖含量為0.8617 mg/g；

（18）結(jié)合步驟（17）中得到的總糖含量，根據(jù)方程y₁=0.0271x-0.0288計算出雙半乳糖甘油二脂的含量，其中x為雙半乳糖甘油二脂的糖含量，y₁為雙半乳糖甘油二脂含量；結(jié)合步驟（17）中得到的總糖含量，根據(jù)方程y₂=2.3567x-1.2032計算出單半乳糖甘油二脂的含量，其中x為單半乳糖甘油二脂的糖含量，y₂單半乳糖甘油二脂含量；周麥32中雙半乳糖甘油二脂的含量為0.0327 mg/g，單乳糖甘油二脂的含量為0.8276 mg/g；

（19）重復(fù)步驟（1）到（11），將步驟（11）中得到的濾液用氮氣吹干；

（20）將步驟19中獲得物質(zhì)溶于800 ul甲醇中，在檢測波長為 205 nm，流動相95%的甲醇，5%的0.2%乙酸溶劑系統(tǒng),流速1mL/min,柱溫為室溫,Symmetry?c18(250mm×4.6mm), 進樣量為10uL的條件下，對樣品進行高效液相測定，用外標(biāo)法進行定量分析，分別得出極性脂單半乳糖甘油二脂和雙半乳糖甘油二脂的含量。周麥32中雙半乳糖甘油二脂的含量為0.0301mg/g，單半乳糖甘油二脂的含量為0.8215 mg/g。

實施例3

一種面粉中糖脂含量的測定方法在小麥粉中的應(yīng)用，具體步驟如下：

（1）先將40 目10.000 g小麥品種百農(nóng)207面粉加60mL水飽和的正丁醇溶液中攪拌浸漬得到混合物a，浸漬時間為1.5h；然后將混合物a于溫度35℃下振蕩浸提48 h，接著于4000 rpm離心15 min，得到黃色透明的上清液；

（2）將步驟（1）得到的上清液于溫度40℃濃縮至5mL，得到濃縮液b；

（3）將步驟（2）得到的濃縮液b用萃取劑c進行萃取，萃取劑c是由氯仿、甲醇和水按照體積比為2:1:0.75混合配置而成，萃取后分為上相層和下相層，取下相層黃色溶液備用；

（4）步驟（3）中上相層的混合液接著采用萃取劑c進行萃取分相，下相層黃色溶液，上相層的混合液接著采用萃取劑c進行萃取，重復(fù)用萃取劑c操作2次，合并下相層黃色溶液得到混合液d，接著使用氮氣將混合液d吹干得到混合物e；

（5）取1.5 mL氯仿溶液洗滌混合物e，氮氣吹干；

（6）重復(fù)步驟（5）操作2次，得到物質(zhì)f；

（7）將步驟（6）得到的物質(zhì)f溶于1.6mL甲醇中得到粗脂；

（8）取400μL步驟（7）中得到的粗脂，在規(guī)格200mm * 200mm的硅膠板上距離底部2cm處點樣，在展開劑的作用下展板，展開劑是由氯仿：甲醇：冰乙酸：丙酮：水按照體積比為10:2:2:2:1配置而成；在距離層析板邊緣0.5 cm處，停止層析，取出薄層層析板放置在實驗臺上，用吹風(fēng)機吹干；

（9）在紫外燈254 nm波長照射下能看到不同的斑點，在標(biāo)準(zhǔn)品的對照下，找出單半乳糖甘油二脂和雙半乳糖甘油二脂目的物所在條帶，挖下；

（10）分別將目的物所在的條帶置于離心管中，用15mL溶解液g于溫度40℃下溶解5min，溶解液g是由氯仿與甲醇按照體積比為2:1配置而成，然后過濾，將濾液置于稱重后的離心管中；

（11）重復(fù)步驟（10），然后分別合并濾液；

（12）將步驟（11）中得到的濾液用氮氣吹干，對離心管進行稱重；

（13）用差量法分別計算出不同目的物的總重量；

（14）分別將目的物溶解于1 M KOH-乙醇溶液中，目的物與1 M KOH-乙醇溶液的質(zhì)量比為1:2，接著于溫度70℃保溫20~30 min，然后加入3mL 1 mol/L 鹽酸，接著于溫度99℃保溫15 min，最后加入7.5mL 1mol/L KOH水溶液；

（15）移取步驟（14）中溶液2ml上清液，在80℃下蒸干，用3 ml蒸餾水洗滌，向離心管中加入3ml菲林試劑，99℃水浴10 min，加入4 ml硫酸-鉬酸銨顯色劑，定容至10 mL；

（16）將步驟（15）的溶液分別在600nm波長下測定吸光值；

（17）根據(jù)步驟（16）測定的吸光值，按照半乳糖標(biāo)線計算糖含量；百農(nóng)207中雙半乳糖甘油二脂的糖含量為2.234mg/g，單半乳糖甘油二脂的糖含量為0.7937 mg/g；

