2]
[0173] * :表中閾值的計(jì)算方法系根據(jù)既往文獻(xiàn)習(xí)慣沿用，亦可根據(jù)其它方式確認(rèn)；# :輔 助線M即為界點(diǎn)承載線，此線上各個(gè)界點(diǎn)值的x值相同（Pe(x) = (Pl(x)-P2(x))/2 = Q = A1 = A2)，y值取自M與各曲線的交點(diǎn)。
[0174]3、采用多時(shí)點(diǎn)LiCA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)參比品濃度及其定量分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2
[0175] 表2血清HBsAg專利法LiCA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)參比品濃度設(shè)定及實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0176]
[0178] 4、回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0179] 采用多時(shí)點(diǎn)LICA對(duì)一組系列稀釋的自制參比血清進(jìn)行檢測(cè)，并以前述建立（試驗(yàn) 階段）的人工智能系統(tǒng)對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。
[0180] 表3血清HBsAg先BA結(jié)合型多時(shí)點(diǎn)LiCA檢測(cè)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0181]
[0182] * :飽和度指數(shù)：計(jì)算方法為SSDI = (S1/S2) X 100X 10000,不同實(shí)驗(yàn)方法所采用 的系數(shù)不同；
[0183] 5、臨床檢測(cè)結(jié)果
[0184] 1)采用多時(shí)點(diǎn)LiCA對(duì)一組臨床標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，并與常規(guī)LiCA進(jìn)行比較，結(jié)果見(jiàn) 表4。72例未經(jīng)篩選的臨床患者，兩法HBsAg陽(yáng)性檢出率均為16.7%。常規(guī)LiCA檢測(cè)因 Hooks效應(yīng)導(dǎo)致的定量檢測(cè)結(jié)果總體偏離率達(dá)50.0%。其中定量失報(bào)率（即因溢值狀態(tài)而 不能給出確切定量數(shù)據(jù)標(biāo)本）為16. 67% ;定量錯(cuò)報(bào)率（結(jié)果偏離真值5倍以上）33. 3% ;
[0185] 表4先BA結(jié)合型多時(shí)點(diǎn)LiCA臨床檢測(cè)及其與常規(guī)LICA的比較
[0186]
[0187] * :血清采集當(dāng)日檢測(cè)單位的實(shí)驗(yàn)編號(hào)。# :常規(guī)LiCA檢測(cè)未能報(bào)道確切濃度的標(biāo) 本。
[0188] 2)采用多時(shí)點(diǎn)LiCA對(duì)一組雅培化學(xué)發(fā)光定量檢測(cè)溢值（二步免疫法，>250IU/ml， 67份）的血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，并與常規(guī)LiCA進(jìn)行比較。全部血清兩法HBsAg檢測(cè)均陽(yáng)性， 其濃度均值分別為6729. 32 ± 1396. 26及217. 85 ±69. 73,前者均值為后者31. 03倍。未發(fā) 現(xiàn)濃度依賴性假陰性現(xiàn)象。其檢測(cè)結(jié)果的濃度區(qū)間分布見(jiàn)表5。
[0189] 表5采用兩種LiCA對(duì)一組雅培試劑HBsAg溢值血清檢測(cè)結(jié)果
[0190]
[0191 ] * :例數(shù)/百分率（以全體實(shí)驗(yàn)對(duì)象為100% )
[0192] (五）多時(shí)點(diǎn)LiCA檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)信號(hào)衍變特征
[0193] 采用同上實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行檢測(cè)，于免疫反應(yīng)的不同時(shí)點(diǎn)（Tl、T2、T3、T4、T5)進(jìn)行實(shí) 驗(yàn)信號(hào)（S1-S5)采集，并以同上方式將其繪制到復(fù)合HB雙向劑量反應(yīng)曲線圖像（圖3) 中，結(jié)果顯示，在既定的時(shí)段內(nèi)，因反應(yīng)時(shí)點(diǎn)改變而導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)信號(hào)強(qiáng)度變化并非局限于前 述專利法中的某特定時(shí)點(diǎn)，而頂點(diǎn)擺動(dòng)現(xiàn)象亦出現(xiàn)在所觀察時(shí)段免疫反應(yīng)的全過(guò)程。
