01 :血漿/血清樣本：用EDTA抗凝/無(wú)抗凝采血管抽取2-3mL靜脈血，室溫靜置 5分鐘后，4000rmp/min，離心5分鐘，獲取上清備用，標(biāo)本離心后，放置-80°C冰箱長(zhǎng)期保存 備用，所有的試劑和樣本在使用之前放置在室溫（18°C _25°C )，所有的樣本至少?gòu)?fù)空；
[0032] S102:用 pH9. 6 的 50mM碳酸鹽緩沖液（15mM Na2C03;35mM NaHCO 3)作為稀釋液，對(duì) 血漿/血清樣本1 : 2稀釋，同樣適用其他類型的體液標(biāo)本或者細(xì)胞培養(yǎng)上清；
[0033] S103:用 pH9. 6 的 50mM碳酸鹽緩沖液（15mM Na2C03;35mM NaHCO 3)作為稀釋液，溶 解IL-11蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品粉末，充分震蕩混勾后，制備成4ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品，取100ul的4ng/ ml的標(biāo)準(zhǔn)品，加入400ul的稀釋液，配制成800pg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品，在6管分別加入400ul的稀 釋液，800pg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品中移出200ul，進(jìn)行倍比稀釋，分別得到266. 7pg/ml、88. 89pg/ml、 29. 6pg/ml、9. 88pg/ml、3. 29pg/ml、0pg/ml ;
[0034]S104:加入lOOul的標(biāo)準(zhǔn)品于IL-11抗體包被的96孔板中：，血漿/血清/細(xì)胞 上清/其他體液樣本1 : 2稀釋，用專用薄膜覆蓋孔后，室溫孵育2. 5小時(shí)或者4°C過(guò)夜，并 輕微震蕩；
[0035] S105:用 pH9. 6 的 50mM碳酸鹽緩沖液（15mM Na2C03;35mM NaHCO 3)作為稀釋液，將 山羊抗人IL-11抗體：稀釋為2 y g/ml，在聚苯乙烯的96孔酶標(biāo)板的微孔中加入50 y 1包 被液，用保鮮膜封好，在4°C冰箱中放置過(guò)夜（> 16h)，次日，用350 y 1 150mM的PBST緩沖 液（137mM NaCl，2mM KH2P04，10mM Na2HP04,加入 0.05% 的 Tween-20,調(diào)節(jié)至 pH7.4)浸泡式 洗板，3minX3次；
[0036]S106:每孔加入300 y 1的2% BSA:，室溫封閉4h，用350 y 1 PBST緩沖液浸泡式 洗板，lminX3次；
[0037] S107:丟棄液體，用排槍或者自動(dòng)加樣設(shè)備每孔加入300ul PBST緩沖液，每次均 需從孔中徹底清除液體，在最后一次洗滌時(shí)，完全去孔中殘存的液體，并倒置96孔板，在干 凈的吸水紙上排干，共洗滌4次；
[0038] S108:在每孔中加入100ul生物素標(biāo)記的IL-11抗體，室溫孵育1小時(shí)，并輕微震 動(dòng)，丟棄液體，用排槍或者自動(dòng)加樣設(shè)備每孔加入300ul PBST緩沖液，每次均需從孔中徹底 清除液體，在最后一次洗滌時(shí)，完全去孔中殘存的液體，并倒置96孔板，在干凈的吸水紙上 排干。共洗滌4次；
[0039] S109:加入100ul鏈親和素：溶液于每孔中，室溫孵育45分鐘并輕微震蕩，丟棄液 體，用排槍或者自動(dòng)加樣設(shè)備每孔加入300ul PBST緩沖液，每次均需從孔中徹底清除液體， 在最后一次洗滌時(shí)，完全去孔中殘存的液體，并倒置96孔板，在干凈的吸水紙上排干，共洗 滌4次；
[0040] S110 :加入100ul的TMB底物試劑于每孔中，室溫避光震蕩孵育30分鐘，加入50ul 2M H2S04溶液終止反應(yīng)，立即在酶標(biāo)儀Model 680酶標(biāo)儀中讀取450nm吸光值；
