小時(shí)，將透析好的溶液加入300 μ g ABEI活化酯，37°C反應(yīng)2小 時(shí)。
[0086] 通過(guò)G-25凝膠柱純化A I抗原與ABEI的連接產(chǎn)物。
[0087] %溶液的配制：在2000ml燒杯中加入200ml 0.5M磷酸鹽緩沖液、20g BSA、8g NaN3、2g MgCl2 · 6H20、600ml甘油，加純化水稀釋至2000ml，過(guò)濾。
[0088] 純化好的連接產(chǎn)物體用仏溶液對(duì)倍稀釋。
[0089] (2)羊抗FITC多克隆抗體包被磁球，具體步驟如下：
[0090] 按實(shí)施例1中方法配制好A溶液。
[0091] 向小白瓶中加入5倍于包被體積的A溶液，放入超聲波儀器中一邊超聲一邊攪拌 清洗2-3分鐘，然后置于磁鐵上，待上清液清亮后，倒出上清液。該步驟重復(fù)三次。
[0092] 將磁珠加入包被體積等量的pH3. 6醋酸緩沖液中，使磁珠的懸浮濃度為20mg/ml， 再加入CMC(濃度為10mg/ml)，加入純化的羊抗FITC多克隆抗體。
[0093] 將磁珠懸浮液放入恒溫震蕩水浴箱中37°C反應(yīng)24小時(shí)（震蕩水浴鍋振搖速 度：260rpm)。
[0094] 以POOl:純化水=1:9體積比率配制ρΗ7· 4的PBS緩沖液500ml，加入2. 5g BSA 混勻溶解，即為磁珠清洗液。
[0095] 將溫浴好的磁珠懸浮液倒入燒杯中，然后置于磁鐵上沉淀后，倒掉上清，加入5倍 體積的磁珠清洗液攪拌清洗，然后放置在磁鐵上，待上清液清亮后倒掉上清液，重復(fù)該清洗 步驟四次。
[0096] 按照實(shí)施例1的方法制備C溶液。
[0097] 將清洗完畢后的磁珠懸浮在C溶液中，懸浮液濃度為20mg/ml，即得到羊抗FITC多 克隆抗體包被的磁球懸浮液，此懸浮液體積即為本實(shí)施例所述包被體積。
[0098] 將上述磁球懸浮液進(jìn)一步稀釋至以磁球計(jì)為0. 5mg/ml的懸浮液，備用。
[0099] (3)抗A I抗體標(biāo)記，具體步驟如下：
[0100] 取Img抗A I抗體用0. lmol/L pH9. 5的碳酸緩沖液（F溶液）調(diào)整到1ml。放入 透析液中，室溫?cái)嚢柰肝?小時(shí)，將透析好的溶液加入300 μ g FITC，室溫邊搖邊反應(yīng)24h。
[0101] 通過(guò)G-25凝膠柱純化抗A I抗體與FITC的連接產(chǎn)物。
[0102] C2溶液的配制：加入200ml 0· 5M磷酸鹽緩沖液、20g BSA、8g NaN3、2g MgCl2 ·6Η20、 加純化水稀釋至2000ml (過(guò)濾）。
[0103] 配制好C2溶液后，以純化好的連接產(chǎn)物用C 2溶液對(duì)倍稀釋。
[0104] ⑷A I低點(diǎn)校準(zhǔn)品、尚點(diǎn)校準(zhǔn)品的制備
[0105] 將六1抗原用50%牛血清制品按不同比例稀釋成濃度為15.50叩/1111及0.851^/ ml兩個(gè)高、低校準(zhǔn)品定標(biāo)點(diǎn)。
[0106] (5)組裝
[0107] 將上述試劑成分分裝后組裝成試劑盒，儲(chǔ)存于2~8°C。
[0108] 實(shí)施例3
[0109] (1)抗A I抗體的標(biāo)記，具體步驟如下：
[0110] 透析液（F溶液）的配置：在5000ml燒杯中加入Na2CO3H. 31g，NaHC0326 . 46g，加 純化水稀釋至4500ml，將配制好的F溶液置于磁力攪拌器上備用。
[0111] 選用合適截留量（常用分子量14000)的透析袋，量取足以容納F溶液的尺寸，潤(rùn) 濕后扎緊一端，純化水試漏3次（需無(wú)漏液）。
