纖維素膜4的T線位置，偶聯(lián)了羊抗兔（羊抗兔IgG多克隆抗體）的受 體微球噴到硝酸纖維素膜4的C線位置。T線與C線是相互平行的兩條線（如圖3所示）， 間距一般為5mm。噴好后37°C烘干4小時(shí)。
[0067] 上述偶聯(lián)了鼠抗人心肌肌鈣蛋白cTnl單克隆抗體的受體微球和偶聯(lián)了羊抗兔多 克隆抗體受體微球的制備方法為：
[0068] 鼠抗人心肌肌鈣蛋白cTnl單克隆抗體和羊抗兔多克隆抗體均購自美國ABCAM 公司；受體微球（摻雜有銪配合物的聚苯乙稀微球）購自美國PerkinElmer公司，貨號(hào)為 6772001 ;這種微球直徑約200nm，其表面有官能團(tuán)。根據(jù)該受體微球的說明書，將鼠抗人心 肌肌鈣蛋白cTnl單克隆抗體偶聯(lián)到受體微球上，將羊抗兔IgG多克隆抗體偶聯(lián)到另外的受 體微球上。在使用前，用分析緩沖液將偶聯(lián)了鼠抗人心肌肌鈣蛋白cTnl單克隆抗體的受體 微球和偶聯(lián)了羊抗兔IgG多克隆抗體的受體微球稀釋至200ug/ml (為鼠抗人心肌肌鈣蛋白 cTnl單克隆抗體的濃度、羊抗兔IgG多克隆抗體的濃度）。
[0069] 該分析緩沖液為：在100mL的HEPES緩沖液（25mM，pH7. 4)中加入200mg的 Dextran-500,加入NaCl直至其濃度為50mM、加入0· 5g的BSA、0. 02g的牛γ -球蛋白、0· Ig 的 Tween_20、0· Olg 的 Proclin-300〇
[0070] 試紙條的組裝：
[0071] 在PVC底板1上，依次粘貼上層析膜一硝酸纖維素膜4 (長(zhǎng)30cm，寬2. 5cm)、玻璃 纖維墊3 (長(zhǎng)30cm，寬8mm)、樣品墊2 (長(zhǎng)30cm，寬17mm)和吸水墊5 (長(zhǎng)30cm，寬17mm)。用 切條機(jī)將粘貼好的塑料板縱向切成3. 8mm寬的試紙條（即，本發(fā)明的基于均相化學(xué)發(fā)光技 術(shù)的快速診斷試紙條），放入扣卡中組裝成免疫層析試劑盒，干燥后密封，4°C避光保存。
[0072] 實(shí)驗(yàn) 1、
[0073] 材料：cTnl標(biāo)準(zhǔn)品（lmg/ml)購自美國Sigma-Aldrich公司；實(shí)施例1制備所得的 基于均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)的快速診斷試紙條。
[0074] 步驟：
[0075] L 用 20mM，ρΗ7· 4 的 PBS 緩沖液配置 100、10、1、0· 1、0· 01、0ng/ml 的 cTnl 溶液；
[0076] 2.將不同濃度的cTnl各IOOul溶液，分別加到不同試紙條的樣品墊2上（如圖4 所示）；每個(gè)濃度用不同的試紙條檢測(cè)6次。
[0077] 避光靜置lOmin，取出試紙條；將試紙條置于PerkinElmer公司的2300EnSpire? 光激化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)中測(cè)試，讀取實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，如表1所示。
[0078] 表 1
[0079]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 基于均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)的快速診斷試紙條，其特征是：包括PVC底板（I)、樣品墊 (2)、玻璃纖維墊（3)、包被C線（6)以及T線（7)的硝酸纖維素膜（4)、吸水墊（5); 在PVC底板（1)的上表面固定設(shè)置硝酸纖維素膜（4)，在硝酸纖維素膜（4)的兩側(cè)分 別設(shè)有玻璃纖維墊（3)和吸水墊（5);除玻璃纖維墊（3)的右端下表面與硝酸纖維素膜（4) 的左端上表面固定相連之外，玻璃纖維墊（3)的其余下表面與PVC底板（1)的上表面固定 相連；除吸水墊（5)的左端下表面與硝酸纖維素膜（4)的右端上表面固定相連之外，吸水墊 (5)的其余下表面與PVC底板⑴的上表面固定相連；在玻璃纖維墊（3)的左側(cè)還設(shè)有樣 品墊（2)，除樣品墊（2)的右端下表面與玻璃纖維墊（3)的左端上表面固定相連之外，樣品 墊（2)的其余下表面與PVC底板（1)的上表面固定相連。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)的快速診斷試紙條，其特征是： 玻璃纖維墊（3)中包被有偶聯(lián)了特異性抗體I的供體微球； 玻璃纖維墊（3)的制備方法為： 將偶聯(lián)了特異性抗體I的供體微球用釋放緩沖液稀釋至濃度為80~lOOug/ml，噴至 玻璃纖維墊（3)上，用量為：1~5ul/cm ; 所述釋放緩沖液為：在100mL的10~100mmol/L、pH 7. 4的磷酸鹽緩沖液或硼酸鹽緩 沖液中，加入10~40g蔗糖、3~IOg海藻糖、0. 5~Ig的N，0-雙三甲硅基乙酰胺、0. 2~ 0. 