Pkal-介導(dǎo)的病癥的評(píng)估、測(cè)定和治療的制作方法
【專利說明】PKAL-介導(dǎo)的病癥的評(píng)估、測(cè)定和治療
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0002] 本申請(qǐng)要求2013年1月20日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/754，600的申請(qǐng)日的權(quán)益。 該參考申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容通過引用并入本文。
【背景技術(shù)】
[0003] 血漿激膚釋放酶(pKal)是循環(huán)中主要產(chǎn)生的緩激膚的酶。經(jīng)接觸系統(tǒng)發(fā)生地al的 激活，運(yùn)已經(jīng)與遺傳性血管性水腫化AE)相關(guān)的疾病病理學(xué)聯(lián)系起來。緩激膚是疼痛、炎癥、 水腫和血管生成的關(guān)鍵介體。
[0004] 血漿蛋白酶C1抑制劑(也稱為C1-抑制劑或C1-INH)是蛋白酶抑制劑，其屬于絲氨 酸蛋白酶抑制蛋白超家族。其主要功能是抑制補(bǔ)體系統(tǒng)，W防止自發(fā)激活。I和II型遺傳性 血管性水腫由C1-INH的遺傳缺陷引起，運(yùn)導(dǎo)致緩激膚過量產(chǎn)生。

【發(fā)明內(nèi)容】

[000引為了研究C1-INH，當(dāng)前可用的功能診斷測(cè)定采用激活的CIS的抑制，因而采用補(bǔ)體 系統(tǒng)的抑制。本公開是基于新診斷測(cè)定的開發(fā)，其應(yīng)用對(duì)PKaUFXII或兩者的抑制，從而應(yīng) 用PKa^介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑。令人驚訝的，本文描述的診斷測(cè)定成功區(qū)分了 100%的患有I 和II型HAE的患者與對(duì)照患者。
[0006] 因此，本公開的一個(gè)方面特征在于方法，其包括：
[0007] (a)使含血漿蛋白酶C1抑制劑(C1-INH)的樣品與捕獲試劑接觸，和(b)測(cè)量與捕獲 試劑結(jié)合的樣品中C1-INH的水平。捕獲試劑包括:i)活性形式的因子XII或其C1-INH-結(jié)合 片段，ii)活性形式的血漿激膚釋放酶或其C1-INH-結(jié)合片段或和ii)的組合。例如， 捕獲試劑可W是活性形式的因子XII、活性形式的血漿激膚釋放酶或其組合。用于本文所述 測(cè)定的任何捕獲試劑均可固定在基質(zhì)上。
[0008] 在一些實(shí)施方式中，與捕獲劑結(jié)合的C1-INH的水平利用結(jié)合C1-INH的檢測(cè)劑例如 結(jié)合C1-INH的抗體測(cè)量。在一些實(shí)施方式中，與捕獲劑結(jié)合的C1-INH的水平通過酶聯(lián)免疫 吸附測(cè)定化LISA)測(cè)量。
[0009] 含C1-INH的樣品（例如血液樣品或血漿樣品）可獲自受試者。在一些實(shí)例中，受試 者具有地al-介導(dǎo)的病癥的癥狀，其可W是水腫、腫脹的復(fù)發(fā)性發(fā)作;腫脹，其中所述腫脹完 全或主要是外周的;等麻疹;在沒有感染的跡象的情況下發(fā)紅、疼痛和腫脹;或非組胺-介導(dǎo) 的水腫。在其他實(shí)例中，受試者耐受抗組胺療法、皮質(zhì)類固醇療法或兩者。在再其他的實(shí)例 中，在收集樣品時(shí)，受試者沒有地al介導(dǎo)的病癥的癥狀、沒有地al介導(dǎo)的病癥的癥狀的歷史 或沒有地al介導(dǎo)的病癥的歷史。
