雷帕霉素衍生物的純化的制作方法
【專利說明】雷帕霉素衍生物的純化
[0001] 相關(guān)申請的交叉參考
[0002] 本申請要求2013年3月15日提交的美國臨時申請?zhí)?1/799, 857的優(yōu)先權(quán)，將該 申請完整地引入本文作為參考。
[0003] 發(fā)明背景
[0004] 本發(fā)明提供從在合成過程中生成的具有類似極性的不需要的副產(chǎn)物中 純化40-0-雷帕霉素衍生物的經(jīng)濟(jì)和有效的方式。雷帕霉素也稱作西羅莫司， CAS[53123_88_9])。它是商購的由潮解性鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus)合 成的大環(huán)內(nèi)酯天然產(chǎn)物。優(yōu)選的衍生物40-0-(2-乙氧基乙基）雷帕霉素、烏米莫司 (Umirolimus) (INN/USAN)、Biolimus A9?(也稱作BA9?)是活性藥物成分，其被研發(fā)為用 于冠狀動脈支架的藥物涂層以預(yù)防平滑肌細(xì)胞增殖和再狹窄。這種^ limus'家族的其 它成員包括依維莫司（CAS[159351-69-6])、唑羅莫司（CAS[221877-54-9])和坦羅莫司 (CAS[162635-04-03])。已知該族成員在體內(nèi)具有免疫抑制、抗真菌、抗腫瘤和/或抗炎活 性，并且用于治療移植排斥、感染性疾病、自身免疫疾病和特征在于過度細(xì)胞增殖的病癥。
[0005] BA9的化學(xué)結(jié)構(gòu)由31-元三烯大環(huán)內(nèi)酯組成，其保護(hù)核心雷帕霉素環(huán)結(jié)構(gòu)且區(qū)別 僅在于在40位上添加了側(cè)鏈，其中雷帕霉素的羥基已經(jīng)被乙氧基乙基烷基化。
[0006] BA9與西羅莫司和其它西羅莫司衍生物相比的化學(xué)結(jié)構(gòu)提供在圖1中。BA9在結(jié) 構(gòu)上與雷帕霉素（也稱作西羅莫司）相關(guān)。該結(jié)構(gòu)由在40位上具有乙氧基乙基化的雷帕 霉素31-元大環(huán)內(nèi)酯三烯內(nèi)酯環(huán)組成。
[0007] BA9、如西羅莫司一樣結(jié)合胞內(nèi)親免蛋白FKBP12。認(rèn)為得到的大環(huán)內(nèi)酯/FKBP12復(fù) 合物隨后以與西羅莫司類似的方式結(jié)合mTOR，即對于細(xì)胞周期進(jìn)展具有決定性的蛋白質(zhì)。 mTOR的失活導(dǎo)致幾種特異性信號傳導(dǎo)途經(jīng)的抑制和在Gl-S期時的細(xì)胞周期阻止。
[0008] 由于BA9和其它雷帕霉素衍生物的治療價值，所以該族活性劑的改進(jìn)的制備方法 是期望的。本發(fā)明解決了這一問題和其它需求。
[0009] 發(fā)明概述
[0010] 本發(fā)明提供用于得到具有式I的結(jié)構(gòu)的純化的固體化合物的方法：
[0011]
[0012] 其中R1選自H ;Ra- (0) d-Rb，其中Ra是C丨5亞烷基，Rb是C丨 5烷基或C丨5亞烷基-OH， 且下標(biāo)d是選自0_1的整數(shù)；C1 5烷基；C 6 i。芳基C i 5烷基；羥基C i 5烷基；
[0013] C6 i。芳基C1 5烷氧基；C1 5烷氧基C1 5烷基；?；货；鵆1 5烷基；氨基C1 5烷基；C1 5 烷基氣基C1 5烷基；醜基氣基C i 5烷基；C i 5烷氧基幾基氣基C i 5烷基；和
[0014] C61。芳基。
[0015] 該方法包括：a)形成包含具有式I的結(jié)構(gòu)的粗化合物和非極性溶劑的混合物，該 步驟在足以溶解所述化合物的條件下進(jìn)行；b)使至少部分具有式I的結(jié)構(gòu)的化合物固化； c)從所述混合物的溶劑中分離至少部分固化的化合物；和由此得到純化的固體化合物。
[0016] 在另一個實施方案中，本發(fā)明提供BA9的晶體形式。
[0017] 附圖簡述
[0018] 圖1顯示西羅莫司、Biolimus A9和相關(guān)衍生物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
[0019] 圖2顯示雷帕霉素衍生物的制備和本發(fā)明衍生物的純化的方案。
[0020] 圖3顯示對BA9批號2A觀察到的X-射線粉末衍射（XRPD)圖案。
[0021 ] 圖4顯示對BA9批號2A觀察到的示差掃描量熱法（DSC)的熱分析圖。
[0022] 圖5顯示對BA9批號2B觀察到的XRPD圖案。
[0023] 圖6顯示對BA9批號2B觀察到的DSC熱分析圖。
[0024] 圖7顯示對BA9批號2B觀察到的光學(xué)顯微照片。
[0025] 圖8顯示對BA9批號2B觀察到的動態(tài)蒸汽吸附（DVS)動力學(xué)圖。
[0026] 圖9顯示DVS實驗后對BA9批號2B觀察到的XRPD圖案以及BA9形式I的參比圖 案的覆蓋。
[0027] 圖10顯示得自溶劑漿液的XRPD圖案和BA9形式I的參比圖案的覆蓋。