5g慶大霉素； 硝酸纖維素膜（4)的制備方法為： 將偶聯(lián)了特異性抗體II的受體微球用分析緩沖液稀釋至濃度為200~300ug/ml，然后 噴至硝酸纖維素膜（4)的T線（7)位置；用量為：1~I. 5ul/cm ; 將偶聯(lián)了能與所述特異性抗體I相結(jié)合的特異性抗體III的受體微球用分析緩沖液稀 釋至濃度為200~300ug/ml，然后噴至硝酸纖維素膜（4)的C線（6)位置；用量為：1~ 1. 5ul/cm ； 所述分析緩沖液為：在100ml的25mM、pH7. 4的HEPES緩沖液中加入100~500mg的 Dextran-500,加入NaCl直至其濃度為10~lOOmM、加入0· 1~Ig的BSA、0. 01~0· 05g的 牛 γ -球蛋白、0· 001 ~0· 5g 的 Tween_20、0· 01 ~0· 05g 的 Proclin-300 ; 所述特異性抗體I和特異性抗體II均能與待測(cè)蛋白特異性結(jié)合，且結(jié)合在待測(cè)蛋白質(zhì) 的不同表位。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的基于均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)的快速診斷試紙條，其特征是： 特異性抗體I和特異性抗體II為以下任意一種： 兔、羊、雞來源的抗待測(cè)蛋白質(zhì)的多抗，或者鼠、兔來源的抗待測(cè)蛋白質(zhì)的單克隆抗體。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的基于均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)的快速診斷試紙條，其特征是： 所述玻璃纖維墊（3)中： 所述供體微球?yàn)樘碱w粒； 所述特異性抗體I為兔抗人心肌肌鈣蛋白cTnl抗體、鼠抗人C反應(yīng)蛋白（CRP)單克隆 抗體1 ; 硝酸纖維素膜（4)中： 特異性抗體II為：鼠抗人心肌肌鈣蛋白cTnl單克隆抗體、鼠抗人C反應(yīng)蛋白（CRP)單 克隆抗體2 ; 特異性抗體III為：羊抗兔IgG多克隆抗體、羊抗鼠 IgG多克隆抗體； 受體微球?yàn)椋壕郾揭蚁┪⑶颉?br>5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的基于均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)的快速診斷試紙條，其特征是： 玻璃纖維墊（3)的制備方法中：將偶聯(lián)了兔抗人心肌肌鈣蛋白cTnl抗體的供體微球用 釋放緩沖液混合稀釋到80ug/ml，噴至玻璃纖維墊（3)上，用量為lul/cm ; 硝酸纖維素膜（4)的制備方法中：將偶聯(lián)了鼠抗人心肌肌鈣蛋白cTnl單克隆抗體的受 體微球用分析緩沖液稀釋到200ug/ml，噴至硝酸纖維素膜（4)的T線（7)位置，用量為Iul/ cm ;將偶聯(lián)了羊抗兔IgG多克隆抗體的受體微球用分析緩沖液稀釋到200ug/ml，噴至硝酸 纖維素膜（4)的C線（6)位置，用量為lul/cm。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的基于均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)的快速診斷試紙條，其特征是： 所述釋放緩沖液為：在100mL的20mmol/L、pH 7. 4的的磷酸鹽緩沖液中加入30g蔗糖、 5g海藻糖、0. 5g的N，O-雙三甲硅基乙酰胺、0. 3g慶大霉素； 所述分析緩沖液的制備方法為：在100mL的25mM，pH7. 4的HEPES緩沖液中加入200mg 的Dextran-500,加入NaCl直至其濃度為50mM、加入0· 5g的BSA、0. 02g的牛γ -球蛋白、 0· Ig 的 Tween_20、0· Olg 的 Proclin-300〇
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種基于均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)的快速診斷試紙條，包括PVC底板、樣品墊、玻璃纖維墊、包被C線以及T線的硝酸纖維素膜、吸水墊；玻璃纖維墊中包被有偶聯(lián)了特異性抗體Ⅰ的供體微球；硝酸纖維素膜的T線為偶聯(lián)了特異性抗體Ⅱ的受體微球，硝酸纖維素膜的C線為偶聯(lián)了能與所述特異性抗體Ⅰ相結(jié)合的特異性抗體Ⅲ的受體微球；所述特異性抗體Ⅰ和特異性抗體Ⅱ均能與待測(cè)蛋白特異性結(jié)合，且結(jié)合在待測(cè)蛋白質(zhì)的不同表位。該診斷試紙條具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、快捷、簡(jiǎn)便、可定量，適合快速診斷等特點(diǎn)。
【IPC分類】G01N33-68, G01N33-543, G01N33-558
【公開號(hào)】CN104833798
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510206008
【發(fā)明人】朱成鋼, 賈亮
【申請(qǐng)人】杭州金溪生物技術(shù)有限公司
【公開日】2015年8月12日
【申請(qǐng)日】2015年4月27日