[0010] 在一些實(shí)施方式中，本文所述的方法進(jìn)一步包括:如果樣品中與捕獲試劑結(jié)合的 C1-INH的水平與參考值相比降低，則將所述受試者鑒別為處于1(曰^介導(dǎo)的病癥的風(fēng)險(xiǎn)或患 有Ka^介導(dǎo)的病癥。地曰^介導(dǎo)的病癥可W是組胺依賴性特發(fā)性血管性水腫、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié) 炎、克羅恩病、狼瘡、阿爾茨海默氏疾病、敗血癥性休克、燒傷、腦缺血性/再灌注損傷、腦水 月中、糖尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病性腎病、黃斑性水腫、血管炎、動(dòng)脈或靜脈血栓形成、與屯、室 輔助設(shè)備或支架相關(guān)的血栓形成、具有血栓形成的肝素-誘導(dǎo)的血小板減少癥、血栓栓塞病 和伴隨不穩(wěn)定的屯、絞痛的冠屯、病、水腫、眼病、痛風(fēng)、腸疾?。╥ntestinal bowel disease)、 口腔粘膜炎、神經(jīng)病痛、炎性疼痛、椎管狹窄退行性脊柱病、術(shù)后腸梗阻(post operative ileus)、主動(dòng)脈瘤、骨關(guān)節(jié)炎、遺傳性血管性水腫(HAE)、肺栓塞、中風(fēng)、頭部創(chuàng)傷或瘤周腦水 月中、脈毒癥、急性大腦中動(dòng)脈(MCA)缺血性事件（中風(fēng)）、再狹窄、系統(tǒng)性紅斑狼瘡腎炎、自身 免疫疾病、炎性疾病、屯、血管疾病、神經(jīng)疾病、與蛋白質(zhì)錯(cuò)折疊相關(guān)的疾病、與血管生成相關(guān) 的疾病、高血壓腎病和糖尿病性腎病、變應(yīng)性疾病和呼吸疾病或組織損傷。在一些實(shí)例中， pKa^介導(dǎo)的病癥是HAE。
[0011] 如果所述受試者被鑒定為處于Kal-介導(dǎo)的病癥(例如HAE)的風(fēng)險(xiǎn)或患有Ka^介導(dǎo) 的病癥(例如HAE )，本文所述的方法可進(jìn)一步包括向受試者施用有效量的治療劑，其中治療 劑選自激膚釋放酶結(jié)合劑;緩激膚B2受體括抗劑和C1-INH取代劑。在一些例子中，治療劑是 DX-88、DX-2930或 EPIKAk2。
[0012] 本公開另外的方面特征在于治療患有地εα-介導(dǎo)的病癥(例如HAE)的受試者(例如 人患者）的方法，方法包括向受試者施用有效量治療劑，其是激膚釋放酶結(jié)合劑、緩激膚Β2 受體括抗劑或C1-INH取代劑。待通過該方法治療的受試者具有與參考值相比降低水平的能 夠結(jié)合捕獲試劑的C1-INH。捕獲試劑包括：i)活性形式的因子XII或其C1-INH-結(jié)合片段； ii)活性形式的激膚釋放酶或其C1-INH-結(jié)合片段或和ii)的組合。受試者的C1-INH 水平可通過本文所述的任何測(cè)定方法測(cè)定。
[0013] 在一些實(shí)例中，治療劑是DX-88、DX-2930或EPIKAk2。
[0014] 還包括在本公開范圍內(nèi)的是藥物組合物，其用于治療患有地al-介導(dǎo)的病癥(例如 HAE)和具有與參考值相比降低水平的能夠結(jié)合捕獲試劑的C1-INH的受試者(例如人患者）。 藥物組合物包括用于治療病癥的治療劑，其可W是激膚釋放酶結(jié)合劑、緩激膚B2受體括抗 劑或C1-INH取代劑;和藥學(xué)上可接受的載體。本公開還提供本文所述的藥物組合物在制備 用于治療地3^介導(dǎo)的病癥諸如HAE的藥物中的用途。在另外的方面中，本公開提供試劑盒， 其用于檢測(cè)能夠結(jié)合捕獲試劑的血漿蛋白酶C1抑制劑(C1-INH)。試劑盒可包括:a)捕獲試 劑，其包括：
[0015] i)活性形式的因子XII或其C1-INH-結(jié)合片段；
[0016] i i)活性形式的激膚釋放酶或其C1-INH-結(jié)合片段;或
[0017] 和 ii)的組合;和
[0018] b)結(jié)合C1-INH的檢測(cè)試劑，和任選的C)C1-INH。
[0019] 在一些實(shí)施方式中，捕獲試劑一一其可W是FXIIa、活性形式的PKal或其組合一一 被固定在基質(zhì)上。在一些實(shí)施方式中，檢測(cè)試劑是抗-C1-INH抗體。