[0194] (六）結(jié)論：
[0195] 1、方法敏感性：兩法（多時(shí)點(diǎn)LiCA與常規(guī)LiCA)相同，< 1.Ong/ml;
[0196] 2、定量范圍：
[0197] 常規(guī) LiCA : 1. 0500 (1000) ng/ml ；
[0198] 多時(shí)點(diǎn) LiCA :1. 0-100000 ~1000000ng/ml。
[0199] 兩者比較：專利法LiCA較常規(guī)LiCA拓展100~1000倍。
[0200] 3、實(shí)施效果：
[0201] 1)通過(guò)對(duì)HB雙向劑量反應(yīng)曲線及其曲線回歸分析方法的應(yīng)用，顯著拓展常規(guī) LiCA的定量分析空間；
[0202] 2)綜合應(yīng)用S1雙向曲線、S2雙向曲線及其SSI曲線三者關(guān)系的分析結(jié)果，確認(rèn)檢 測(cè)標(biāo)本靶物質(zhì)濃度（真值）計(jì)算與查讀所采用的曲線區(qū)段，以此解決雙向曲線參比分析中 的假性對(duì)映值對(duì)定量分析的干擾；
[0203] 3)應(yīng)用頂點(diǎn)偏移（或稱頂點(diǎn)漂移）的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，解決圍頂點(diǎn)效應(yīng)造成的局部區(qū)段 參比定量分析精度下降的問(wèn)題；
[0204] 4)利用類Hook效應(yīng)判點(diǎn)，標(biāo)識(shí)出曲線右側(cè)低信號(hào)區(qū)段內(nèi)實(shí)驗(yàn)精度下降的標(biāo)本（該 現(xiàn)象僅出現(xiàn)在極其罕見(jiàn)的超高靶物質(zhì)濃度的實(shí)驗(yàn)標(biāo)本中）。
[0205] 5)對(duì)不同時(shí)點(diǎn)采集的兩條HB雙向劑量反應(yīng)曲線實(shí)施分別擬合，分段擬合及其分 別應(yīng)用，為提升定量分析結(jié)果的精度提供了重要的保障。
[0206] 【實(shí)施例2】時(shí)間依賴性多時(shí)點(diǎn)分析方法在光激發(fā)化學(xué)發(fā)光（LiCA)檢測(cè)血清中抗 HBc的應(yīng)用（后BA結(jié)合型LiCA實(shí)驗(yàn)）
[0207] 本實(shí)施例與實(shí)施例1不同之處在于檢測(cè)對(duì)象為抗HBc抗體，實(shí)驗(yàn)方式為后BA反應(yīng) LiCA〇
[0208] (一）實(shí)驗(yàn)材料
[0209] 1、儀器與耗材
[0210] 1)實(shí)驗(yàn)儀器：LiCAHT光激化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀；
[0211] 2)人工智能數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：自制軟件處理系統(tǒng)，后臺(tái)數(shù)據(jù)處理路徑見(jiàn)專利說(shuō)明及 實(shí)施例1 ;
[0212] 3)實(shí)驗(yàn)耗材：同上由中國(guó)博陽(yáng)生物（上海）科技有限公司提供。
[0213] 2、實(shí)驗(yàn)試劑和標(biāo)本
[0214] 1)采用市售試劑（中國(guó)博陽(yáng)生物科技有限公司制造）。包括：
[0215] 試劑1 :R1 ?生物素化的HBcAg ;
[0216] 試劑2 :R2.包被鏈親和素（SA)的感光微球
[0217] 試劑3 :R3. HBcAg包被發(fā)光微球；
[0218] 試劑4 :實(shí)驗(yàn)稀釋系統(tǒng)；同上市售試劑系統(tǒng)攜帶；
[0219] 2)參比標(biāo)準(zhǔn)品：可同時(shí)采用市售及自制標(biāo)準(zhǔn)參比品。
[0220] ①市售標(biāo)準(zhǔn)品：市售試劑盒隨帶，共6份。抗HBc濃度分別為：0. 0IU/ml，0. 3IU/ ml，2. 4IU/ml，13. 2IU/ml，80. 0IU/ml，200. 0IU/ml
[0221] ②自制參比標(biāo)準(zhǔn)品類：采用抗HBc強(qiáng)陽(yáng)性既往HBV感染者血清，經(jīng)抗HBc活性標(biāo) 定后制備。制備物包括擬合實(shí)驗(yàn)用品、回收實(shí)驗(yàn)用品、參比實(shí)驗(yàn)用品，以及常規(guī)參比標(biāo)準(zhǔn)品 等。制備原則與方法同實(shí)施例1;
[0222] 3)對(duì)照血清
[0223] 陰性對(duì)照與陽(yáng)性對(duì)照血清為同上市售試劑盒攜帶，用于域值確認(rèn)及試劑反應(yīng)性評(píng) 價(jià)。
[0224] 4)檢測(cè)標(biāo)本：血清、血漿、體液、或體外培養(yǎng)物
[0225] 3?人工智能分析系統(tǒng)
[0226] 抗HBc檢測(cè)專項(xiàng)"復(fù)合HB雙向劑量反應(yīng)曲線圖像法分析體系"，其宏觀邏輯框架參 見(jiàn)
