體的實(shí)施例中，所述試劑盒包括生物素化的抗A I抗體、 標(biāo)記鏈霉親和素的ABEI、A I抗原（或其與蛋白載體的連接物）包被的磁球、低點(diǎn)校準(zhǔn)品和 尚點(diǎn)校準(zhǔn)品。
[0031] 例如，在本發(fā)明的一個(gè)具體的實(shí)施例中，所述試劑盒包括標(biāo)記抗A I抗體的ABEI、 生物素化的A I抗原（或其與蛋白載體的連接物）、鏈霉親和素包被的磁球、低點(diǎn)校準(zhǔn)品和 尚點(diǎn)校準(zhǔn)品。
[0032] 本發(fā)明還提供了一種用于制備如上所述的試劑盒的方法，所述方法包括：將組分 A和組分B中的一種直接或間接標(biāo)記示蹤標(biāo)記物，將另一種直接或間接包被磁球。
[0033] 根據(jù)本發(fā)明提供的方法，所述間接標(biāo)記包括將示蹤標(biāo)記物通過異硫氰酸熒光素與 抗異硫氰酸熒光素抗體體系或鏈霉親和素與生物素體系標(biāo)記所述組分A或組分B。
[0034] 根據(jù)本發(fā)明提供的方法，所述間接包被包括將所述組分A或組分B通過異硫氰酸 熒光素與抗異硫氰酸熒光素抗體體系或鏈霉親和素與生物素體系間接包被磁球。
[0035] 在一些具體實(shí)施方案中，用于制備所述試劑盒的方法包括以下步驟：i)A I抗原 (或其與蛋白載體的連接物）標(biāo)記步驟，利用ABEI直接或間接地標(biāo)記A I抗原（或其與蛋 白載體的連接物）；和ii)抗A I抗體包被磁球步驟，將抗A I抗體直接或間接地包被磁球。
[0036] 在另一些具體實(shí)施方案中，用于制備所述試劑盒的方法包括以下步驟：i'）抗A I 抗體標(biāo)記步驟，利用ABEI直接或間接地標(biāo)記抗A I抗體；和ii'）A I抗原（或其與蛋白載 體的連接物）包被磁球步驟，將A I抗原（或其與蛋白載體的連接物）直接或間接地包被 磁球。
[0037] 在一些實(shí)施方案，在步驟i)中，將ABEI通過FITC與抗FITC抗體體系或鏈霉親和 素與生物素體系間接標(biāo)記A I抗原（或其與蛋白載體的連接物）；和/或在步驟ii)中，將 抗A I抗體通過FITC與抗FITC抗體體系或鏈霉親和素與生物素體系間接包被磁球。
[0038] 在一些實(shí)施方案，在步驟i'）中，將ABEI通過FITC與抗FITC抗體體系或鏈霉親 和素與生物素體系間接標(biāo)記抗A I抗體；和/或在步驟ii'）中，將A I抗原（或其與蛋白 載體的連接物）通過FITC與抗FITC抗體體系或鏈霉親和素與生物素體系間接包被磁球。
[0039] 根據(jù)本發(fā)明的試劑盒制備方法還可以包括低點(diǎn)校準(zhǔn)品和高點(diǎn)校準(zhǔn)品的配置，還可 以進(jìn)一步包括試劑盒的組裝。
[0040] 根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種檢測A I濃度的方法，所述方法包括使用如上所述的 試劑盒通過化學(xué)發(fā)光免疫法對待測樣品中的A I濃度進(jìn)行檢測。
[0041] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述檢測A I濃度的方法包括使用如上所述的試劑盒，通過 化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測A I濃度。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述方法全自動 地進(jìn)行。根據(jù)本發(fā)明，所述化學(xué)發(fā)光免疫分析儀優(yōu)選為Maglumi系列化學(xué)發(fā)光免疫分析儀 (深圳新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司生產(chǎn)）。
[0042] 具體地，針對A I抗原（或其與蛋白載體的連接物）上標(biāo)記ABEI，利用抗A I抗 體包被磁球的情況，進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測的檢測步驟可以包括：1)獲取待測樣本。待測樣本 可為直接得到的血清、血漿及全血，也可以是通過抽取人體血樣進(jìn)行分離得到，或經(jīng)過酶抑 制劑處理后的樣本；2)利用帶ABEI標(biāo)記的A I抗原（或其與蛋白載體的連接物）和帶有 抗A I抗體的磁球與待測樣本混合后進(jìn)行溫育，得到反應(yīng)產(chǎn)物；3)清洗后上機(jī)檢測化學(xué)發(fā) 光信號，得到相應(yīng)的光信號數(shù)據(jù)；4)分析相應(yīng)光信號數(shù)據(jù)，得到A I抗原含量。