[0112] 取Img抗A I抗體用0· lmol/L ρΗ9· 5的碳酸緩沖液（F溶液）調(diào)整到Iml。放入 透析液中，室溫?cái)嚢柰肝?小時(shí)，將透析好的溶液加入300 μ g ABEI活化酯，37°C反應(yīng)2小 時(shí)。
[0113] 通過(guò)G-25凝膠柱純化抗A I抗體與ABEI的連接產(chǎn)物。
[0114] 按實(shí)施例1中方法配制好D2溶液。
[0115] 將純化好的連接產(chǎn)物用D2溶液對(duì)倍稀釋?zhuān)纯伞?br>[0116] (2) A I抗原包被磁球，具體步驟如下：
[0117] 按實(shí)施例1中的方法配制好A溶液。
[0118] 向小白瓶中加入5倍于包被體積的A溶液，放入超聲波儀器中一邊超聲一邊攪拌 清洗2-3分鐘，然后置于磁鐵上，待上清液清亮后，倒出上清液。該步驟重復(fù)三次。
[0119] 將磁珠加入包被體積等量的pH3. 6醋酸緩沖液中，使磁珠的懸浮濃度為20mg/ml， 再加入CMC (濃度為10mg/ml)，按一定比率加入純化的A I抗原
[0120] 將磁珠放入恒溫震蕩水浴箱中37 °C反應(yīng)24小時(shí)（震蕩水浴鍋振搖速 度：260rpm)。
[0121] 以POOl:純化水=1:9體積比率配制pH7. 4PBS緩沖液500ml，加入2. 5g BSA混勻 溶解，即為磁珠清洗液。
[0122] 將溫浴好的磁珠懸浮液倒入燒杯中，然后置于磁鐵上沉淀后，倒掉上清，加入5倍 體積的磁珠清洗液攪拌清洗，然后放置在磁鐵上，待上清液清亮后倒掉上清液，重復(fù)該清洗 步驟四次。
[0123] 按照實(shí)施例1的方法制備C溶液。將清洗完畢后的磁珠懸浮于C溶液中，懸浮濃 度為20mg/ml，即得到抗A I抗體包被的磁球懸浮液，此懸浮液體積即為本實(shí)施例所述包被 體積。
[0124] 將上述磁球懸浮液進(jìn)一步稀釋至以磁球計(jì)為lmg/ml的懸浮液，備用。
[0125] ⑶A I低點(diǎn)校準(zhǔn)品、高點(diǎn)校準(zhǔn)品
[0126] 將A I抗原用50 %牛血清制品按不同比例稀釋成濃度分別為14. 718ng/ml及 0. 780ng/ml的兩個(gè)高、低校準(zhǔn)品定標(biāo)點(diǎn)。
[0127] (4)組裝
[0128] 將上述試劑成分分裝后組裝成試劑盒，儲(chǔ)存于2~8°C。
[0129] 實(shí)施例4
[0130] (1)抗A I抗體的標(biāo)記，具體步驟如下：
[0131] 透析液（F溶液）的配置：在5000ml燒杯中加入Na2CO3H. 31g，NaHC0326 . 46g，加 水定容至4500ml.配制好的F溶液置于磁力攪拌器上備用。
[0132] 選用合適截留量（常用分子量14000)的透析袋，量取足夠容納F溶液的尺寸，潤(rùn) 濕后扎緊一端，純化水試漏3次（需無(wú)漏液）。
[0133] 取Img抗A I抗體用0. lmol/L pH9. 5的碳酸緩沖液（F溶液）調(diào)整到1ml。放入 透析液中，室溫?cái)嚢柰肝?小時(shí)，將透析好的溶液加入300 μ g ABEI活化酯，37°C反應(yīng)2小 時(shí)。
[0134] 通過(guò)G-25凝膠柱純化抗A I抗體與ABEI的連接產(chǎn)物。
[0135] 按照實(shí)施例1的方法制備D2溶液。
[0136] 將純化好的連接產(chǎn)物用仏溶液對(duì)倍稀釋。
[0137] (2)羊抗FITC多克隆抗體包被磁球，具體步驟如下：
[0138] 按實(shí)施例1中方法配制好A溶液。
[0139] 向小白瓶中加入5倍于包被體積的A溶液，放入超聲波儀器中一邊超聲一邊攪拌 清洗2-3分鐘，然后置于磁鐵上，待上清液清亮后，倒出上清液。該步驟重復(fù)三次。
