一種免疫層析試紙條、檢測(cè)方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及免疫檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種免疫層析試紙條、使用其的檢測(cè)方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]膠體金的免疫層析試紙條，由于其簡單、方便、快捷、便宜及不需要大型儀器和專業(yè)人員的操作而在疾病診斷、食品檢測(cè)、環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。但是，基于膠體金的免疫層析試紙條仍然存在一些不足，比如，很難實(shí)現(xiàn)定量的檢測(cè)和較高的靈敏度匕如，甲胎蛋白AFP等)等，限制了其在某些目標(biāo)物檢測(cè)方面的應(yīng)用。
[0003]雙面神顆粒即Janus顆粒，是一種形貌或者性質(zhì)上不對(duì)稱粒子，由于物理化學(xué)性質(zhì)的差異性，使得這種粒子具有附加的定向作用力，借助這一定向作用力，可以實(shí)現(xiàn)粒子在空間上的控制性自組裝，使得這類材料受到人們的極大關(guān)注，并在諸如功能表面活性劑、自主裝和分子識(shí)別、光電生物傳感器、多功能磁性非對(duì)稱材料、電子器件、光子晶體及催化劑等領(lǐng)域表現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景。目前，Janus顆粒的制備方法可以分為兩類:去對(duì)稱方法和一步合成方法，前者是以對(duì)稱性粒子前驅(qū)體，經(jīng)過一系列物理化學(xué)處理，改變前驅(qū)體的表面對(duì)稱性，后者是在適當(dāng)?shù)奈锢砘蛘呋瘜W(xué)條件下，直接合成Janus顆粒。
[0004]而免疫層析試紙條，一般是以膠體金或磁珠等作為示蹤標(biāo)記物，進(jìn)行肉眼可視化的檢測(cè)，但是這種方法靈敏度差，并且只能定性或者半定量的檢測(cè)，不能滿足某些目標(biāo)物高靈敏度和定量檢測(cè)的需求。
[0005]因此，本領(lǐng)域需要將Janus顆粒用于免疫層析試紙條的技術(shù)，以解決傳統(tǒng)的膠體金免疫層析試紙條靈敏度差和不能定量的缺陷。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種免疫層析試紙條、檢測(cè)方法及應(yīng)用，該免疫層析試紙條基于雙面神納米顆粒，能夠?qū)崿F(xiàn)目標(biāo)物的可視化讀出和熒光讀出的雙功能，相比傳統(tǒng)的膠體金免疫層析試紙條，能夠?qū)崿F(xiàn)定量檢測(cè)，并獲得更高的檢測(cè)靈敏度。
[0007]為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，采用以下技術(shù)方案:
[0008]在第一方面，本發(fā)明提供一種免疫層析試紙條，包括結(jié)合物墊、測(cè)試線和質(zhì)控線，所述結(jié)合物墊上涂覆有檢測(cè)抗體標(biāo)記的雙面神納米顆粒，所述測(cè)試線包被捕獲抗體或抗原，所述質(zhì)控線包被所述檢測(cè)抗體的抗體。
[0009]優(yōu)選地，還包括底板、樣品墊、硝酸纖維素膜和吸水紙，所述底板上順次搭接樣品墊、結(jié)合物墊、硝酸纖維素膜和吸水紙，所述測(cè)試線和質(zhì)控線設(shè)在所述硝酸纖維素膜上。
[0010]優(yōu)選地，所述雙面神納米顆粒包括兩部分，其中一部分為金納米顆粒、磁性納米顆?；蚰z體碳顆粒，優(yōu)選為金納米顆粒；另一部分為量子點(diǎn)、熒光分子或稀土元素，優(yōu)選為量子點(diǎn)。
[0011]優(yōu)選地，所述量子點(diǎn)為CdTe、CdSe、CdS、CdS/ZnS、CdSe/ZnS 或 CdSe/CdS 量子點(diǎn)。
[0012]作為本發(fā)明的一種方案，所述檢測(cè)抗體為大分子的抗體；所述測(cè)試線為捕獲抗體，所述捕獲抗體為所述大分子的抗體。
[0013]優(yōu)選地，所述大分子為蛋白質(zhì)或核酸。所述蛋白質(zhì)比如血清中的抗原或抗體，如乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝表面抗體(HBsAb)、乙肝e抗體(HBeAb)、乙肝核心抗體(HBcAb)、HIV-1P24抗原、HIV抗體、肺炎支原體抗體、人絨毛膜促性腺激素(HCG)、甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、糖類抗原125 (CA125)、糖類抗原15_3 (CA15-3)、糖類抗原(19-9)、前列腺特異抗原(PSA)及其它腫瘤標(biāo)記物；所述核酸比如脫氧核糖核酸坐寸ο