（18）結(jié)合步驟（17）中得到的總糖含量，根據(jù)方程y₁=0.0271x-0.0288計算出雙半乳糖甘油二脂的含量，其中x為雙半乳糖甘油二脂的糖含量，y₁為雙半乳糖甘油二脂含量；結(jié)合步驟（17）中得到的總糖含量，根據(jù)方程y₂=2.3567x-1.2032計算出單半乳糖甘油二脂的含量，其中x為單半乳糖甘油二脂的糖含量，y₂單半乳糖甘油二脂含量；百農(nóng)207中雙半乳糖甘油二脂的含量為0.0317 mg/g，單乳糖甘油二脂的含量為0.6673 mg/g；

（19）重復(fù)步驟（1）到（11），將步驟（11）中得到的濾液用氮氣吹干；

（20）將步驟19中獲得物質(zhì)溶于800 ul甲醇中，在檢測波長為 205 nm，流動相95%的甲醇，5%的0.2%乙酸溶劑系統(tǒng),流速1mL/min,柱溫為室溫,Symmetry?c18(250mm×4.6mm), 進樣量為10uL的條件下，對樣品進行高效液相測定，用外標(biāo)法進行定量分析，分別得出極性脂單半乳糖甘油二脂和雙半乳糖甘油二脂的含量；百農(nóng)207中雙半乳糖甘油二脂的含量為0.0204 mg/g，單半乳糖甘油二脂的含量為0.6508 mg/g。

實施例4

一種面粉中糖脂含量的測定方法在小麥粉中的應(yīng)用，具體步驟如下：

（1）先將40 目10.000 g小麥品種豐德存1號面粉加60mL水飽和的正丁醇溶液中攪拌浸漬得到混合物a，浸漬時間為1.5h；然后將混合物a于溫度35℃下振蕩浸提48 h，接著于4000 rpm離心15 min，得到黃色透明的上清液；

（2）將步驟（1）得到的上清液于溫度40℃濃縮至5mL，得到濃縮液b；

（3）將步驟（2）得到的濃縮液b用萃取劑c進行萃取，萃取劑c是由氯仿、甲醇和水按照體積比為2:1:0.75混合配置而成，萃取后分為上相層和下相層，取下相層黃色溶液備用；

（4）步驟（3）中上相層的混合液接著采用萃取劑c進行萃取分相，下相層黃色溶液，上相層的混合液接著采用萃取劑c進行萃取，重復(fù)用萃取劑c操作2次，合并下相層黃色溶液得到混合液d，接著使用氮氣將混合液d吹干得到混合物e；

（5）取1.5 mL氯仿溶液洗滌混合物e，氮氣吹干；

（6）重復(fù)步驟（5）操作2次，得到物質(zhì)f；

（7）將步驟（6）得到的物質(zhì)f溶于1.6mL甲醇中得到粗脂；

（8）取400μL步驟（7）中得到的粗脂，在規(guī)格200mm * 200mm的硅膠板上距離底部2cm處點樣，在展開劑的作用下展板，展開劑是由氯仿：甲醇：冰乙酸：丙酮：水按照體積比為10:2:2:2:1配置而成；在距離層析板邊緣0.5 cm處，停止層析，取出薄層層析板放置在實驗臺上，用吹風(fēng)機吹干；

（9）在紫外燈254 nm波長照射下能看到不同的斑點，在標(biāo)準(zhǔn)品的對照下，找出單半乳糖甘油二脂和雙半乳糖甘油二脂目的物所在條帶，挖下；

（10）分別將目的物所在的條帶置于不同離心管中，用15mL溶解液g于溫度40℃下溶解5min，溶解液g是由氯仿與甲醇按照體積比為2:1配置而成，然后過濾，將濾液置于稱重后的離心管中；

（11）重復(fù)步驟（10），然后分別合并濾液；

（12）將步驟（11）中得到的濾液用氮氣吹干，對離心管進行稱重；

（13）分別用差量法計算出不同目的物的總重量；

（14）分別將目的物溶解于1 M KOH-乙醇溶液中，目的物與1 M KOH-乙醇溶液的質(zhì)量比為1:2，接著于溫度70℃保溫20~30 min，然后加入3mL 1 mol/L 鹽酸，接著于溫度99℃保溫15 min，最后加入7.5mL 1mol/L KOH水溶液；

（15）移取步驟（14）中溶液2ml上清液，在80℃下蒸干，用3 ml蒸餾水洗滌，向離心管中加入3ml菲林試劑，99℃水浴10 min，加入4 ml硫酸-鉬酸銨顯色劑，定容至10mL；

（16）將步驟（15）的溶液分別在600nm波長下測定吸光值；

（17）根據(jù)步驟（16）測定的吸光值，按照半乳糖標(biāo)線計算糖含量；豐德存1號中雙半乳糖甘油二脂的糖含量為2.088mg/g，單半乳糖甘油二脂的糖含量為0.8390mg/g；

（18）結(jié)合步驟（17）中得到的總糖含量，根據(jù)方程y₁=0.0271x-0.0288計算出雙半乳糖甘油二脂的含量，其中x為雙半乳糖甘油二脂的糖含量，y₁為雙半乳糖甘油二脂含量；結(jié)合步驟（17）中得到的總糖含量，根據(jù)方程y₂=2.3567x-1.2032計算出單半乳糖甘油二脂的含量，其中x為單半乳糖甘油二脂的糖含量，y₂單半乳糖甘油二脂含量；豐德存1號中雙半乳糖甘油二脂的含量為0.0278mg/g，單乳糖甘油二脂的含量為0.7741mg/g；