【發(fā)明內(nèi)容】
。其構(gòu)建亦在上述分析系統(tǒng)的框架內(nèi)介紹。
[0227] (二）實(shí)驗(yàn)步驟
[0228] 1.實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：取出所有試劑與標(biāo)本，恢復(fù)至室溫，按需調(diào)整至工作濃度與狀態(tài)； 2.實(shí)驗(yàn)操作
[0229] 1)取試劑R1及R3試劑適量，等體積混合，加至LiCA反應(yīng)板各孔中，每孔 (管）100 y 1 ;
[0230] 2)取待測(cè)標(biāo)本，陰、陽(yáng)性對(duì)照，及抗HBc定量標(biāo)準(zhǔn)血清系列各25 y 1，分別加至上述 各反應(yīng)各孔中，每份標(biāo)本加一孔（或根據(jù)需要的任意孔），混合，育溫lOmin ;
[0231] 3)加入試劑R3,每孔175yl，混合，在機(jī)反應(yīng)15min (達(dá)T1);
[0232]4)在680nm激發(fā)，610nm波長(zhǎng)檢測(cè)條件下檢測(cè)各孔實(shí)驗(yàn)信號(hào)（S1)，并將各信號(hào)值輸 送至人工智能數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；
[0233] 5)繼續(xù)放置15min，達(dá)T2時(shí)點(diǎn)；
[0234] 6)置LiCA發(fā)光檢測(cè)儀上，680nm激發(fā)，610nm波長(zhǎng)檢測(cè)各孔實(shí)驗(yàn)信號(hào)（S2)，并將信 號(hào)輸送至人工智能數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；
[0235] 7)由人工智能系統(tǒng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)者指令對(duì)上述實(shí)驗(yàn)信號(hào)進(jìn)行綜合分析，儲(chǔ)存及報(bào)道檢 測(cè)結(jié)果?？笻Bc的濃度以IU/ml表示（本實(shí)施例以下同）。
[0236] (三）實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析路徑
[0237] 1、根據(jù)參比血清實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)調(diào)取并修正儲(chǔ)備的專項(xiàng)實(shí)驗(yàn)分析系統(tǒng)，形成供當(dāng)次使用 的血清抗HBc多時(shí)點(diǎn)LiCA檢測(cè)復(fù)合HB雙向計(jì)量分析系統(tǒng)；
[0238] 2、向?qū)ｍ?xiàng)人工智能數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)內(nèi)輸入T1及T2兩時(shí)點(diǎn)檢測(cè)數(shù)據(jù)S1及S2,計(jì)算出 受檢標(biāo)本的SSDI值；
[0239] 3、按照實(shí)施例1的方法確認(rèn)實(shí)驗(yàn)體系中的相關(guān)界點(diǎn)數(shù)據(jù)（閾值，Al，A2及Q界點(diǎn) 等）；
[0240] 4、按照實(shí)施例1的方法對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行靶物質(zhì)濃度的分析，并按指令輸出實(shí)驗(yàn)結(jié) 果；
[0241] 5、血清抗HBc檢測(cè)LiCA實(shí)驗(yàn)復(fù)合HB雙向劑量反應(yīng)曲線圖像分析法分析系統(tǒng)模擬 見(jiàn)圖4所示。
[0242] (四）實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0243] 1、時(shí)間依賴性多時(shí)點(diǎn)分析方法建立的光激發(fā)化學(xué)發(fā)光（以下簡(jiǎn)稱多時(shí)點(diǎn)LICA)檢 測(cè)血清中抗HBc的復(fù)合HB雙向劑量反應(yīng)曲線分析體系的圖像法顯示見(jiàn)圖4。
[0244] 2、幾項(xiàng)主要的分析數(shù)據(jù)
[0245] 表6血清抗HBc檢測(cè)先BA結(jié)合型多時(shí)點(diǎn)LiCA實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析中間數(shù)據(jù)
[0246]
[0247] * :表中閾值的計(jì)算方法系根據(jù)既往文獻(xiàn)習(xí)慣沿用（空白孔信號(hào)均值X2. 1)，亦可 采用其它方式。
[0248] 3、當(dāng)次實(shí)驗(yàn)參比實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)（多時(shí)點(diǎn)LICA參照品設(shè)定實(shí)驗(yàn)舉例）
