1.一種模擬動(dòng)物胃環(huán)境內(nèi)植酸酶解磷含量測定方法,包括以下步驟:首先將底物各原料混合后粉碎,所述底物由以下原料按照質(zhì)量百分比組成:玉米60%、豆粕20%、棉粕10%及DDGS 10%,添加待測植酸酶與所述底物混合,同時(shí)作空白對照,分別加入到胃蛋白酶鹽酸溶液中,40℃恒溫水浴,冷卻至室溫后再測定溶液pH,準(zhǔn)確移取12mL上清液至離心管中,并準(zhǔn)確量取剩余上清液,將離心管中的上清液離心,得上清液A,再準(zhǔn)確移取離心管中上清液A 1mL,加入釩鉬酸胺顯色劑,再加蒸餾水定容,搖勻靜置,用分光光度計(jì)比色測定,最后從磷標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得待測植酸酶磷濃度和空白對照中磷濃度,計(jì)算在模擬胃環(huán)境中添加植酸酶飼料底物多釋放的水溶性磷含量。
2.如權(quán)利要求1所述的一種模擬動(dòng)物胃環(huán)境內(nèi)植酸酶解磷含量測定方法,其具體實(shí)現(xiàn)步驟如下:
(1)首先制備底物:所述底物由如下原料按照質(zhì)量百分比組成:玉米60%、豆粕20%、棉粕10%及DDGS 10%;按照上述配比稱取各原料混合后粉碎,并過40目篩;
(2)分別稱取3~7g所述步驟(1)制備的底物各置于250mL碘量瓶中,按1000FYT/kg的酶活添加量添加0.1~1mg的待測植酸酶加入到其中一個(gè)碘量瓶中為處理組,同時(shí)平行做空白對照,即底物中不添加待測植酸酶;
(3)然后將100mL胃蛋白酶鹽酸溶液緩慢加入至碘量瓶中制成消化液,緩慢攪拌后測定消化液的pH,當(dāng)pH大于3.5,用pH 2.0的鹽酸溶液將消化液調(diào)整至3.0~3.5之間,嚴(yán)密封口,所述鹽酸溶液為取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為36%的濃鹽酸0.83mL,定容至1000mL;
(4)40℃恒溫水浴搖床2h,冷卻至室溫后再測定溶液pH,pH應(yīng)保持在4.0~4.5之間;
(5)準(zhǔn)確移取12mL碘量瓶中的上清液至離心管中,同時(shí),準(zhǔn)確量取碘量瓶中剩余上清液的體積,將上清液4000rpm離心10min,得上清液A;
(6)準(zhǔn)確移取離心管中1mL上清液A至50mL比色管中,加入10mL釩鉬酸胺顯色劑,加蒸餾水定容至50mL,搖勻靜置10min;
(7)用分光光度計(jì)400nm比色測定,從磷標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得磷的濃度,即待測植酸酶磷濃度C1和空白對照磷濃度C2,;
(8)磷標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:準(zhǔn)確移取磷標(biāo)準(zhǔn)溶液0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL分別置于50mL容量瓶中,分別加入釩鉬酸銨顯色劑10mL,用水稀釋至刻度,搖勻,靜置10min,在400nm波長下用分光光度計(jì)測各溶液的吸光度,以磷含量為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),繪制磷標(biāo)準(zhǔn)曲線;
(9)計(jì)算在模擬胃環(huán)境中添加植酸酶飼料底物多釋放的水溶性磷含量p,公式為:
其中,C1:待測植酸酶磷濃度(μg/mL);C2:空白對照磷濃度(μg/mL);v1:添加待測植酸酶碘量瓶中剩余上清液的體積(mL);V2:空白對照碘量瓶中剩余上清液的體積(mL);m:底物樣品重量(g)。
3.如權(quán)利要求1或2所述的一種模擬動(dòng)物胃環(huán)境內(nèi)植酸酶解磷含量測定方法,其特征在于,所述的待測植酸酶為非耐高溫型,固態(tài)顆粒狀,酶活為5000~50000FYT/g。
4.如權(quán)利要求1或2所述的一種模擬動(dòng)物胃環(huán)境內(nèi)植酸酶解磷含量測定方法,其特征在于,所述胃蛋白酶鹽酸溶液是將胃蛋白酶與鹽酸溶液混合,混合后pH為2.0,胃蛋白酶的質(zhì)量百分比濃度為0.2%,所述鹽酸溶液為取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為36%的濃鹽酸0.83mL,定容至1000mL,pH為2.0。
5.如權(quán)利要求1或2所述的一種模擬動(dòng)物胃環(huán)境內(nèi)植酸酶解磷含量測定方法,其特征在于,所述釩鉬酸胺顯色劑的配制具體步驟為:稱取偏釩酸銨1.25g,加水200mL,加熱溶解不能沸騰,冷卻后加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為65%的濃硝酸250mL溶解制成溶液A;另外稱取鉬酸銨25g,加水400mL加熱溶解,冷卻,制成溶液B,將溶液A和溶液B混合,定容至1000mL。
6.如權(quán)利要求2所述的一種模擬動(dòng)物胃環(huán)境內(nèi)植酸酶解磷含量測定方法,其特征在于,所述磷標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制具體步驟為:取105℃烘至恒重的磷酸二氫鉀0.2195g溶于蒸餾水中,加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為65%的濃硝酸3mL,定容至1000mL。