（19）重復(fù)步驟（1）到（11），將步驟（11）中得到的濾液用氮氣吹干；

（20）將步驟19中獲得物質(zhì)溶于800 ul甲醇中，在檢測波長為 205 nm，流動相95%的甲醇，5%的0.2%乙酸溶劑系統(tǒng),流速1mL/min,柱溫為室溫,Symmetry?c18(250mm×4.6mm), 進樣量為10uL的條件下，對樣品進行高效液相測定，用外標(biāo)法進行定量分析，分別得出極性脂單半乳糖甘油二脂和雙半乳糖甘油二脂的含量。豐德存1號中雙半乳糖甘油二脂的含量為0.0263mg/g，單半乳糖甘油二脂的含量為0.7821 mg/g。

實施例5

一種面粉中糖脂含量的測定方法在小麥粉中的應(yīng)用，具體步驟如下：

（1）先將40 目10.000 g小麥品種鄭麥21面粉加60mL水飽和的正丁醇溶液中攪拌浸漬得到混合物a，浸漬時間為1.5h；然后將混合物a于溫度35℃下振蕩浸提48 h，接著于4000 rpm離心15 min，得到黃色透明的上清液；

（2）將步驟（1）得到的上清液于溫度40℃濃縮至5mL，得到濃縮液b；

（3）將步驟（2）得到的濃縮液b用萃取劑c進行萃取，萃取劑c是由氯仿、甲醇和水按照體積比為2:1:0.75混合配置而成，萃取后分為上相層和下相層，取下相層黃色溶液備用；

（4）步驟（3）中上相層的混合液接著采用萃取劑c進行萃取分相，下相層黃色溶液，上相層的混合液接著采用萃取劑c進行萃取，重復(fù)用萃取劑c操作2次，合并下相層黃色溶液得到混合液d，接著使用氮氣將混合液d吹干得到混合物e；

（5）取1.5 mL氯仿溶液洗滌混合物e，氮氣吹干；

（6）重復(fù)步驟（5）操作2次，得到物質(zhì)f；

（7）將步驟（6）得到的物質(zhì)f溶于1.6mL甲醇中得到粗脂；

（8）取400μL步驟（7）中得到的粗脂，在規(guī)格200mm * 200mm的硅膠板上距離底部2cm處點樣，在展開劑的作用下展板，展開劑是由氯仿：甲醇：冰乙酸：丙酮：水按照體積比為10:2:2:2:1配置而成；在距離層析板邊緣0.5 cm處，停止層析，取出薄層層析板放置在實驗臺上，用吹風(fēng)機吹干；

（9）在紫外燈254 nm波長照射下能看到不同的斑點，在標(biāo)準(zhǔn)品的對照下，找出單半乳糖甘油二脂和雙半乳糖甘油二脂目的物所在條帶，挖下；

（10）分別將目的物所在的條帶置于不同離心管中，用15mL溶解液g于溫度40℃下溶解5min，溶解液g是由氯仿與甲醇按照體積比為2:1配置而成，然后過濾，將濾液置于稱重后的離心管中；

（11）重復(fù)步驟（10），然后分別合并濾液；

（12）將步驟（11）中得到的濾液用氮氣吹干，對離心管進行稱重；

（13）分別用差量法計算出不同目的物的總重量；

（14）分別將目的物溶解于1 M KOH-乙醇溶液中，目的物與1 M KOH-乙醇溶液的質(zhì)量比為1:2，接著于溫度70℃保溫20~30 min，然后加入3mL 1 mol/L 鹽酸，接著于溫度99℃保溫15 min，最后加入7.5mL 1mol/L KOH水溶液；

（15）移取步驟（14）中溶液2ml上清液，在80℃下蒸干，用3 ml蒸餾水洗滌，向離心管中加入3ml菲林試劑，99℃水浴10 min，加入4 ml硫酸-鉬酸銨顯色劑，定容至10mL；

（16）將步驟（15）的溶液分別在600nm波長下測定吸光值；

（17）根據(jù)步驟（16）測定的吸光值，按照半乳糖標(biāo)線計算糖含量；鄭麥21中雙半乳糖甘油二脂的糖含量為2.271mg/g，單半乳糖甘油二脂的糖含量為0.5669mg/g；

（18）結(jié)合步驟（17）中得到的總糖含量，根據(jù)方程y₁=0.0271x-0.0288計算出雙半乳糖甘油二脂的含量，其中x為雙半乳糖甘油二脂的糖含量，y₁為雙半乳糖甘油二脂含量；結(jié)合步驟（17）中得到的總糖含量，根據(jù)方程y₂=2.3567x-1.2032計算出單半乳糖甘油二脂的含量，其中x為單半乳糖甘油二脂的糖含量，y₂單半乳糖甘油二脂含量；鄭麥21中雙半乳糖甘油二脂的含量為0.0327 mg/g，單乳糖甘油二脂的含量為0.1328 mg/g；

