（7)位置，用量為lul/cm ;將偶聯(lián)了羊抗兔IgG多克隆抗體的受體微球用分析緩沖液稀 釋到200ug/ml，噴至硝酸纖維素膜（4)的C線（6)位置，用量為lul/cm。
[0040] 作為本發(fā)明的基于均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)的快速診斷試紙條的進一步改進：
[0041] 所述釋放緩沖液為：在100mL的20mmol/L、pH 7. 4的的磷酸鹽緩沖液中加入30g 蔗糖、5g海藻糖、0. 5g的N，0-雙三甲硅基乙酰胺、0. 3g慶大霉素；
[0042] 所述分析緩沖液的制備方法為：在100mL的25mM，pH7. 4的HEPES緩沖液中加入 200mg的Dextran-500,加入NaCl直至其濃度為50mM、加入0· 5g的BSA、0. 02g的牛γ -球 蛋白、0· Ig 的 Tween_20、0· Olg 的 Proclin-300〇
[0043] 在本發(fā)明中，試紙條的組裝方式如下：
[0044] 在PVC底板上，依次粘貼上硝酸纖維素膜（長30cm，寬2. 5cm，即，層析膜）、玻璃纖 維墊（長30cm，寬8mm)、樣品墊（長30cm，寬17mm)和吸水墊（長30cm，寬17mm)。用切條 機將粘貼好的塑料板縱向切成3. 8mm寬的試紙條，4°C避光保存。即，把包被好微球的試紙 條放在25°C~37°C烘箱內(nèi)烘干4~12小時。最后4°C避光保存。
[0045] 本發(fā)明中的試紙條結(jié)構(gòu)如圖2所示，主要部件由三部分組成：玻璃纖維墊、硝酸纖 維素膜、吸水墊。玻璃纖維中間包被有偶聯(lián)了特異性抗體I的供體微球，包被于玻璃纖維上 的供體微球與玻璃纖維的結(jié)合并不牢固，只要有液體通過就能使供體微球順著液體方向流 動。
[0046] 在本發(fā)明中，樣品墊、吸水墊均屬于常規(guī)技術(shù)；例如，樣品墊可選用美國 mi 11 ipore公司生產(chǎn)的編號為PTFEPET02205產(chǎn)品、吸水墊可選用美國ml I ipore公司生產(chǎn)的 編號為IBFP0813C產(chǎn)品。
[0047] 在本發(fā)明中，試紙條檢測原理及方式為：直接將試紙條平放在桌面上，或者將試紙 條裝到專用的試紙條卡殼中，取IOOul待測樣品加到試紙條的樣品墊上。在毛細(xì)作用下待 測樣品被緩緩吸到吸水墊處，流經(jīng)玻璃纖維墊上的偶聯(lián)了特異性抗體I的供體微球時，待 測樣品中的目標(biāo)蛋白與供體微球顆粒復(fù)合物結(jié)合，這種復(fù)合物流經(jīng)T線時，與偶聯(lián)了特異 性抗體II的受體微球結(jié)合形成供體微球-樣品-受體微球復(fù)合物，從而固定在T線處，待達 到動態(tài)平衡后，將試紙條置于PerkinElmer公司的2300EnSpire TM光激化學(xué)發(fā)光免疫分析系 統(tǒng)中測試。
[0048] 本發(fā)明的基于均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)的快速診斷試紙條，具有特異性強、靈敏度高、快 捷、簡便、可定量，適合快速診斷的優(yōu)點。因此，本發(fā)明具有較高的社會和經(jīng)濟價值。
[0049] 本發(fā)明研發(fā)出的基于均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)的快速診斷試紙條與膠體金試紙條相比， 具有對目標(biāo)蛋白的檢測靈敏度更高的優(yōu)點。
[0050] 在發(fā)明過程中，通過研宄，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)用均相化學(xué)發(fā)光方法中的供體微球代替免 疫層析方法中的膠體金顆粒和抗體偶聯(lián)，將此微球包被到試紙條的玻璃纖維上；用均相化 學(xué)發(fā)光方法中所用的發(fā)光微球供體和另一抗體偶聯(lián)，包被到NC膜上，用于測量樣品中的目 標(biāo)蛋白，可以讓試紙條檢測蛋白的靈敏度大大提高。這是由于以下原因 ：1、膠體金試紙條 反應(yīng)的強弱是通過膠體金納米粒在T線上產(chǎn)生的顏色深淺來判斷的，而本發(fā)明的均相發(fā)光 免疫層析技術(shù)是通過熒光的強弱來判斷的，靈敏度會更高；2、膠體金試紙條檢測過程中，膠 體金顆粒隨樣品在NC膜上，從加樣端向吸水紙端擴散，沒有和T線上抗體結(jié)合的膠體金顆 粒很難被樣品中的液體沖洗干凈，從而滯留在NC膜上產(chǎn)生背景。而在均相化學(xué)發(fā)光試紙條 中，供體微粒替代膠體金顆粒在NC膜上擴散，供體微粒在檢測時本身不產(chǎn)生615nm熒光，即 便沒有沖洗干凈也不產(chǎn)生背景；在T線附近，即使有殘留的供體微粒存在，只要和受體微粒 距離大于200nm就不會產(chǎn)生背景熒光，就如同在均相反應(yīng)過程中一樣。因此，對目標(biāo)蛋白的 檢測靈敏度會有很大提高。