[0020] 此外，本公開提供評(píng)估對(duì)受試者(例如人HAE患者）中地al-介導(dǎo)的病癥的治療的方 法，包括：（a)在治療前和治療后或在治療過程中，測(cè)量從受試者收集的樣品中能夠抑制血 漿激膚釋放酶、因子XII或兩者的血漿蛋白酶C1抑制劑(C1-INH)的水平，和(b)基于C1-INH 的水平評(píng)估治療的效力，其中治療后或在治療過程中C1-INH水平下降指示治療對(duì)受試者有 效。
[0021] 在一些實(shí)施方式中，治療設(shè)及激膚釋放酶結(jié)合劑、緩激膚B2受體括抗劑 (angatoni s t)或Cl -INH取代劑。例如，治療設(shè)及DX-88、DX-2930或EPIKAk2?？蛇x地，或另 夕h從受試者收集的樣品是血液樣品或血漿樣品。
[0022] 在一些實(shí)施方式中，C1-INH的水平可通過本文所述的測(cè)定方法測(cè)量。例如，C1-INH 的水平可通過如下方法測(cè)量，所述方法包括：（a)使從受試者收集的樣品與捕獲試劑(例如 固定在基質(zhì)上的）接觸，和(b)測(cè)量與捕獲試劑結(jié)合的樣品中的C1-INH的水平，所述捕獲試 劑可包括:i)活性形式的因子ΧΠ 或其C1-INH-結(jié)合片段，ii)活性形式的血漿激膚釋放酶或 其C1-INH-結(jié)合片段或iii) i)和ii)的組合。在一些實(shí)例中，捕獲試劑包括活性形式的因子 XII、活性形式的血漿激膚釋放酶或其組合。在本文所述的任何測(cè)定中，C1-INH的水平可利 用結(jié)合C1-INH的檢測(cè)劑，例如結(jié)合C1-INH的抗體，測(cè)量。在一些實(shí)例中，C1-INH的水平通過 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定化LISA)測(cè)量。
[0023] W下實(shí)施方式也在本公開的范圍內(nèi)。
[0024] 本公開提供方評(píng)估(例如鑒別)受試者，例如處于地al-介導(dǎo)的或緩激膚-介導(dǎo)的病 癥的風(fēng)險(xiǎn)的受試者或遭受(例如患有)pKal-介導(dǎo)的或緩激膚-介導(dǎo)的病癥的受試者的方法。 提供的方法允許分析具有血漿激膚釋放酶-介導(dǎo)的血管性水腫化MA)或可用于評(píng)估和治療 的地al介導(dǎo)的其他疾病的患者。
[0025] 本發(fā)明的實(shí)施方式提供生物標(biāo)記物及其在鑒別和治療患者例如遭受通過血漿激 膚釋放酶產(chǎn)生的緩激膚引起的水腫的患者中的用途。本文公開的方法、組合物和設(shè)備可W 各種方式使用。例如，pKal標(biāo)記物的水平可用于鑒定與升高的接觸系統(tǒng)激活相關(guān)的病癥。初 始篩選之后可用血漿激膚釋放酶抑制劑(例如DX-88、EPI-KAL2或DX-2930)進(jìn)行體外或體內(nèi) 測(cè)試，例如在疾病的臨床前模型中。本文公開的標(biāo)記物也可用作藥物動(dòng)力學(xué)生物標(biāo)記物或 W其它方式用于監(jiān)測(cè)受試者對(duì)激膚釋放酶抑制劑的應(yīng)答。本文公開的標(biāo)記物可用于伴隨診 斷，W能夠治療由血漿激膚釋放酶介導(dǎo)的疾病，在地al介導(dǎo)的或緩激膚介導(dǎo)的病癥的預(yù)防 性療法期間控制劑量，所述病癥例如HAE、非組胺-依賴性特發(fā)性血管性水腫、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié) 炎、克羅恩病、狼瘡、阿爾茨海默氏疾病、敗血癥性休克、燒傷、腦缺血性/再灌注損傷、腦水 月中、糖尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病性腎病、黃斑性水腫、血管炎、與屯、室輔助設(shè)備相關(guān)的血栓形 成、具有血栓形成的肝素-誘導(dǎo)的血小板減少癥、血栓栓塞病和伴隨不穩(wěn)定的屯、絞痛的冠屯、 病。