（19）重復(fù)步驟（1）到（11），將步驟（11）中得到的濾液用氮氣吹干；

（20）將步驟19中獲得物質(zhì)溶于800 ul甲醇中，在檢測波長為 205 nm，流動相95%的甲醇，5%的0.2%乙酸溶劑系統(tǒng),流速1mL/min,柱溫為室溫,Symmetry?c18(250mm×4.6mm), 進樣量為10uL的條件下，對樣品進行高效液相測定，用外標(biāo)法進行定量分析，分別得出極性脂單半乳糖甘油二脂和雙半乳糖甘油二脂的含量。鄭麥21中雙半乳糖甘油二脂的含量為0.0310mg/g，單半乳糖甘油二脂的含量為0.1203 mg/g。

實施例6

一種面粉中糖脂含量的測定方法在小麥粉中的應(yīng)用，具體步驟如下：

（1）先將40 目10.000 g小麥品種鄭麥113面粉加60mL水飽和的正丁醇溶液中攪拌浸漬得到混合物a，浸漬時間為1.5h；然后將混合物a于溫度35℃下振蕩浸提48 h，接著于4000 rpm離心15 min，得到黃色透明的上清液；

（2）將步驟（1）得到的上清液于溫度40℃濃縮至5mL，得到濃縮液b；

（3）將步驟（2）得到的濃縮液b用萃取劑c進行萃取，萃取劑c是由氯仿、甲醇和水按照體積比為2:1:0.75混合配置而成，萃取后分為上相層和下相層，取下相層黃色溶液備用；

（4）步驟（3）中上相層的混合液接著采用萃取劑c進行萃取分相，下相層黃色溶液，上相層的混合液接著采用萃取劑c進行萃取，重復(fù)用萃取劑c操作2次，合并下相層黃色溶液得到混合液d，接著使用氮氣將混合液d吹干得到混合物e；

（5）取1.5 mL氯仿溶液洗滌混合物e，氮氣吹干；

（6）重復(fù)步驟（5）操作2次，得到物質(zhì)f；

（7）將步驟（6）得到的物質(zhì)f溶于1.6mL甲醇中得到粗脂；

（8）取400μL步驟（7）中得到的粗脂，在規(guī)格200mm * 200mm的硅膠板上距離底部2cm處點樣，在展開劑的作用下展板，展開劑是由氯仿：甲醇：冰乙酸：丙酮：水按照體積比為10:2:2:2:1配置而成；在距離層析板邊緣0.5 cm處，停止層析，取出薄層層析板放置在實驗臺上，用吹風(fēng)機吹干；

（9）在紫外燈254 nm波長照射下能看到不同的斑點，在標(biāo)準(zhǔn)品的對照下，找出單半乳糖甘油二脂和雙半乳糖甘油二脂目的物所在條帶，挖下；

（10）分別將目的物所在的條帶置于不同離心管中，用15mL溶解液g于溫度40℃下溶解5min，溶解液g是由氯仿與甲醇按照體積比為2:1配置而成，然后過濾，將濾液置于稱重后的離心管中；

（11）重復(fù)步驟（10），然后分別合并濾液；

（12）將步驟（11）中得到的濾液用氮氣吹干，對離心管進行稱重；

（13）分別用差量法計算出不同目的物的總重量；

（14）分別將目的物溶解于1 M KOH-乙醇溶液中，目的物與1 M KOH-乙醇溶液的質(zhì)量比為1:2，接著于溫度70℃保溫20~30 min，然后加入3mL 1 mol/L 鹽酸，接著于溫度99℃保溫15 min，最后加入7.5mL 1mol/L KOH水溶液；

（15）移取步驟（14）中溶液2ml上清液，在80℃下蒸干，用3 ml蒸餾水洗滌，向離心管中加入3ml菲林試劑，99℃水浴10 min，加入4 ml硫酸-鉬酸銨顯色劑，定容至10mL；

（16）將步驟（15）的溶液分別在600nm波長下測定吸光值；

（17）根據(jù)步驟（16）測定的吸光值，按照半乳糖標(biāo)線計算糖含量；鄭113中雙半乳糖甘油二脂的糖含量為2.821mg/g，單半乳糖甘油二脂的糖含量為0.839 mg/g；

（18）結(jié)合步驟（17）中得到的總糖含量，根據(jù)方程y₁=0.0271x-0.0288計算出雙半乳糖甘油二脂的含量，其中x為雙半乳糖甘油二脂的糖含量，y₁為雙半乳糖甘油二脂含量；結(jié)合步驟（17）中得到的總糖含量，根據(jù)方程y₂=2.3567x-1.2032計算出單半乳糖甘油二脂的含量，其中x為單半乳糖甘油二脂的糖含量，y₂單半乳糖甘油二脂含量；鄭麥113中雙半乳糖甘油二脂的含量為0.0476mg/g，單乳糖甘油二脂的含量為0.7741mg/g；

