隨著靶物質(zhì)濃度的逐漸升高，其信號飽和度指數(shù) 曲線逐步降低，這一變化趨勢就整體而言呈平滑且略帶S狀圖像，在雙向曲線圖像內(nèi)側(cè)的 中段（約為雙向曲線的兩拐點之間）曲線的線性趨勢符合Y = a+bXx規(guī)律。具體見圖2。
[0091] 15、頂點：
[0092] HB雙向曲線上實驗信號強度的最高點，稱為頂點。復(fù)合HB雙向曲線圖像中，S1與 S2兩雙向曲線的頂點分別為P1、P2。
[0093] 16、頂點擺動現(xiàn)象：
[0094] 在復(fù)合HB雙向曲線圖像中，根據(jù)不同時點采集信號所繪制的S1與S2兩條HB雙 向曲線的頂點不在同一條針對橫軸的垂線上，所對應(yīng)的函數(shù)x (橫軸上的靶物質(zhì)濃度）亦不 同，由此導(dǎo)致曲線頂點隨著反應(yīng)時間的延長或縮短而呈現(xiàn)左右（即橫軸靶物質(zhì)的低濃度端 與高濃度端）擺動的現(xiàn)象稱為頂點擺動現(xiàn)象。在同一實驗體系既定的反應(yīng)時段內(nèi)，其頂點 擺動的幅度取決于兩曲線信號采集時間的間隔長度。具體見圖2及3。
[0095] 17、輔助線M:
[0096] 確定HB雙向曲線的頂點（P1及P2)及其兩者在橫軸上的投影值，確認(rèn)兩投影點 的X軸讀數(shù)差值的中點Pe，經(jīng)Pe點對X軸所做垂線為輔助線M，輔助線M因其與橫軸及S1、 S2、SSI等相交并產(chǎn)生Pe、Al、A2及Q等重要分析界點，又稱為界點承載線。具體見圖2。
[0097] 18、A1 :
[0098] 在復(fù)合雙向曲線圖像中，輔助線M與S1雙向曲線的交點稱之為A1，該點將S1雙向 曲線分為左右兩部分，曲線右側(cè)部分不含頂點及其圍頂點區(qū)段，作為S1曲線的有效判斷區(qū) 段分析實驗結(jié)果可避免圍頂點效應(yīng)的干擾，具體見圖2。
[0099] 19、A2:
[0100] 在復(fù)合雙向曲線圖像中，輔助線M與S2雙向曲線的交點稱之為A2，該點將S2雙向 曲線分為左右兩部分，曲線左側(cè)部分不含拐點及其圍頂點區(qū)段，作為S2曲線的有效判讀區(qū) 段分析實驗結(jié)果可避免圍頂點效應(yīng)的干擾，具體見圖2。
[0101] 20, Q ：
[0102] 在復(fù)合雙向曲線圖像中，輔助線M與SSI曲線的交點稱之為Q (又稱為界點Q)點， 該點是區(qū)分被測定標(biāo)本實驗結(jié)果判讀曲線及曲線部位的界點。根據(jù)被測定標(biāo)本SSDI值與 Q值的比較將其分為兩組，SSDI值大于Q者根據(jù)S2測值在S2雙向曲線左側(cè)查讀實驗結(jié)果， SSDI值小于Q者根據(jù)S1測值在S1雙向曲線右側(cè)查讀實驗結(jié)果，具體見圖2。（相關(guān)界點間 橫軸函數(shù)值關(guān)系：Pe(x) = (Pl-P2)/2 = Q = Al = A2)
[0103] 21、先 BALiCA 與后 BALiCA :
[0104]當(dāng)前市售LiCA在實驗試劑體系中引入了生物素抗生物素系統(tǒng)（BAS)，其目的在于 增強免疫物質(zhì)結(jié)合的速率與實驗信號生成的穩(wěn)定性。BAS的介入使LiCA的實驗過程包含 了抗原抗體結(jié)合及生物素抗生物素結(jié)合等兩項主要的生物學(xué)反應(yīng)。理論上講，兩者的反應(yīng) 可在同一體系中同步發(fā)生，也可因加入順序的不同而序貫發(fā)生。在實際應(yīng)用中，我們將分別 含生物素與抗生物素的試劑在免疫反應(yīng)前預(yù)先混合，讓其發(fā)生BA受體結(jié)合反應(yīng)，然后加入 被檢測物質(zhì)進(jìn)行免疫反應(yīng)的實驗方式稱之為先BALiCA，而將先加入免疫試劑（含為生物素 標(biāo)記的免疫反應(yīng)物）與被檢測物質(zhì)做免疫反應(yīng)，然后再加入抗生物素標(biāo)記微球并進(jìn)行BA結(jié) 合反應(yīng)的LiCA實驗稱之為后BA免疫反應(yīng)。多時點檢測LiCA同時適用于上述兩種實驗反 應(yīng)方式，能取得大致相同的實施效果，但因多時段反應(yīng)及多次信號探測費時較常規(guī)LiCA為 多，而先BALiCA的實施在反應(yīng)時段的安排上較后BALiCA能為本申請方法提供更大的空間。 上述分類同時適宜其它受體反應(yīng)與抗原抗體反應(yīng)同時存在的實驗方法。
