1.一種面粉中糖脂含量的測(cè)定方法,其特征在于包括以下步驟:
(1)采用比色法測(cè)定面粉中的相應(yīng)組分的總糖含量;
(2)結(jié)合步驟(1)中得到的各組分總糖含量,根據(jù)方程y1=0.0271x-0.0288計(jì)算出雙半乳糖甘油二脂的含量,其中x為總糖含量,y1為雙半乳糖甘油二脂含量;結(jié)合步驟(1)中得到的各組分總糖含量,根據(jù)方程y2=2.3567x-1.2032計(jì)算出單半乳糖甘油二脂的含量,其中x為總糖含量,y2單半乳糖甘油二脂含量。
2.如權(quán)利要求1中所述的面粉中糖脂含量的測(cè)定方法在小麥粉中的應(yīng)用,其特征在于具體步驟如下:
(1)先將40~80目的小麥粉加水飽和的正丁醇溶液中攪拌浸漬得到混合物a,小麥粉與水飽和的正丁醇溶液的質(zhì)量比為1:(6~7),浸漬時(shí)間為1~2h;然后將混合物a于溫度30~40℃下振蕩浸提48~72 h,接著于3000~4000 rpm離心15~20 min,得到黃色透明的上清液;
(2)將步驟(1)得到的上清液于溫度35~40℃濃縮至4~5mL,得到濃縮液b;
(3)將步驟(2)得到的濃縮液b用萃取劑c進(jìn)行萃取,萃取劑c是由氯仿、甲醇和水按照體積比為2:1:0.75混合配置而成,萃取后分為上相層和下相層,取下相層黃色溶液備用;
(4)步驟(3)中上相層的混合液接著采用萃取劑c進(jìn)行萃取分相,下相層黃色溶液,上相層的混合液接著采用萃取劑c進(jìn)行萃取,重復(fù)用萃取劑c操作2~4次,合并下相層黃色溶液得到混合液d,接著使用氮?dú)鈱⒒旌弦篸吹干得到混合物e;
(5)取1.5~2.5 mL氯仿溶液洗滌混合物e,氮?dú)獯蹈桑?/p>
(6)重復(fù)步驟(5)操作2~3次,得到物質(zhì)f;
(7)將步驟(6)得到的物質(zhì)f溶于0.8~2mL甲醇中得到粗脂;
(8)取200~500μL步驟(7)中得到的粗脂,在規(guī)格200mm * 200mm的硅膠板上距離底部1~3cm處點(diǎn)樣,在展開劑的作用下展板,展開劑是由氯仿:甲醇:冰乙酸:丙酮:水按照體積比為10:2:2:2:1配置而成;
(9)在紫外燈254 nm波長照射下能看到不同的斑點(diǎn),在標(biāo)準(zhǔn)品的對(duì)照下,分別找出目的物單半乳糖甘油二脂和雙半乳糖甘油二脂所在條帶,挖下;
(10)將目的物所在的條帶分別置于不同離心管中,分別用10~20mL溶解液g于溫度40℃下溶解5~10min,溶解液g是由氯仿與甲醇按照體積比為2:1配置而成,然后過濾,將濾液置于稱重后的不同離心管中;
(11)重復(fù)步驟(10),然后分別合并濾液;
(12)將步驟(11)中得到的濾液用氮?dú)獯蹈桑瑢?duì)離心管進(jìn)行稱重;
(13)用差量法分別計(jì)算出目的物單半乳糖甘油二脂及雙半乳糖甘油油二脂的重量;
(14)分別將目的物溶解于1 M KOH-乙醇溶液中,目的物與1 M KOH-乙醇溶液的質(zhì)量比為1:(1~2),接著于溫度70℃保溫20~30 min,然后加入3~4mL 1 mol/L 鹽酸,接著于溫度99℃保溫15 min,最后加入7.5~14mL 1mol/L KOH;
(15)分別移取2~6ml步驟(14)得到溶液中的上清液置于不同離心管中,于溫度在60~80℃下蒸干,用3~4ml蒸餾水洗滌,向離心管中加入3~4ml菲林試劑,于溫度99℃保溫10min,加入4mL硫酸-鉬酸銨顯色劑,定容至10 mL;
(16)將步驟(15)的溶液分別在600nm波長下測(cè)定吸光值;
(17)根據(jù)步驟(16)測(cè)定的吸光值按照半乳糖標(biāo)線計(jì)算不同離心管中總糖含量;
(18)結(jié)合步驟(17)中得到的各組分總糖含量,根據(jù)方程y1=0.0271x-0.0288計(jì)算出雙半乳糖甘油二脂的含量,其中x為總糖含量,y1為雙半乳糖甘油二脂含量;結(jié)合步驟(17)中得到的各組分總糖含量,根據(jù)方程y2=2.3567x-1.2032計(jì)算出單半乳糖甘油二脂的含量,其中x為總糖含量,y2單半乳糖甘油二脂含量。