（19）重復(fù)步驟（1）到（11），將步驟（11）中得到的濾液用氮氣吹干；

（20）將步驟19中獲得物質(zhì)溶于800 ul甲醇中，在檢測波長為 205 nm，流動相95%的甲醇，5%的0.2%乙酸溶劑系統(tǒng),流速1mL/min,柱溫為室溫,Symmetry?c18(250mm×4.6mm), 進樣量為10uL的條件下，對樣品進行高效液相測定，用外標(biāo)法進行定量分析，分別得出極性脂單半乳糖甘油二脂和雙半乳糖甘油二脂的含量。鄭113中雙半乳糖甘油二脂的含量為0.0443mg/g，單半乳糖甘油二脂的含量為0.7601 mg/g。

實施例7

一種面粉中糖脂含量的測定方法在小麥粉中的應(yīng)用，具體步驟如下：

（1）先將40 目10.000 g小麥品種貴農(nóng)257面粉加60mL水飽和的正丁醇溶液中攪拌浸漬得到混合物a，浸漬時間為1.5h；然后將混合物a于溫度35℃下振蕩浸提48 h，接著于4000 rpm離心15 min，得到黃色透明的上清液；

（2）將步驟（1）得到的上清液于溫度40℃濃縮至5mL，得到濃縮液b；

（3）將步驟（2）得到的濃縮液b用萃取劑c進行萃取，萃取劑c是由氯仿、甲醇和水按照體積比為2:1:0.75混合配置而成，萃取后分為上相層和下相層，取下相層黃色溶液備用；

（4）步驟（3）中上相層的混合液接著采用萃取劑c進行萃取分相，下相層黃色溶液，上相層的混合液接著采用萃取劑c進行萃取，重復(fù)用萃取劑c操作2次，合并下相層黃色溶液得到混合液d，接著使用氮氣將混合液d吹干得到混合物e；

（5）取1.5 mL氯仿溶液洗滌混合物e，氮氣吹干；

（6）重復(fù)步驟（5）操作2次，得到物質(zhì)f；

（7）將步驟（6）得到的物質(zhì)f溶于1.6mL甲醇中得到粗脂；

（8）取400μL步驟（7）中得到的粗脂，在規(guī)格200mm * 200mm的硅膠板上距離底部2cm處點樣，在展開劑的作用下展板，展開劑是由氯仿：甲醇：冰乙酸：丙酮：水按照體積比為10:2:2:2:1配置而成；在距離層析板邊緣0.5 cm處，停止層析，取出薄層層析板放置在實驗臺上，用吹風(fēng)機吹干；

（9）在紫外燈254 nm波長照射下能看到不同的斑點，在標(biāo)準(zhǔn)品的對照下，找出單半乳糖甘油二脂和雙半乳糖甘油二脂目的物所在條帶，挖下；

（10）分別將目的物所在的條帶置于不同離心管中，用15mL溶解液g于溫度40℃下溶解5min，溶解液g是由氯仿與甲醇按照體積比為2:1配置而成，然后過濾，將濾液置于稱重后的離心管中；

（11）重復(fù)步驟（10），然后分別合并濾液；

（12）將步驟（11）中得到的濾液用氮氣吹干，對離心管進行稱重；

（13）分別用差量法計算出不同目的物的總重量；

（14）分別將目的物溶解于1 M KOH-乙醇溶液中，目的物與1 M KOH-乙醇溶液的質(zhì)量比為1:2，接著于溫度70℃保溫20~30 min，然后加入3mL 1 mol/L 鹽酸，接著于溫度99℃保溫15 min，最后加入7.5mL 1mol/L KOH水溶液；

（15）移取步驟（14）中溶液2ml上清液，在80℃下蒸干，用3 ml蒸餾水洗滌，向離心管中加入3ml菲林試劑，99℃水浴10 min，加入4 ml硫酸-鉬酸銨顯色劑，定容至10mL；

（16）將步驟（15）的溶液分別在600nm波長下測定吸光值；

（17）根據(jù)步驟（16）測定的吸光值，按照半乳糖標(biāo)線計算糖含量；貴農(nóng)257中雙半乳糖甘油二脂的糖含量為2.564mg/g，單半乳糖甘油二脂的糖含量為0.802 mg/g；

（18）結(jié)合步驟（17）中得到的總糖含量，根據(jù)方程y₁=0.0271x-0.0288計算出雙半乳糖甘油二脂的含量，其中x為雙半乳糖甘油二脂的糖含量，y₁為雙半乳糖甘油二脂含量；結(jié)合步驟（17）中得到的總糖含量，根據(jù)方程y₂=2.3567x-1.2032計算出單半乳糖甘油二脂的含量，其中x為單半乳糖甘油二脂的糖含量，y₂單半乳糖甘油二脂含量；貴農(nóng)257中雙半乳糖甘油二脂的含量為0.0407 mg/g，單乳糖甘油二脂的含量為0.6869 mg/g；