[0026] 在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供評(píng)估受試者的方法，例如處于pKal-介導(dǎo)的病癥、緩激 膚-介導(dǎo)的病癥例如抗-組胺耐受性水腫或HAE的風(fēng)險(xiǎn)的受試者，包括:a)獲得包括受試者組 織的樣品，例如血液、血漿或眼淚;b)使所述樣品，例如在體外，與一種或多種捕獲試劑在足 W在C1-INH和所述一種或多種捕獲試劑之間形成復(fù)合物的條件下接觸，其中，所述捕獲試 劑包括W下之一或兩者：i)包括活性形式的因子ΧΠ 或其C1-INH-結(jié)合片段的部分;或ii)包 括活性形式的激膚釋放酶或其C1-INH-結(jié)合片段的部分;和C)評(píng)估CI-INH與所述捕獲試劑 的結(jié)合水平。
[0027] 在一些實(shí)施方式中，所述評(píng)估包括將CI-INH與所述捕獲試劑的所述測(cè)定的結(jié)合水 平與參考的相比較，其中，滿足預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)的水平，例如如果其處于或低于參考，指示病癥易 于用地al抑制劑治療。參考可W是，例如沒有患地al-介導(dǎo)的病癥的人中的水平，例如不具 有HAE或本文所述的其他病癥的人或不具有運(yùn)樣的病癥的癥狀的歷史的人中的水平。
[0028] 在一些實(shí)施方式中，pKal-介導(dǎo)的病癥選自：HAE、非組胺-依賴性特發(fā)性血管性水 月中、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、克羅恩病、狼瘡、阿爾茨海默氏疾病、敗血癥性休克、燒傷、腦缺血性/ 再灌注損傷、腦水腫、糖尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病性腎病、黃斑性水腫、血管炎、動(dòng)脈或靜脈 血栓形成、與屯、室輔助設(shè)備或支架相關(guān)的血栓形成、具有血栓形成的肝素-誘導(dǎo)的血小板減 少癥、血栓栓塞病和伴隨不穩(wěn)定的屯、絞痛的冠屯、病、水腫、眼病、痛風(fēng)、腸疾病、口腔粘膜炎、 神經(jīng)病痛、炎性疼痛、椎管狹窄退行性脊柱病、術(shù)后腸梗阻、主動(dòng)脈瘤、骨關(guān)節(jié)炎、遺傳性血 管性水腫、肺栓塞、中風(fēng)、頭部創(chuàng)傷或瘤周腦水腫、脈毒癥、急性大腦中動(dòng)脈(MCA)缺血性事 件（中風(fēng)）、再狹窄（例如血管成形術(shù)之后）、系統(tǒng)性紅斑狼瘡腎炎、自身免疫疾病、炎性疾病、 屯、血管疾病、神經(jīng)疾病、與蛋白質(zhì)錯(cuò)折疊相關(guān)的疾病、與血管生成相關(guān)的疾病、高血壓腎病 和糖尿病性腎病、變應(yīng)性疾病和呼吸疾病(例如過敏癥、哮喘、慢性阻塞性肺部疾病、急性呼 吸窘迫綜合癥、囊性纖維化、持續(xù)性鼻炎)和組織損傷(例如燒傷或化學(xué)損傷）。
[0029] 在一些實(shí)施方式中，評(píng)估所述受試者對(duì)地曰^介導(dǎo)的病癥的易感性。在某些實(shí)施方 式中，所述受試者具有例如與地al-介導(dǎo)的病癥例如水腫一致的癥狀。在某些實(shí)施方式中， 所述受試者具有表征為不期望的地al激活的病癥的癥狀，和所述受試者已經(jīng)被施用抗組胺 療法或皮質(zhì)類固醇療法，并且癥狀對(duì)其耐受的。在一些實(shí)施方式中，所述受試者具有W下癥 狀或特性中的一個(gè)或多個(gè)或所有:腫脹的復(fù)發(fā)性發(fā)作；腫脹，其中，所述腫脹完全或主要是 外周的，例如受試者沒有明顯的腹部或呼吸道腫脹;等麻疹;在沒有感染的跡象的情況下發(fā) 紅、疼痛和腫脹;不能響應(yīng)抗組胺或皮質(zhì)類固醇療法;或具有非組胺-介導(dǎo)的水腫。