[0014]作為本發(fā)明的另一種方案，所述檢測(cè)抗體為小分子的抗體。所述測(cè)試線為捕獲抗原，所述捕獲抗原為小分子抗原。小分子通常指分子量小于1000或者500以下的分子，比如被稱為“瘦肉精”的沙丁胺醇、萊克多巴胺和克倫特羅，牛奶中添加的三聚氰胺及蔬菜、水果中的農(nóng)藥殘留等。
[0015]作為本發(fā)明的再一種方案，所述檢測(cè)抗體為重金屬離子的抗體。所述測(cè)試線為捕獲抗原，所述捕獲抗原為重金屬離子抗原。重金屬離子可以是指Cd2+、Cr3+、Hg2+、Pb2+或Mn2+
坐寸ο
[0016]優(yōu)選地，所述樣品墊為玻璃纖維膜或聚酯纖維膜。
[0017]優(yōu)選地，所述結(jié)合物墊為玻璃纖維膜。
[0018]優(yōu)選地，所述底板為聚氯乙烯膠板。
[0019]優(yōu)選地，還包括設(shè)置在外面的卡殼，所述卡殼上設(shè)有用于滴加檢測(cè)樣品的加樣區(qū)和用于觀察或讀取信號(hào)的顯色區(qū)。
[0020]優(yōu)選地，所述檢測(cè)樣品為血清、全血、尿液和組織液中的一種或多種。
[0021]在第二方面，本發(fā)明提供一種使用如第一方面所述的免疫層析試紙條檢測(cè)樣品的方法，包括:
[0022](I)將樣品滴加在樣品墊上，靜置10-15分鐘；
[0023](2)通過肉眼觀察讀取結(jié)果，或者通過熒光儀器讀取信號(hào)。
[0024]在第三方面，本發(fā)明提供如第一方面所述的免疫層析試紙條在檢測(cè)大分子、小分子或重金屬離子中的應(yīng)用。
[0025]優(yōu)選地，所述大分子為蛋白質(zhì)。
[0026]本發(fā)明的有益效果為:本發(fā)明的免疫層析試紙條基于雙面神納米顆粒，能夠?qū)崿F(xiàn)目標(biāo)物的可視化讀出和熒光讀出的雙功能，相比傳統(tǒng)的膠體金免疫層析試紙條，能夠?qū)崿F(xiàn)定量檢測(cè)，并獲得更高的檢測(cè)靈敏度。
[0027]此外，本發(fā)明的免疫層析試紙條具有特異性強(qiáng)、價(jià)格低廉、讀取結(jié)果快捷而直觀的優(yōu)點(diǎn)，不需要特殊儀器設(shè)備，也不需要專業(yè)人員操作，檢測(cè)結(jié)果的總體符合率較高，適合于各種目標(biāo)物的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。
【附圖說明】
[0028]圖1為雙面神(Janus)納米顆粒結(jié)構(gòu)示意圖,左半球?yàn)榻鸺{米顆粒、磁性納米顆粒或膠體碳顆粒，右半球?yàn)榱孔狱c(diǎn)、突光分子或稀土元素。
[0029]圖2為免疫層析試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0030]圖3為免疫層析試紙條檢測(cè)蛋白類大分子目標(biāo)物的陽性結(jié)果示意圖。
[0031]圖4為免疫層析試紙條檢測(cè)蛋白類大分子目標(biāo)物的陰性結(jié)果示意圖。
[0032]圖5為免疫層析試紙條檢測(cè)蛋白類大分子目標(biāo)物的無效結(jié)果示意圖。
[0033]圖6為免疫層析試紙條檢測(cè)小分子目標(biāo)物的陽性結(jié)果示意圖。
[0034]圖7為免疫層析試紙條檢測(cè)小分子目標(biāo)物的陰性結(jié)果示意圖。
[0035]圖8為免疫層析試紙條檢測(cè)小分子目標(biāo)物的無效結(jié)果示意圖。
[0036]圖9為免疫層析試紙條檢測(cè)重金屬離子目標(biāo)物的陽性結(jié)果示意圖。
[0037]圖10為免疫層析試紙條檢測(cè)重金屬離子目標(biāo)物的陰性結(jié)果示意圖。
[0038]圖11為免疫層析試紙條檢測(cè)重金屬離子目標(biāo)物的無效結(jié)果示意圖。
[0039]圖12為實(shí)施例1中不同濃度的AFP抗原與熒光條帶吸收峰的關(guān)系圖。
[0040]附圖標(biāo)記:1表示加樣區(qū)，2表示觀測(cè)區(qū)或顯色區(qū)，3表示測(cè)試線，4表示質(zhì)控線，5表示卡殼，6表示樣品墊，7表示結(jié)合物墊，8表示硝酸纖維素膜，9表示吸水紙，10表示PVC底板。
【具體實(shí)施方式】
[0041]下面將結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，以下實(shí)施例僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，以便于更好地理解本發(fā)明，因而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換或改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所用的實(shí)驗(yàn)材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑廠商購買得到的。
[0042]本發(fā)明中，雙面神(Janus)納米顆粒結(jié)構(gòu)示意圖如圖1所