[0140] 將磁珠加入包被體積等量的pH3. 6醋酸緩沖液中，使磁珠懸浮濃度為20mg/ml，再 加入CMC (濃度為10mg/ml)，按一定比率加入純化的羊抗FITC多克隆抗體。
[0141] 將磁珠放入恒溫震蕩水浴箱中37 °C反應(yīng)24小時(shí)（震蕩水浴鍋振搖速 度：260rpm)。
[0142] 以P001:純化水=1:9體積比率配制pH7. 4PBS緩沖液500ml，加入2. 5g BSA混勻 混勻溶解，即為磁珠清洗液。
[0143] 將溫浴好的磁珠懸浮液倒入燒杯中，然后置于磁鐵上沉淀后，倒掉上清，加入5倍 體積的磁珠清洗液攪拌清洗，然后放置在磁鐵上，待上清液清亮后倒掉上清液，重復(fù)該清洗 步驟四次。
[0144] 按照實(shí)施例1的方法制備C溶液。
[0145] 將清洗完畢后的磁珠懸浮在C溶液中，懸浮濃度為20mg/ml，即得到羊抗FITC多克 隆抗體包被的磁球懸浮液，此懸浮液體積即為本實(shí)施例所述包被體積。
[0146] 將上述磁球懸浮液進(jìn)一步稀釋至以磁球計(jì)為0. 5mg/ml的懸浮液，備用。
[0147] (3) A I抗原標(biāo)記，具體步驟如下：
[0148] 透析液（F溶液）的配置，在5000ml燒杯中加入Na2CO3H. 31g，NaHC0326 . 46g，加水 定容至4500ml，配制好的F溶液置于磁力攪拌器上備用。
[0149] 選用合適截留量（常用14000)的透析袋，量取合適的尺寸，潤(rùn)濕后扎緊一端，純化 水試漏3次（需無(wú)漏液）。
[0150] 取100 μ g A I抗原用0· lmol/L ρΗ9· 5的碳酸緩沖液（F溶液）調(diào)整到1ml。放入 透析液中，室溫?cái)嚢柰肝?小時(shí)，將透析好的溶液加入300 μ g FITC，室溫邊搖邊反應(yīng)24h。
[0151] 通過(guò)G-25凝膠柱純化A I抗原和FITC的連接產(chǎn)物。
[0152] C2溶液的配制：加入 200ml POOl 溶液、20g BSA、8g NaN 3、2g MgCl2 · 6H20、定容到 2000ml (過(guò)濾）。
[0153] 純化好的連接產(chǎn)物體用C2溶液對(duì)倍稀釋?zhuān)纯伞?br>[0154] ⑷A I低點(diǎn)校準(zhǔn)品、高點(diǎn)校準(zhǔn)品的制備
[0155] 將A I抗原用50 %牛血清制品按不同比例稀釋成濃度分別為16. 480ng/ml及 2. 213ng/ml兩個(gè)高、低校準(zhǔn)品定標(biāo)點(diǎn)。
[0156] (5)組裝
[0157] 將上述試劑成分分裝后組裝成試劑盒，儲(chǔ)存于2~8°C。
[0158] 實(shí)施例5
[0159] (1)抗A I抗體的標(biāo)記，具體步驟如下：
[0160] 取Img抗A I抗體用0· lmol/L ρΗ9· 5的碳酸緩沖液（F溶液）調(diào)整到1ml。放入 透析液中，室溫?cái)嚢柰肝?小時(shí)，將透析好的溶液加入300 μ g ABEI活化酯，37°C反應(yīng)2小 時(shí)。
[0161 ] 通過(guò)G-25凝膠柱純化抗A I抗體和ABEI的連接產(chǎn)物。
[0162] 按照實(shí)施例1的方法配制D2溶液，純化好的連接產(chǎn)物用D 2溶液對(duì)倍稀釋。
[0163] (2) A I抗原生物素化
[0164] 取100 μ g生物素及100 μ g A I抗原用0. lmol/L pH9. 5的碳酸緩沖液（F溶液） 調(diào)整到lml。放入透析液中，室溫?cái)嚢柰肝?小時(shí)，37°C反應(yīng)2小時(shí)