[0030] 在一些實(shí)施方式中，所述受試者具有持續(xù)的或復(fù)發(fā)的水腫，并且對(duì)抗-組胺和類固 醇療法中之一或兩者沒有應(yīng)答。
[0031 ] 在一些實(shí)施方式中，受試者沒有地al介導(dǎo)的病癥例如HAE、IAE、I抓或IBS的歷史。 在一些實(shí)施方式中，受試者具有地Ed-介導(dǎo)的病癥例如HAE、IAE、IBD或IBS的歷史。在一些實(shí) 施方式中，受試者沒有HAE的歷史。在一些實(shí)施方式中，受試者具有HAE的歷史。在一些實(shí)施 方式中，受試者沒有IAE的歷史。在一些實(shí)施方式中，受試者具有IAE的歷史。在一些實(shí)施方 式中，受試者沒有I抓或IBS的歷史。在一些實(shí)施方式中，受試者具有IBD或IBS的歷史。在一 些實(shí)施方式中，受試者沒有組胺介導(dǎo)的病癥例如食物過敏的歷史。在一些實(shí)施方式中，受試 者具有組胺介導(dǎo)的病癥例如食物過敏的歷史。在一些實(shí)施方式中，受試者沒有地al介導(dǎo)的 病癥例如HAE、IAE、I抓或IBS的歷史和沒有組氨酸-介導(dǎo)的病癥例如食物過敏的歷史。在一 些實(shí)施方式中，受試者沒有地al介導(dǎo)的病癥例如HAE、IAE、I抓或IBS的歷史和具有組胺-介 導(dǎo)的病癥例如食物過敏的歷史。在一些實(shí)施方式中，受試者具有地al-介導(dǎo)的病癥例如HAE、 IAE、I抓或IBS的歷史和沒有組氨酸-介導(dǎo)的病癥食物過敏的歷史。在一些實(shí)施方式中，受試 者具有地al-介導(dǎo)的病癥例如HAE、IAE、I抓或IBS的歷史和具有組胺-介導(dǎo)的病癥例如食物 過敏的歷史。
[0032] 在某些實(shí)施方式中，所述受試者具有血管性水腫的歷史。在某些實(shí)施方式中，所述 受試者沒有血管性水腫的歷史。在【具體實(shí)施方式】中，所述受試者沒有遭受特征為地al或緩 激膚介導(dǎo)的病癥例如水腫的癥狀。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)所述組織從受試者的身體去除時(shí)， 所述受試者正經(jīng)歷血管性水腫發(fā)作。
[0033] 在一些實(shí)施方式中，所述一種或多種捕獲試劑布置在基質(zhì)上。在某些實(shí)施方式中， 基質(zhì)是不溶的基質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，所述一種或多種捕獲試劑包括活性形式的因子XII 或其C1-INH-結(jié)合片段。在【具體實(shí)施方式】中，所述一種或多種捕獲試劑包括活性形式的激膚 釋放酶或其Cl-INH-結(jié)合片段。在【具體實(shí)施方式】中，所述一種或多種捕獲試劑包括活性形式 的因子ΧΠ 或其C1-INH-結(jié)合片段和活性形式的激膚釋放酶或其C1-INH-結(jié)合片段。
[0034] 在一些實(shí)施方式中，所述方法不包括評(píng)估C1-INH與激活的C1例如Cls的結(jié)合。
[0035] 在一些實(shí)施方式中，所述一種或多種捕獲試劑包括第一特異性結(jié)合部分，其與布 置在所述基質(zhì)上的第二特異性結(jié)合部分形成復(fù)合物。在某些實(shí)施方式中，所述第一和第二 結(jié)合部分選自生物素和抗生物素蛋白。
[0036] 在一些實(shí)施方式中，所述方法包括例如在所述評(píng)估中，評(píng)估檢測(cè)試劑與所述復(fù)合 物的結(jié)合，例如結(jié)合復(fù)合的C1INH的檢測(cè)試劑，例如抗-C1NH抗體，例如檢測(cè)試劑可在C1IHN 和捕獲試劑之間形成復(fù)合物之前或之后結(jié)合C1INH。在某些實(shí)施方式中，方法包括在足W在 C1-INH和檢測(cè)試劑之間形成復(fù)合物的條件下提供檢測(cè)試劑。在一些實(shí)施方式中，所述C1-INH與捕獲試劑復(fù)合。在【具體實(shí)施方式】中，所述方法包括形成包括檢測(cè)試劑、C1-INH和捕獲 試劑的復(fù)合物，其中，所述檢測(cè)試劑與所述C1-INH復(fù)合，所述CI-INH與捕獲試劑復(fù)合。