[0041] S111 :結(jié)果的判讀：首先確定3個(gè)陰性對(duì)照孔的讀數(shù)，取平均值作為本底讀數(shù)。對(duì) 于每一例血漿/血清/細(xì)胞培養(yǎng)液/其他體液樣品或IL-11標(biāo)準(zhǔn)品，利用梯度稀釋的IL-11 標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而計(jì)算出每一例有效病例的血漿/血清/細(xì)胞培養(yǎng)液/其他體液 的IL-11濃度。
[0042] 在本發(fā)明的實(shí)施例中，IL-11屬于IL-6因子家族，影響炎癥因子趨化作用、癌細(xì)胞 的運(yùn)動(dòng)和侵襲等作用。癌基因Ras調(diào)控IL-11基因，IL-11和gpl30的受體的二聚體作用 發(fā)揮信號(hào)傳遞作用。血漿中的IL-11是Gpl30野生型的胃癌患者的侵襲和預(yù)后的標(biāo)記物。 IL11在胰腺癌的發(fā)生、侵襲和預(yù)后等的作用尚不清楚。IL可調(diào)控胰腺星狀細(xì)胞，促進(jìn)胰腺 癌的惡性微環(huán)境的產(chǎn)生。IL11獨(dú)立預(yù)測(cè)肝癌的骨轉(zhuǎn)移。IL11信號(hào)的直腸癌的潛在治療靶 點(diǎn)。IL-11在不同類型的癌癥其預(yù)后可能不同。IL-11具有抗炎功能。我們前期工作發(fā)現(xiàn) 胰腺肉瘤樣癌患者血漿中IL-11升高具有良好的預(yù)后。在血液來(lái)源的惡性腫瘤患者經(jīng)過(guò)重 組的IL-11治療后可明顯減輕菌血癥、不明原因的感染，促進(jìn)患者較好的預(yù)后。體內(nèi)體外證 實(shí)IL-11能夠減輕IL-1介導(dǎo)的炎癥及破壞作用，并且炎癥在胰腺癌的發(fā)生發(fā)展等方面扮演 重要作用。因此，IL-11可能在胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后等方面扮演重要作用。
[0043] 檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)和方法：
[0044]入組標(biāo)準(zhǔn)：1)輔助診斷胰腺癌：對(duì)臨床上首次入院的患者，臨床癥狀上為胰腺癌 疾病待排除的患者。影像診斷如CT與MRI等方法尚難以明確為胰腺癌的患者，血清中 CA19-9未檢測(cè)明顯升高的患者?？蓪?duì)此類患者用EDTA抗凝/無(wú)抗凝采血管抽取2-3mL靜 脈血，在24h內(nèi)完成血漿/血清的IL-11檢測(cè)。
[0045] 2)預(yù)后的評(píng)估作用：對(duì)于臨床病理學(xué)明確診斷的胰腺癌患者，可通過(guò)檢測(cè)血漿 中IL-11的表達(dá)水平評(píng)價(jià)胰腺癌患者的預(yù)后情況?？蓪?duì)此類患者用EDTA抗凝采血管抽取 2-3mL靜脈血，在24h內(nèi)完成IL-11血漿檢測(cè)?；颊呖梢栽谖唇?jīng)過(guò)任何治療措施前用EDTA 抗凝采血管抽取2-3mL靜脈血，在24h內(nèi)完成血漿/血清的IL-11檢測(cè)。也可以在胰腺癌 患者在手術(shù)后、化療后、放療后3-7天檢測(cè)血漿/血清中IL-11的表達(dá)水平，或者在手術(shù)后、 同步放化療后檢測(cè)血漿/血清中IL-11的表達(dá)水平。最后，根據(jù)血漿/血清的IL-11的表 達(dá)水平評(píng)價(jià)胰腺癌患者的預(yù)后情況。
[0046] 方法的具體步驟為：
[0047] 3、試劑盒的選擇，使用ELISA檢測(cè)試劑盒（RayBiotech，GA，USA)公司。使用雙抗 夾心ELISA方法檢測(cè)。
[0048] 4、具體步驟和方法：