[0043] 針對抗A I抗體上標(biāo)記ABEI，利用A I抗原（或其與蛋白載體的連接物）包被磁 球的情況，進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測的檢測步驟可以包括：1)獲取待測樣本。待測樣本可為直接 得到的血清、血漿及全血，也可以是通過抽取人體血樣進(jìn)行分離得到，或經(jīng)過酶抑制劑處理 后的樣本；2)將帶ABEI標(biāo)記的抗A I抗體和帶有A I抗原（或其與蛋白載體的連接物）的 磁球與待測樣本混合后進(jìn)行溫育，得到反應(yīng)產(chǎn)物；3)清洗后上機(jī)檢測化學(xué)發(fā)光信號，得到 相應(yīng)的光信號數(shù)據(jù)；4)分析相應(yīng)光信號數(shù)據(jù)，得到A I含量。
[0044] 本發(fā)明還進(jìn)一步提供了腎素活性的測定方法，使用本發(fā)明提供的檢測試劑盒測定 A I濃度，進(jìn)而獲得腎素活性值。
[0045] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0046] 1.特異性高，靈敏度好，檢測范圍較寬。
[0047] 2.操作更加簡便易行，同時(shí)本發(fā)明的試劑盒能夠與化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（尤其是 Maglumi系列化學(xué)發(fā)光免疫分析儀）配套使用，在樣本測定過程中實(shí)現(xiàn)了全自動化，使得 A I濃度的檢測可以簡單、方便、快速、批量地進(jìn)行，同時(shí)保證檢測的系統(tǒng)誤差較小。
[0048] 3.本發(fā)明通過化學(xué)發(fā)光免疫法來檢測A I，避免使用污染環(huán)境、危害人體健康的 放射性標(biāo)記物，更加安全，對環(huán)境友好；同時(shí)，本發(fā)明的標(biāo)記物不僅安全，還很穩(wěn)定，克服了 放射性免疫法等現(xiàn)有技術(shù)方法中存在的標(biāo)記物的半衰期短的問題。
【具體實(shí)施方式】
[0049] 以下結(jié)合非限制性實(shí)施例來對本發(fā)明作進(jìn)一步的解釋和說明。然而，需要注意的 是，本發(fā)明的下列【具體實(shí)施方式】并不對本發(fā)明作出任何的限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解 的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替 換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
[0050] 以下實(shí)施例中：
[0051] A I抗原：購于Sigma公司；
[0052] 抗A I抗體：購于Biogenesis公司；
[0053] 羊抗FITC多克隆抗體：購于美國Jackson公司；
[0054] FITC :購自上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司；
[0055] 磁性微球由深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司生產(chǎn)，80 %粒徑分布為 1-5 μ m，磁化強(qiáng)度為4000高斯時(shí)沉淀時(shí)間為10-15秒，BSA為30mg時(shí)蛋白吸附濃度為 0. 8mg-l. 2mg ；
[0056] 生物素、鏈霉親和素：均購自美國Biosources公司；
[0057] ABEI :由深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司提供；
[0058] Maglumi 2000化學(xué)發(fā)光分析儀由深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司提供。