[0249] 表7簡(jiǎn)易后BA結(jié)合LiCA血清抗HBc檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線依托數(shù)據(jù)
[0250]
[0251] 4、回收買(mǎi)驗(yàn)結(jié)采
[0252] 表8血清抗HBc專利法（簡(jiǎn)易后BA結(jié)合）LiCA回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0253]
[0254] * :抗 HBc 濃度，IU/ml
[0255] (五）結(jié)論：
[0256] 1、方法敏感性：常規(guī)LiCA與多時(shí)點(diǎn)LiCA兩法相同，< 0. 10IU/ml ;
[0257] 2、特異性、穩(wěn)定性與操作便捷性：兩法相同；
[0258] 3、定量范圍：
[0259] 常規(guī) LiCA :0? 1 ~200IU/ml ;
[0260] 專利方法：0? 1~100000IU/ml或以上；
[0261] 4、Hooks效應(yīng)詰抗效果（專利法與常規(guī)LiCA比較）：
[0262] 能十分顯著地拓展定量分析范圍，能基本上消弭Hook效應(yīng)影響，并具備發(fā)現(xiàn)極為 少見(jiàn)的類Hook效應(yīng)現(xiàn)象能力。具體介紹與實(shí)施例1同。
[0263] 【實(shí)施例3】血清IgG檢測(cè)時(shí)間依賴性多時(shí)點(diǎn)絮狀免疫凝集實(shí)驗(yàn)
[0264] 血清IgG檢測(cè)時(shí)間依賴性多時(shí)點(diǎn)探測(cè)絮狀免疫沉淀實(shí)驗(yàn)（下稱多時(shí)點(diǎn)檢測(cè)絮狀免 疫沉淀實(shí)驗(yàn)）。與實(shí)施例1、2相比，實(shí)施例3存在如下主要區(qū)別，即該實(shí)施例所依托的實(shí)驗(yàn) 技術(shù)（免疫沉淀實(shí)驗(yàn)）敏感性顯著偏低，定量檢測(cè)的相對(duì)范圍亦明顯偏窄；免疫復(fù)合物結(jié)構(gòu) 狀態(tài)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響通常較大，其實(shí)驗(yàn)信號(hào)強(qiáng)度的依時(shí)性變化特征亦較前兩者顯著。但 這些并不影響對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的定量分析；人IgG在血清中表達(dá)基數(shù)高，濃度變動(dòng)范圍相對(duì)較 窄，采用專利方法進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析無(wú)須采用整個(gè)的HB雙向劑量反應(yīng)曲線；因 此，該實(shí)施例所達(dá)成的目標(biāo)僅在于采用此種經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)論證本專利方法在絮狀免 疫沉淀實(shí)驗(yàn)，免疫凝集實(shí)驗(yàn)及其協(xié)同免疫凝集實(shí)驗(yàn)等方法中應(yīng)用的可行性，同時(shí)為血清免 疫沉淀等實(shí)驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展（如采用同一稀釋度標(biāo)本同步檢測(cè)血清IgG、IgA及IgM，以及采用 同一試驗(yàn)方法對(duì)濃度差別懸殊的血清與多種體液標(biāo)本做同步檢測(cè)等）提供新的技術(shù)方向。
[0265] ( -）實(shí)驗(yàn)材料
[0266] 1、儀器與耗材
[0267] 1)實(shí)驗(yàn)儀器：HITACHI 7170A自動(dòng)生化分析儀，日本Hitachi公司制造；
[0268] 2)人工智能數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：自制軟件處理系統(tǒng)，后臺(tái)處理路徑參見(jiàn)實(shí)施1 ;
[0269] 2、試劑
[0270] 1)血清IgG檢測(cè)免疫比濁法測(cè)定試劑盒：上海玉蘭生化試劑研宄所生產(chǎn)；
[0271] 試劑1 :R1.抗人IgG溶液；
[0272] 試劑2 :R2?稀釋劑；
[0273] 2)參比標(biāo)準(zhǔn)品
[0274] 標(biāo)準(zhǔn)參比品：常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)血清。同上試劑盒隨帶，共6份；Ig濃度分別為：0. 00g/L、 0? 20g/L、2. 60g/L、4. 00g/L、16. 00g/L、64. Og/L ;
[0275] 3)自制參比品
[0276] 參比品原料（人IgG):自健康人血清中純化，BSA參比光譜吸收法定量，經(jīng)標(biāo)定并 調(diào)整其濃度為128. 00mg/ml (128g/L)。取此純化物以同上市售試劑隨帶的稀釋液稀釋，適量 分裝，-20°C凍存。所構(gòu)建參比系列的濃度范圍為：
[0277] 參比實(shí)驗(yàn)品：0?