（19）重復(fù)步驟（1）到（11），將步驟（11）中得到的濾液用氮氣吹干；

（20）將步驟19中獲得物質(zhì)溶于800 ul甲醇中，在檢測波長為 205 nm，流動相95%的甲醇，5%的0.2%乙酸溶劑系統(tǒng),流速1mL/min,柱溫為室溫,Symmetry?c18(250mm×4.6mm), 進樣量為10uL的條件下，對樣品進行高效液相測定，用外標(biāo)法進行定量分析，分別得出極性脂單半乳糖甘油二脂和雙半乳糖甘油二脂的含量。貴農(nóng)257中雙半乳糖甘油二脂的含量為0.0431mg/g，單半乳糖甘油二脂的含量為0.7022mg/g。

實施例8

一種面粉中糖脂含量的測定方法在小麥粉中的應(yīng)用，具體步驟如下：

（1）先將40 目10.000 g小麥品種揚麥158面粉加60mL水飽和的正丁醇溶液中攪拌浸漬得到混合物a，浸漬時間為1.5h；然后將混合物a于溫度35℃下振蕩浸提48 h，接著于4000 rpm離心15 min，得到黃色透明的上清液；

（2）將步驟（1）得到的上清液于溫度40℃濃縮至5mL，得到濃縮液b；

（3）將步驟（2）得到的濃縮液b用萃取劑c進行萃取，萃取劑c是由氯仿、甲醇和水按照體積比為2:1:0.75混合配置而成，萃取后分為上相層和下相層，取下相層黃色溶液備用；

（4）步驟（3）中上相層的混合液接著采用萃取劑c進行萃取分相，下相層黃色溶液，上相層的混合液接著采用萃取劑c進行萃取，重復(fù)用萃取劑c操作2次，合并下相層黃色溶液得到混合液d，接著使用氮氣將混合液d吹干得到混合物e；

（5）取1.5 mL氯仿溶液洗滌混合物e，氮氣吹干；

（6）重復(fù)步驟（5）操作2次，得到物質(zhì)f；

（7）將步驟（6）得到的物質(zhì)f溶于1.6mL甲醇中得到粗脂；

（8）取400μL步驟（7）中得到的粗脂，在規(guī)格200mm * 200mm的硅膠板上距離底部2cm處點樣，在展開劑的作用下展板，展開劑是由氯仿：甲醇：冰乙酸：丙酮：水按照體積比為10:2:2:2:1配置而成；在距離層析板邊緣0.5 cm處，停止層析，取出薄層層析板放置在實驗臺上，用吹風(fēng)機吹干；

（9）在紫外燈254 nm波長照射下能看到不同的斑點，在標(biāo)準(zhǔn)品的對照下，找出單半乳糖甘油二脂和雙半乳糖甘油二脂目的物所在條帶，挖下；

（10）分別將目的物所在的條帶置于不同離心管中，用15mL溶解液g于溫度40℃下溶解5min，溶解液g是由氯仿與甲醇按照體積比為2:1配置而成，然后過濾，將濾液置于稱重后的離心管中；

（11）重復(fù)步驟（10），然后分別合并濾液；

（12）將步驟（11）中得到的濾液用氮氣吹干，對離心管進行稱重；

（13）分別用差量法計算出不同目的物的總重量；

（14）分別將目的物溶解于1 M KOH-乙醇溶液中，目的物與1 M KOH-乙醇溶液的質(zhì)量比為1:2，接著于溫度70℃保溫20~30 min，然后加入3mL 1 mol/L 鹽酸，接著于溫度99℃保溫15 min，最后加入7.5mL 1mol/L KOH水溶液；

（15）移取步驟（14）中溶液2ml上清液，在80℃下蒸干，用3 ml蒸餾水洗滌，向離心管中加入3ml菲林試劑，99℃水浴10 min，加入4 ml硫酸-鉬酸銨顯色劑，定容至10mL；

（16）將步驟（15）的溶液分別在600nm波長下測定吸光值；

（17）根據(jù)步驟（16）測定的吸光值，按照半乳糖標(biāo)線計算糖含量；揚麥158中雙半乳糖甘油二脂的糖含量為2.125mg/g，單半乳糖甘油二脂的糖含量為0.615mg/g；

（18）結(jié)合步驟（17）中得到的總糖含量，根據(jù)方程y₁=0.0271x-0.0288計算出雙半乳糖甘油二脂的含量，其中x為雙半乳糖甘油二脂的糖含量，y₁為雙半乳糖甘油二脂含量；結(jié)合步驟（17）中得到的總糖含量，根據(jù)方程y₂=2.3567x-1.2032計算出單半乳糖甘油二脂的含量，其中x為單半乳糖甘油二脂的糖含量，y₂單半乳糖甘油二脂含量；揚麥158中雙半乳糖甘油二脂的含量為0.0288mg/g，單乳糖甘油二脂的含量為0.247mg/g；

（19）重復(fù)步驟（1）到（11），將步驟（11）中得到的濾液用氮氣吹干；

（20）將步驟19中獲得物質(zhì)溶于800 ul甲醇中，在檢測波長為 205 nm，流動相95%的甲醇，5%的0.2%乙酸溶劑系統(tǒng),流速1mL/min,柱溫為室溫,Symmetry?c18(250mm×4.6mm), 進樣量為10uL的條件下，對樣品進行高效液相測定，用外標(biāo)法進行定量分析，分別得出極性脂單半乳糖甘油二脂和雙半乳糖甘油二脂的含量。揚麥158中雙半乳糖甘油二脂的含量為0.0306mg/g，單半乳糖甘油二脂的含量為0.225 mg/g。