[0105] 22、真值與假性對映值
[0106] 在采用雙向曲線進(jìn)行參比時，每一標(biāo)本在某時點所取得的單一實驗信號在對應(yīng)曲 線圖像上均存在兩個呈鏡像狀態(tài)，且高低迥異的靶物質(zhì)濃度數(shù)值。申請者將能代表靶物質(zhì) 濃度的數(shù)值稱為靶物質(zhì)濃度真值，而將另一數(shù)值稱為"假性對映值"。
[0107] 【實施例1】時間依賴性多時點分析方法在光激發(fā)化學(xué)發(fā)光（LiCA)(以下簡稱多時 點LICA)檢測血清中HBsAg的應(yīng)用（先BA結(jié)合型LICA實驗）
[0108] (一）實驗材料
[0109] 1.儀器與耗材
[0110] 1)實驗儀器：LiCAHT光激化學(xué)發(fā)光檢測儀，中國博陽生物（上海）科技有限公司 制造。
[0111] 2)人工智能數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：自制軟件處理系統(tǒng)。
[0112] 3)實驗耗材：同上由中國博陽生物（上海）科技有限公司提供。
[0113] 2.實驗試劑和標(biāo)本
[0114] l)LiCAHBsAg檢測試劑由中國博陽生物（上海）科技有限公司生產(chǎn)，市售獲得。包 括：
[0115] 試劑1 :R1. Anti-HBs包被發(fā)光微球；
[0116] 試劑2 :R2?生物素化的anti-HBs ;
[0117] 試劑3 :R3.包被鏈親和素（SA)的感光微球；
[0118] 試劑4 :實驗稀釋系統(tǒng)，市售試劑系統(tǒng)攜帶；
[0119] 2)參比標(biāo)準(zhǔn)品
[0120] ①自制參比品儲存液：自感染者血清中純化（密度梯度離心法，BSA參比光譜吸收 法定量），濃度7. 62mg/ml，置-30 °C凍存。
[0121] ②自制參比品：該提取物采用實驗稀釋系統(tǒng)調(diào)整濃度（2400.0 μg/ml)，經(jīng)濃度標(biāo) 定后稀釋，適量分裝，-30°C凍存，供室內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)參比，及回收實驗標(biāo)本使用。參比品濃度與數(shù) 量的設(shè)定規(guī)則與HB雙向曲線結(jié)構(gòu)及其擬合方式關(guān)聯(lián)并參照臨床檢測的方便程度（表1)，具 體使用濃度見表2?；厥諏嶒灅?biāo)本的設(shè)定參照表3。
[0122] ③市售參比品：市售LiCA試劑盒隨帶，共6份。HBsAg濃度分別為：0.0ng/ml， 0? 6g/ml，4. 6ng/ml，18. 3ng/ml，200.0 ng/ml，500.0 ng/ml (定量上限 500ng/ml)。
[0123] 3)對照血清
[0124] 陰性對照與陽性對照血清：市售試劑盒攜帶，用于域值確認(rèn)，及試劑反應(yīng)性評價。
[0125] 4)檢測標(biāo)本：血清、血漿、體液、或體外培養(yǎng)物。
[0126] 3.人工智能分析系統(tǒng)
[0127] "復(fù)合HB雙向劑量反應(yīng)曲線圖像法分析體系"，其宏觀邏輯框架見
【發(fā)明內(nèi)容】
。用于 血清HBsAg檢測的專項智能分析系統(tǒng)構(gòu)建亦在上述分析系統(tǒng)的框架內(nèi)完成（見后分析系 統(tǒng)構(gòu)建）。