3、均相化學(xué)發(fā)光方法中受體微粒中包裹的銪配合物被激發(fā)后發(fā) 射出的615nm焚光的壽命很長，可以達到1毫秒以上，而一般物質(zhì)的焚光的壽命只有幾十納 秒。因此，可以通過時間分辨技術(shù)，只檢測激發(fā)光源關(guān)閉后100微秒以后的光強度，就可以 去除生物樣本如血液產(chǎn)生的背景熒光的干擾，檢測的靈敏度和特異性也會由此提高。一般 認(rèn)為，用試紙條方法檢測，加樣后液體會擴散到吸水紙端，NC膜上就會干燥，均相化學(xué)發(fā)光 方法中單線態(tài)氧的傳輸又是依賴水的存在才能從供體微球擴散到受體微球，一旦NC膜失 去水分，即使兩種微球相互結(jié)合了也不會發(fā)生信號，造成假陰性。但本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，只要樣品 多加一些，能通過NC膜擴散到濾紙端的水溶液的量是有限的，濾紙端能吸收的水溶液量也 是有限的。在半小時內(nèi)，NC膜其實還是保持濕潤狀態(tài)，單線態(tài)氧還是可以從供體微球傳輸 到供體微球，不會影響檢測結(jié)果。另外，由于擔(dān)心兩種微球再干燥后復(fù)溶，會造成微球破裂 和包裹物質(zhì)泄漏，造成檢測結(jié)果不準(zhǔn)確，因此兩種微球一般都液態(tài)保存。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)只要緩 沖液中加入合適的保護劑（即，采用本發(fā)明的緩沖液），微球容易復(fù)溶并且與干燥前的性質(zhì) 變化不大。
[0051] 因此，本發(fā)明的均相化學(xué)發(fā)光免疫層析試紙條，不但對目標(biāo)蛋白的檢測靈敏度比 膠體金試紙條高，而且還保留了膠體金免疫層析試紙條的檢測速度快、產(chǎn)品為干式、操作簡 單等特點。檢測靈敏度的提高，可以大大擴展試紙條的應(yīng)用范圍。
【附圖說明】
[0052] 下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的【具體實施方式】作進一步詳細(xì)說明。
[0053] 圖1為AlhpaLISA原理圖（現(xiàn)有技術(shù)）；
[0054] 圖2為試紙條的立體結(jié)構(gòu)示意圖；
[0055] 圖3為圖2的俯視示意圖；
[0056] 圖4是圖2的實際使用狀態(tài)示意圖；
[0057] 圖5是均相化學(xué)發(fā)光試紙條檢測CTnI劑量-反應(yīng)曲線。
[0058] 圖6是均相化學(xué)發(fā)光試紙條檢測CRP劑量-反應(yīng)曲線。
【具體實施方式】
[0059] 實施例1、一種基于均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)的快速診斷試紙條，包括PVC底板1、樣品墊 2、玻璃纖維墊3、包被C線（即，控制線）6以及T線（即，測試線）7的硝酸纖維素膜4、吸 水墊5。
[0060] 在PVC底板1的上表面固定設(shè)置硝酸纖維素膜4,在硝酸纖維素膜4的兩側(cè)分別設(shè) 有玻璃纖維墊3和吸水墊5 ;除玻璃纖維墊3的右端下表面與硝酸纖維素膜4的左端上表 面固定相連之外，玻璃纖維墊3的其余下表面與PVC底板1的上表面固定相連；除吸水墊5 的左端下表面與硝酸纖維素膜4的右端上表面固定相連之外，吸水墊5的其余下表面與PVC 底板1的上表面固定相連；在玻璃纖維墊3的左側(cè)還設(shè)有樣品墊2,除樣品墊2的右端下表 面與玻璃纖維墊3的左端上表面固定相連之外，樣品墊2的的其余下表面與PVC底板1的 上表面固定相連。
[0061] 該玻璃纖維墊3的制備方法為：
[0062] 將結(jié)合了（偶聯(lián)了）兔抗人心肌肌鈣蛋白CTnI抗體的供體微球用釋放緩沖液混 合稀釋到80ug/ml，用BIO-DOT點膜儀噴到玻璃纖維墊3的中間區(qū)域（如圖3所示），用量 為lul/cm ;噴好后37°C烘干4小時。釋放緩沖液為：在100mL的20mmol/L的磷酸鹽緩沖液 (pH 7. 4)中加入30g蔗糖、5g海藻糖、0. 5g的N，0-雙三甲硅基乙酰胺、0. 3g慶大霉素。
[0063] 上述結(jié)合了兔抗人心肌肌鈣蛋白cTnl抗體的供體微球的制備方法為：
[0064] 兔抗人心肌肌鈣蛋白cTnl抗體購自美國ABCAM公司。供體微球為酞菁顆粒購自 美國PerkinElmer公司，貨號為6762013 ;這種微球直徑約200nm，其表面有官能團。根據(jù)該 供體微球的說明書，將兔抗人心肌肌鈣蛋白cTnl偶聯(lián)到供體微球上。在使用前，用釋放緩 沖液將結(jié)合了兔抗人心肌肌鈣蛋白cTnl抗體的供體微球稀釋至80ug/ml (為兔抗人心肌肌 鈣蛋白cTnl抗體的濃度）。
[0065] 硝酸纖維素膜4的制備方法為：
[0066] 將偶聯(lián)了鼠抗人心肌肌鈣蛋白cTnl單克隆抗體的受體微球和偶聯(lián)了羊抗兔IgG 多克隆抗體的受體微球，分別用分析緩沖液稀釋到200ug/ml，然后用噴膜儀將該液體噴到 NC膜上，用量是lul/cm。具體為：偶聯(lián)了鼠單抗（鼠抗人心肌肌鈣蛋白cTnl單克隆抗體） 的受體微球噴到硝酸