[0049] 1)樣本：樣本要求，本發(fā)明主要采用血漿/血清樣本，但同樣適用于可疑胰腺癌患 者或者明確診斷的胰腺癌患者其他體液標(biāo)本，如胸水、腹水、穿刺的其他用于診斷的體液標(biāo) 本。血漿/血清樣本：用EDTA抗凝/無(wú)抗凝采血管抽取2-3mL靜脈血，室溫靜置5分鐘后， 4000rmp/min，離心5分鐘，獲取上清備用。樣本通常24小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)，對(duì)于可能復(fù)查的 標(biāo)本。標(biāo)本離心后，放置-80°C冰箱長(zhǎng)期保存?zhèn)溆?。所有的試劑和樣本在使用之前放置在?溫（18°C -25°C )。所有的樣本至少?gòu)?fù)空。
[0050] 2)樣本稀釋：用pH9. 6的50mM碳酸鹽緩沖液（15mM Na2C03;35mM NaHCO 3)作為稀 釋液，對(duì)血漿/血清樣本1 : 2稀釋，同樣適用其他類型的體液標(biāo)本或者細(xì)胞培養(yǎng)上清。
[0051] 3)制備標(biāo)本品標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)買自（RayBiotech，GA，USA)公司。用pH9. 6的 50mM碳酸鹽緩沖液（15mM Na2C03;35mM NaHC03)作為稀釋液，溶解IL-11蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品粉 末，充分震蕩混勾后。制備成4ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品。取100ul的4ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品，加入400ul 的稀釋液，配制成800pg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品，在6管分別加入400ul的稀釋液，800pg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品 中移出 200ul，進(jìn)行倍比稀釋，分別得到 266. 7pg/ml、88. 89pg/ml、29. 6pg/ml、9. 88pg/ml、 3. 29pg/ml、0pg/ml。
[0052] 4)加入lOOul的標(biāo)準(zhǔn)品于IL-11抗體包被的96孔板中（RayBiotech，GA，USA)，血 漿/血清/細(xì)胞上清/其他體液樣本1 : 2稀釋，用專用薄膜覆蓋孔后，室溫孵育2. 5小時(shí) 或者4°C過(guò)夜，并輕微震蕩。
[0053] 5)包被：用pH9. 6的50mM碳酸鹽緩沖液（15mM Na2C03;35mM NaHCO 3)作為稀釋液， 將山羊抗人IL-11抗體（Santa Cruz Biotechnology公司）稀釋為2 μg/ml。在聚苯乙稀的 96孔酶標(biāo)板的微孔中加入50 y 1包被液，用保鮮膜封好，在4°C冰箱中放置過(guò)夜（> 16h)。 次日，用 350 y 1 150mM 的 PBST 緩沖液（137mM NaCl，2mM KH2P04,10mM Na2HP04,加入 0? 05% 的Tween-20,調(diào)節(jié)至pH7. 4)浸泡式洗板，3min X 3次。
[0054] 6)封閉：每孔加入 300y1 的 2% BSA(Sigma-Aldrich 公司，Cat. No. A7906)，室溫 封閉4h。用350 y 1PBST緩沖液浸泡式洗板，IminX 3次。
[0055] 7)丟棄液體，用排槍或者自動(dòng)加樣設(shè)備每孔加入300ul PBST緩沖液，每次均需從 孔中徹底清除液體。在最后一次洗滌時(shí)，完全去孔中殘存的液體，并倒置96孔板，在干凈的 吸水紙上排干。共洗滌4次。
[0056] 8)在每孔中加入100ul生物素標(biāo)記的IL-11抗體（RayBiotech，GA，USA)，室溫孵 育1小時(shí)，并輕微震動(dòng)。丟棄液體，用排槍或者自動(dòng)加樣設(shè)備每孔加入300ul PBST緩沖液， 每次均需從孔中徹底清除液體。在最后一次洗