[0128] (二）實驗步驟
[0129] 1.實驗準(zhǔn)備：
[0130] 取出所有試劑與標(biāo)本，恢復(fù)至室溫，按需調(diào)整至工作濃度。
[0131] 2.實驗操作
[0132] 1)取試劑R2、R3等體積，混合，室溫放置15min ;
[0133] 2)加至LiCA實驗反應(yīng)板各孔中，每孔（管）200 yl ;
[0134] 3)加入 RUlOOyl/孔（管）），混合；
[0135] 4)取待測標(biāo)本，陰、陽性對照，及HBsAg定量標(biāo)準(zhǔn)血清系列各25 y 1，分別加至LiCA 反應(yīng)板各孔中，每份標(biāo)本加一孔；
[0136] 5)混合實驗體系，置LiCA發(fā)光檢測儀上，育溫15min(此時間點即為T1)。（注意 消除各孔間免疫反應(yīng)時間差，下同）；
[0137] 6)在680nm激發(fā)，610nm波長檢測條件下檢測各孔實驗信號（S1)，并將各信號值輸 送至人工智能數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；
[0138] 7)繼續(xù)放置15min (達(dá)T2時點，即標(biāo)本與實驗體系混合后30min);
[0139] 8)置LiCA發(fā)光檢測儀上，680nm激發(fā)，610nm波長檢測各孔實驗信號（S2)，并將信 號輸送至人工智能數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；
[0140] 9)由人工智能系統(tǒng)根據(jù)實驗者指令對上述實驗信號進(jìn)行綜合分析，并報道檢測結(jié) 果。
[0141] (三）實驗分析系統(tǒng)構(gòu)建與應(yīng)用
[0142] 1、專項革巴物質(zhì)（即fffisAg)檢測分析系統(tǒng)的構(gòu)建過程
[0143] 1)采用超過100個濃度點的系列HBsAg稀釋標(biāo)準(zhǔn)參比品，濃度范圍設(shè)定涵蓋整 個HB雙向曲線有效圖像，樣本的濃度區(qū)間設(shè)定為質(zhì)點間間隔0. 025-0. 05個橫軸讀數(shù)（X 軸），進(jìn)行10次或以上重復(fù)LICA檢測，取每個濃度點各次LICA檢測的實驗信號平均值作為 該點對應(yīng)的實驗信號；
[0144] 2)于整個反應(yīng)體系混合后的不同時點（免疫反應(yīng)經(jīng)歷的時點，T1及T2)檢測實驗 信號（S1及S2);
[0145] 3)將實驗數(shù)據(jù)納入人工智能分析系統(tǒng)，啟動系統(tǒng)中曲線模擬程序，進(jìn)行普通及高 密度質(zhì)點函數(shù)實驗參比曲線圖像模擬（一次或多次，整體模擬、分隔模擬與分段模擬相結(jié) 合）。并據(jù)此形成用于血清HBsAg檢測的實驗結(jié)果分析體系；
[0146] 4)采用高溯源質(zhì)控物以同上方式對上述曲線進(jìn)行模擬核對（可用低密度擬合）；
[0147] 5)有選擇性地將該程序用于不同地區(qū)檢測單位，通過具體的田間實驗驗證并修正 分析系統(tǒng)。
[0148] 2、復(fù)合HB雙向劑量反應(yīng)曲線圖像法人工智能分析系統(tǒng)軟件數(shù)據(jù)處理路徑：
[0149] 1)獲取并計算實驗結(jié)果，得到Sl、S2、SSDI三組數(shù)據(jù)；
[0150] 2)應(yīng)用實驗參比品檢測數(shù)據(jù)輸入，調(diào)出并修正機內(nèi)儲存實驗體系，構(gòu)建出適合當(dāng) 次實驗使用的復(fù)合HB雙向劑量分析曲線圖像分析系統(tǒng)；
[0151] 3)通過對HB雙向劑量反應(yīng)曲線及其曲線回歸分析方法的應(yīng)用，為Hook效應(yīng)的消 弭及其定量范圍的顯著拓展提供有效的定量分析空間；