[0028] 圖11顯示在抗溶劑結(jié)晶實驗中得到的XRPD圖案和BA9形式I的參比圖案的覆蓋。
[0029] 圖12顯示使用KBr片中的樣品得到的BA9形式I的紅外光譜。
[0030] 發(fā)明詳述
[0031] I. -般介紹
[0032] 本發(fā)明提供用于純化雷帕霉素衍生物包括Biolimus A9(BA9)的方法。該方法包 括從非極性有機(jī)溶劑中固化雷帕霉素衍生物，隨后分離純化的產(chǎn)物并且任選從極性有機(jī)溶 劑和水的混合物中沉淀。該方法的不同步驟如本文所述。發(fā)現(xiàn)有效地除去各種雜質(zhì)因令人 驚奇的簡便、經(jīng)濟(jì)的方法導(dǎo)致。這些優(yōu)點如下文詳細(xì)描述。
[0033] 通過降溫簡單固化可以由此從不需要的40-0衍生物雜質(zhì)和非-40-0衍生物中清 潔地分離40-0衍生物的發(fā)現(xiàn)是令人驚奇和不可預(yù)測的。這在經(jīng)濟(jì)上是有利的，因為不需要 的副產(chǎn)物具有的類似極性通常數(shù)倍于期望的產(chǎn)物且它們難以使用大規(guī)模色譜技術(shù)分離。這 些方法可以用于制備顯示優(yōu)良穩(wěn)定性的BA9的晶體形式。
[0034] II.定義
[0035] 術(shù)語"純化的"是指已經(jīng)加工除去雜質(zhì)的化合物。雜質(zhì)可以包括溶劑、用于制備化 合物的試劑、原料和產(chǎn)生所述化合物的反應(yīng)副產(chǎn)物。在一些實施方案中，純化的化合物基本 上不含其它種類。
[0036] 術(shù)語"粗化合物"是指包含期望的化合物（例如如本文所述的式I的化合物）和 至少另一種類的混合物，所述另一種類選自溶劑、試劑例如堿、原料和產(chǎn)生期望的化合物的 反應(yīng)副產(chǎn)物。
[0037] "烷基"是指具有所示碳原子數(shù)的直鏈或支鏈飽和脂族基團(tuán)。烷基可以包括任意 數(shù)里的碳，例如 C1 2、C1 3、C1 4、C1 5、C1 6、C1 7、C1 8、C1 9、C1 1CI、C2 3、C2 4、C2 5、C2 6、C3 4、C3 5、C3 6、 C4 5、C46和C56。例如，C16烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁 基、叔丁基、戊基、異戊基、己基等。烷基還可以指具有至多20個碳原子的烷基，例如、但不 限于庚基、辛基、壬基、癸基等。
[0038] "亞烷基"是指具有所示碳原子數(shù)并且連接至少兩個其它基團(tuán)的直鏈或支鏈飽和 脂族基團(tuán)，即二價烴基。連接至亞烷基的兩個部分可以連接至亞烷基的同一原子或不同原 子。例如，直鏈亞烷基可以是-(CH 2)n-的二價基團(tuán)，其中η是1、2、3、4、5或6。有代表性的 亞烷基包括但不限于亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞異丙基、亞異丁基、亞仲丁基、亞戊基和亞 己基。
[0039] "鏈烯基"是指具有至少2個碳原子和至少1個雙鍵的直鏈或支鏈烴。鏈烯基可以 包括任意數(shù)量的碳，例如 C2、C2 3、C2 4、C2 5、C2 6、C2 7、C2 8、C2 9、C2 10、C3、C3 4、C3 5、C3 6、C4、C4 5、 C4 6、C5、C5 6和C6。鏈烯基可以具有任意適合數(shù)量的雙鍵，包括、但不限于1、2、3、4、5或5個 以上。鏈烯基的實例包括但不限于乙烯基（vinyl)(乙烯基（ethenyl))、丙烯基、異丙烯基、 1-丁烯基、2-丁烯基、異丁烯基、丁二烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、異戊烯基、1，3-戊二烯基、 1，4_戊二烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、1，3-己二烯基、1，4-己二烯基、1，5-己二 烯基、2,4_己二烯基或1，3,5_己三烯基。
[0040] "炔基"是指具有至少2個碳原子和至少1個三鍵的直鏈或支鏈烴。炔基可以包括 任意數(shù)量的碳，例如 c2、C2 3、C2 4、C2 5、C2 6、C2 7、C2 8、C2 9、C2 10、C3、C3 4、C3 5、C3 6、C4、C4 5、C4 6、 C5、C5 6和C6。炔基的實例包括、但不限于乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、異丁炔基、 仲丁炔基、丁二炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、異戊炔基、1，3-戊二炔基、1，4-戊二炔基、1-己 炔基、2-己炔基、3-己炔基、1，3-己二炔基、1，4-己二炔基、1，5-己二炔基、2,4_己二炔基 或1，3, 5-己三炔基。
[0041] "芳基"是指具有任意適合的環(huán)原子數(shù)和任意適合的環(huán)數(shù)的芳族環(huán)系。芳基可以包 括任意適合的環(huán)原子數(shù)，例如6、7、8、9、10、11、12、1