實施例9

一種面粉中糖脂含量的測定方法在小麥粉中的應(yīng)用，具體步驟如下：

（1）先將40 目10.000 g小麥品種綿麥11面粉加60mL水飽和的正丁醇溶液中攪拌浸漬得到混合物a，浸漬時間為1.5h；然后將混合物a于溫度35℃下振蕩浸提48 h，接著于4000 rpm離心15 min，得到黃色透明的上清液；

（2）將步驟（1）得到的上清液于溫度40℃濃縮至5mL，得到濃縮液b；

（3）將步驟（2）得到的濃縮液b用萃取劑c進行萃取，萃取劑c是由氯仿、甲醇和水按照體積比為2:1:0.75混合配置而成，萃取后分為上相層和下相層，取下相層黃色溶液備用；

（4）步驟（3）中上相層的混合液接著采用萃取劑c進行萃取分相，下相層黃色溶液，上相層的混合液接著采用萃取劑c進行萃取，重復(fù)用萃取劑c操作2次，合并下相層黃色溶液得到混合液d，接著使用氮氣將混合液d吹干得到混合物e；

（5）取1.5 mL氯仿溶液洗滌混合物e，氮氣吹干；

（6）重復(fù)步驟（5）操作2次，得到物質(zhì)f；

（7）將步驟（6）得到的物質(zhì)f溶于1.6mL甲醇中得到粗脂；

（8）取400μL步驟（7）中得到的粗脂，在規(guī)格200mm * 200mm的硅膠板上距離底部2cm處點樣，在展開劑的作用下展板，展開劑是由氯仿：甲醇：冰乙酸：丙酮：水按照體積比為10:2:2:2:1配置而成；在距離層析板邊緣0.5 cm處，停止層析，取出薄層層析板放置在實驗臺上，用吹風(fēng)機吹干；

（9）在紫外燈254 nm波長照射下能看到不同的斑點，在標(biāo)準(zhǔn)品的對照下，找出單半乳糖甘油二脂和雙半乳糖甘油二脂目的物所在條帶，挖下；

（10）分別將目的物所在的條帶置于不同離心管中，用15mL溶解液g于溫度40℃下溶解5min，溶解液g是由氯仿與甲醇按照體積比為2:1配置而成，然后過濾，將濾液置于稱重后的離心管中；

（11）重復(fù)步驟（10），然后分別合并濾液；

（12）將步驟（11）中得到的濾液用氮氣吹干，對離心管進行稱重；

（13）分別用差量法計算出不同目的物的總重量；

（14）分別將目的物溶解于1 M KOH-乙醇溶液中，目的物與1 M KOH-乙醇溶液的質(zhì)量比為1:2，接著于溫度70℃保溫20~30 min，然后加入3mL 1 mol/L 鹽酸，接著于溫度99℃保溫15 min，最后加入7.5mL 1mol/L KOH水溶液；

（15）移取步驟（14）中溶液2ml上清液，在80℃下蒸干，用3 ml蒸餾水洗滌，向離心管中加入3ml菲林試劑，99℃水浴10 min，加入4 ml硫酸-鉬酸銨顯色劑，定容至10mL；

（16）將步驟（15）的溶液分別在600nm波長下測定吸光值；

（17）根據(jù)步驟（16）測定的吸光值，按照半乳糖標(biāo)線計算糖含量；綿麥11中雙半乳糖甘油二脂的糖含量為2.967mg/g，單半乳糖甘油二脂的糖含量為0.8163 mg/g；

（18）結(jié)合步驟（17）中得到的總糖含量，根據(jù)方程y₁=0.0271x-0.0288計算出雙半乳糖甘油二脂的含量，其中x為雙半乳糖甘油二脂的糖含量，y₁為雙半乳糖甘油二脂含量；結(jié)合步驟（17）中得到的總糖含量，根據(jù)方程y₂=2.3567x-1.2032計算出單半乳糖甘油二脂的含量，其中x為單半乳糖甘油二脂的糖含量，y₂單半乳糖甘油二脂含量；綿麥11中雙半乳糖甘油二脂的含量為0.0516mg/g，單乳糖甘油二脂的含量為0.7206 mg/g；

（19）重復(fù)步驟（1）到（11），將步驟（11）中得到的濾液用氮氣吹干；

（20）將步驟19中獲得物質(zhì)溶于800 ul甲醇中，在檢測波長為 205 nm，流動相95%的甲醇，5%的0.2%乙酸溶劑系統(tǒng),流速1mL/min,柱溫為室溫,Symmetry?c18(250mm×4.6mm), 進樣量為10uL的條件下，對樣品進行高效液相測定，用外標(biāo)法進行定量分析，分別得出極性脂單半乳糖甘油二脂和雙半乳糖甘油二脂的含量。綿麥11中雙半乳糖甘油二脂的含量為0.0608mg/g，單半乳糖甘油二脂的含量為0.7115 mg/g。