[0059] 實(shí)施例1
[0060] (I)A I抗原的標(biāo)記，具體步驟如下：
[0061] 透析液（F溶液）的配制：在5000ml容器中加入Na2CO3H. 31g和NaHC0326 . 46g，加 純化水稀釋至4500ml，將配制好的F溶液置于磁力攪拌器上備用。
[0062] 選用合適截留量（常用分子量14000)的透析袋，量取足夠容納F溶液的尺寸，潤 濕后扎緊一端，純化水試漏3次（需無漏液）。
[0063] 取100 μ g A I抗原用0· lmol/L ρΗ9· 5的碳酸緩沖液（F溶液）調(diào)整到1ml。放入 透析液中，室溫?cái)嚢柰肝?小時(shí)，將透析好的溶液加入300 μ g ABEI活化酯，37°C反應(yīng)2小 時(shí)。
[0064] 通過G-25凝膠柱純化A I抗原與ABEI的連接產(chǎn)物。
[0065] 仏溶液的配制：在2000ml燒杯中加入200ml的0. 5M磷酸鹽緩沖液（P001溶液）、 20g BSA、8g NaN3、2g MgCl2 · 6H20、600ml 甘油，加純化水稀釋到 2000ml，過濾。
[0066] 將純化好的連接產(chǎn)物用D2溶液對倍稀釋，即得到標(biāo)記有ABEI的A I抗原。
[0067] (2)抗A I抗體包被磁球，具體步驟如下：
[0068] A溶液的配制：稱取2. 55g三水合乙酸鈉放入5000ml燒杯中，用量筒量取4500ml 純化水倒入燒杯，待溶解后再加入14ml乙酸混勻后，加純化水稀釋至5000ml (pH為3. 6)。
[0069] 向小白瓶中加入5倍于包被體積的A溶液，放入超聲波儀器中一邊超聲一邊攪拌 清洗2-3分鐘，然后置于磁鐵上，待上清液清亮后，倒出上清液。該步驟重復(fù)三次。
[0070] 將粒徑為1 μ m磁珠加入與包被體積等量的pH3. 6醋酸緩沖液中，使磁珠的懸浮濃 度為20mg/ml，再加入1-環(huán)已基-2-嗎啉乙基碳二亞胺對甲苯磺酸鹽（CMC)，使其濃度為 10mg/ml，加入純化的抗A I抗體。
[0071] 將磁珠懸浮液放入恒溫震蕩水浴箱中37°C反應(yīng)24小時(shí)（震蕩水浴鍋振搖速 度：260rpm)。
[0072] 以P001:純化水=1:9體積比率配制pH 7. 4磷酸鹽緩沖液（PBS) 500ml，加入2. 5g BSA溶解，混勻，即為磁珠清洗液。
[0073] 將溫浴好的磁珠懸浮液倒入燒杯中，然后置于磁鐵上沉淀后，倒掉上清，加入5倍 體積的磁珠清洗液攪拌清洗，然后放置在磁鐵上，待上清液清亮后倒掉上清液，重復(fù)該清洗 步驟四次。
[0074] C溶液配制：稱取MC (甲基纖維素）160g倒入5000ml燒杯中，加純化水至4000ml， 至于90°C的水浴箱中加熱攪溶2小時(shí)。另取4000ml 0. 5M磷酸鹽緩沖液，加入80g NaN3(分 析純），80ml吐溫-20 (分析純），混勻，過濾。將此兩份溶液充分混勻后加入200g BSA，加 水至 40000ml。
[0075] 將清洗完畢后的磁珠懸浮于C溶液中，懸浮濃度為20mg/ml，即得到抗A I抗體包 被的磁球，此懸浮液體積即為本實(shí)施例所述包被體積。
[0076] 將上述磁球懸浮液進(jìn)一步稀釋至以磁球計(jì)為0. lmg/ml的懸浮液，備用。
[0077] ⑶A I低點(diǎn)校準(zhǔn)品、高點(diǎn)校準(zhǔn)品的制備
[0078] 將A I抗原用50 %牛血清制品按不同比例稀釋成濃度分別為14. 386ng/ml及 0. 667ng/ml的兩個(gè)高、低校準(zhǔn)品定標(biāo)點(diǎn)。
[0079] ⑷組裝
[0080] 將上述試劑成分分裝后組裝成試劑盒，儲存于2~8°C。
[0081] 實(shí)施例2
[0082] (I)A I抗原的標(biāo)記，具體步驟如下：
[0083] 透析液（F溶液）的配置：在5000ml容器中加入Na2CO3H. 31g，NaHC0326 . 46g，加 純化水稀釋至4500ml。配制好的F溶液置于磁力攪拌器上備用。
[0084] 選用合適截留量（常用分子量14000)的透析袋，量取足夠容納F溶液的尺寸，潤 濕后扎緊一端，純化水試漏3次（需無漏液）。
[0085] 取100 μ g A I抗原用0· lmol/L ρΗ9· 5的碳酸緩沖液（F溶液）調(diào)整到1ml。放入 透析液中，室溫?cái)嚢柰肝?