[0152] 4)綜合應(yīng)用S1雙向曲線、S2雙向曲線，及SSI曲線，三者間關(guān)系的分析結(jié)果，確認(rèn) 檢測標(biāo)本靶物質(zhì)濃度（真值）查讀所采用的曲線區(qū)段，以此解決雙向曲線參比分析中的對 映值現(xiàn)象對實驗結(jié)果分析的干擾。
[0153] 5)應(yīng)用頂點偏移（或稱頂點漂移）的實驗現(xiàn)象解決圍頂點效應(yīng)造成的局部區(qū)段 (圍頂點區(qū)段）定量分析精度下降的問題。（具體方法如示意圖2所述）；
[0154] 6)利用類Hook效應(yīng)判點，標(biāo)識出曲線右側(cè)低信號區(qū)段內(nèi)定量分析精度下降的標(biāo) 本（該現(xiàn)象僅出現(xiàn)在極其罕見的超高靶物質(zhì)濃度的實驗標(biāo)本中）；
[0155]3、人工智能系統(tǒng)軟件路徑的圖像法顯示
[0156] 該系統(tǒng)運作的基本路徑可以由復(fù)合HB雙向劑量反應(yīng)曲線圖像加以顯示。其具體 繪制方法可簡括為：①輸入并處理全部數(shù)據(jù)，繪制出三條曲線（S1、S2、SSI);②通過計算確 認(rèn)S1及S2曲線的頂點；③在人工智能軟件引導(dǎo)下繪制N及M輔助線；④根據(jù)輔助線M與三 條曲線的交點定位A1、A2及Q三點，并確認(rèn)其函數(shù)點值（y與x);⑤以此三點點值為參照確 定結(jié)果查讀區(qū)段，并查讀被檢測標(biāo)本的靶物質(zhì)濃度。上述界點均系通過解析函數(shù)法計算求 得。
[0157] 4、實驗結(jié)果分析技術(shù)路徑
[0158] 1)輸入實驗標(biāo)本序號，人工智能系統(tǒng)自動查讀被檢測標(biāo)本當(dāng)次實驗中的信號檢測 強度Sl、S2,計算其SSDI，并將其與當(dāng)次分析系統(tǒng)選定的Q界點值進(jìn)行比較，以確定實驗結(jié) 果在圖像分析系統(tǒng)上的查讀區(qū)段；
[0159] 2):結(jié)果查讀（計算）區(qū)段采信標(biāo)準(zhǔn)：
[0160] SSDI值大于Q值：根據(jù)T2時點信號強度在S2雙向曲線A2界點的左側(cè)查讀檢測 結(jié)果；
[0161] SSDI值小于Q值：根據(jù)T1時點信號強度在S1雙向曲線A1界點的右側(cè)查讀檢測 結(jié)果；
[0162] 3)陰陽性結(jié)果的判斷
[0163] 以閾值（即空白孔實驗信號X2. 1)為界點判斷，低于此值者為陰性；高于此值者 為陽性，陽性者須做靶物質(zhì)濃度的定量分析。
[0164] 4)陽性結(jié)果的定量分析
[0165]依據(jù)各自測定數(shù)據(jù)（實驗信號，即y)，采用公式法計算（由分析系統(tǒng)執(zhí)行）被測定 標(biāo)本在S1及S2兩條雙向曲線上指定查讀區(qū)內(nèi)的靶物質(zhì)濃度對數(shù)（即實驗信號Y的對應(yīng)函 數(shù)X，計算公式：
計算方法參照分析系統(tǒng)建立，并反向進(jìn)行。
[0166]5)將所獲取并采信的x函數(shù)（濃度的對數(shù)數(shù)值）轉(zhuǎn)換為靶物質(zhì)濃度值（ng/ml)， 并根據(jù)實驗者指令輸出實驗結(jié)果。
[0167] (四）實驗結(jié)果
[0168] 1、血清HBsAg檢測時間依賴性多時點光激發(fā)化學(xué)發(fā)光實驗（以下簡稱多時點 LiCA)的實驗結(jié)果定量分析系統(tǒng)見圖2。
[0169] 2、幾項主要的分析數(shù)據(jù)
[0170] 實施HBsAg多時點LiCA檢測所需要的有關(guān)中間數(shù)據(jù)由分析系統(tǒng)運算后取得，本次 實驗部分關(guān)鍵的界點數(shù)據(jù)見表1。
[0171] 表1HBsAg檢測先BA結(jié)合型多時點LiCA實驗結(jié)果分析中間數(shù)據(jù)
[017...