實施例10

一種面粉中糖脂含量的測定方法在小麥粉中的應(yīng)用，具體步驟如下：

（1）先將40 目10.000 g小麥品種中育12面粉加60mL水飽和的正丁醇溶液中攪拌浸漬得到混合物a，浸漬時間為1.5h；然后將混合物a于溫度35℃下振蕩浸提48 h，接著于4000 rpm離心15 min，得到黃色透明的上清液；

（2）將步驟（1）得到的上清液于溫度40℃濃縮至5mL，得到濃縮液b；

（3）將步驟（2）得到的濃縮液b用萃取劑c進行萃取，萃取劑c是由氯仿、甲醇和水按照體積比為2:1:0.75混合配置而成，萃取后分為上相層和下相層，取下相層黃色溶液備用；

（4）步驟（3）中上相層的混合液接著采用萃取劑c進行萃取分相，下相層黃色溶液，上相層的混合液接著采用萃取劑c進行萃取，重復(fù)用萃取劑c操作2次，合并下相層黃色溶液得到混合液d，接著使用氮氣將混合液d吹干得到混合物e；

（5）取1.5 mL氯仿溶液洗滌混合物e，氮氣吹干；

（6）重復(fù)步驟（5）操作2次，得到物質(zhì)f；

（7）將步驟（6）得到的物質(zhì)f溶于1.6mL甲醇中得到粗脂；

（8）取400μL步驟（7）中得到的粗脂，在規(guī)格200mm * 200mm的硅膠板上距離底部2cm處點樣，在展開劑的作用下展板，展開劑是由氯仿：甲醇：冰乙酸：丙酮：水按照體積比為10:2:2:2:1配置而成；在距離層析板邊緣0.5 cm處，停止層析，取出薄層層析板放置在實驗臺上，用吹風(fēng)機吹干；

（9）在紫外燈254 nm波長照射下能看到不同的斑點，在標(biāo)準(zhǔn)品的對照下，找出單半乳糖甘油二脂和雙半乳糖甘油二脂目的物所在條帶，挖下；

（10）分別將目的物所在的條帶置于不同離心管中，用15mL溶解液g于溫度40℃下溶解5min，溶解液g是由氯仿與甲醇按照體積比為2:1配置而成，然后過濾，將濾液置于稱重后的離心管中；

（11）重復(fù)步驟（10），然后分別合并濾液；

（12）將步驟（11）中得到的濾液用氮氣吹干，對離心管進行稱重；

（13）分別用差量法計算出不同目的物的總重量；

（14）分別將目的物溶解于1 M KOH-乙醇溶液中，目的物與1 M KOH-乙醇溶液的質(zhì)量比為1:2，接著于溫度70℃保溫20~30 min，然后加入3mL 1 mol/L 鹽酸，接著于溫度99℃保溫15 min，最后加入7.5mL 1mol/L KOH水溶液；

（15）移取步驟（14）中溶液2ml上清液，在80℃下蒸干，用3 ml蒸餾水洗滌，向離心管中加入3ml菲林試劑，99℃水浴10 min，加入4 ml硫酸-鉬酸銨顯色劑，定容至10mL；

（16）將步驟（15）的溶液分別在600nm波長下測定吸光值；

（17）根據(jù)步驟（16）測定的吸光值，按照半乳糖標(biāo)線計算糖含量；中育12中雙半乳糖甘油二脂的糖含量為2.564mg/g，單半乳糖甘油二脂的糖含量為0.7937 mg/g；

（18）結(jié)合步驟（17）中得到的總糖含量，根據(jù)方程y₁=0.0271x-0.0288計算出雙半乳糖甘油二脂的含量，其中x為雙半乳糖甘油二脂的糖含量，y₁為雙半乳糖甘油二脂含量；結(jié)合步驟（17）中0.7937得到的總糖含量，根據(jù)方程y₂=2.3567x-1.2032計算出單半乳糖甘油二脂的含量，其中x為單半乳糖甘油二脂的糖含量，y₂單半乳糖甘油二脂含量；中育12中雙半乳糖甘油二脂的含量為0.0407 mg/g，單乳糖甘油二脂的含量為0.6672 mg/g；

（19）重復(fù)步驟（1）到（11），將步驟（11）中得到的濾液用氮氣吹干；

（20）將步驟19中獲得物質(zhì)溶于800 ul甲醇中，在檢測波長為 205 nm，流動相95%的甲醇，5%的0.2%乙酸溶劑系統(tǒng),流速1mL/min,柱溫為室溫,Symmetry?c18(250mm×4.6mm), 進樣量為10uL的條件下，對樣品進行高效液相測定，用外標(biāo)法進行定量分析，分別得出極性脂單半乳糖甘油二脂和雙半乳糖甘油二脂的含量。中育12中雙半乳糖甘油二脂的含量為0.0361mg/g，單半乳糖甘油二脂的含量為0.6865 mg/g。

表1 該方法的單半乳糖甘油二脂計算值與實際測量值結(jié)果對比

表2 該方法的雙半乳糖甘油二脂計算值與實際測量值結(jié)果對比