[0037] 在一些實(shí)施方式中，捕獲試劑包括運(yùn)樣的部分，所述部分包括活性形式的因子XII 或其C1-INH-結(jié)合片段。在一些實(shí)施方式中，捕獲試劑包括運(yùn)樣的部分，所述部分包括活性 形式的激膚釋放酶或其C1-INH-結(jié)合片段。在一些實(shí)施方式中，捕獲試劑包括W下之一或兩 者:i)包括活性形式的因子XII或其C1-INH-結(jié)合片段的部分，或ii)包括活性形式的激膚釋 放酶或其C1-INH-結(jié)合片段的部分。在【具體實(shí)施方式】中，捕獲試劑包括運(yùn)樣的部分，所述部 分包括活性形式的因子XII或其C1-INH-結(jié)合片段。在【具體實(shí)施方式】中，捕獲試劑包括運(yùn)樣 的部分，所述部分包括活性形式的激膚釋放酶或其C1-INH-結(jié)合片段。在【具體實(shí)施方式】中， 捕獲試劑包括包含活性形式的因子XII或其C1-INH-結(jié)合片段的部分和包含活性形式的因 子XII或其C1-INH-結(jié)合片段的部分二者。
[0038] 在一些實(shí)施方式中，捕獲試劑進(jìn)一步包括結(jié)合所述復(fù)合物與基質(zhì)的部分。在某些 實(shí)施方式中，所述部分包括第一和第二結(jié)合伴侶(binding partner)，其中，一個(gè)結(jié)合所述 捕獲試劑和另一個(gè)結(jié)合所述基質(zhì)。
[0039] 在一些實(shí)施方式中，方法進(jìn)一步包括向所述受試者施用本文公開的治療劑。在某 些實(shí)施方式中，所述治療劑選自：激膚釋放酶結(jié)合劑;緩激膚B2受體括抗劑;或C1-INH取代 劑。在【具體實(shí)施方式】中，所述治療劑包括DX-88。在【具體實(shí)施方式】中，所述治療劑包括DX-2930。在【具體實(shí)施方式】中，所述治療劑包括EPIKAk2。在一些實(shí)施方式中，方法進(jìn)一步包括 施用第二療法。
[0040] 在一些實(shí)施方式中，方法包括確定所述受試者是否具有HAE。
[0041] 在另外的方面中，本發(fā)明提供評(píng)估受試者HAE類型的方法，包括：（i)通過本文公開 的方法(例如測(cè)量與捕獲試劑結(jié)合的樣品中C1-INH的水平），獲得受試者的C1-INH功能的 值;和（ii)獲得總C1-INH蛋白質(zhì)水平的值(例如測(cè)量總C1-INH水平）；其中，如果通過（i)提 供的C1-INH功能的值滿足預(yù)選的標(biāo)準(zhǔn)，例如其低于參考值，和通過（i i)提供的C1-INH蛋白 質(zhì)水平的值滿足預(yù)選的標(biāo)準(zhǔn)，例如其高于參考值，則將受試者歸類為具有II型HAE。在一些 實(shí)施方式中，（i)和(i i)中的至少一個(gè)是直接獲得的。
[0042] 在另外的方面中，本發(fā)明提供治療受試者的方法，包括獲得通過本文公開的方法 對(duì)所述受試者進(jìn)行的評(píng)估;和響應(yīng)所述評(píng)估，選擇療法用于所述患者或向所述患者施用療 法。在一些實(shí)施方式中，方法進(jìn)一步包括施用本文公開的治療劑給所述受試者。在某些實(shí)施 方式中，所述治療劑選自：激膚釋放酶結(jié)合劑;緩激膚B2受體括抗劑;或Cl-INH取代劑。在具 體實(shí)施方式中，所述治療劑包括DX-88。在【具體實(shí)施方式】中，所述治療劑包括DX-2930。在具 體實(shí)施方式中，所述治療劑包括EPIKAk2。
[0043] 在另外的方面中，本發(fā)明提供治療受試者的方法，包括:提供已經(jīng)通過本文公開的 方法評(píng)估的受試者;和響應(yīng)所述評(píng)估，選擇療法用于所述患者或向所述患者施用療法。在一 些實(shí)施方式中，方法進(jìn)一步包括施用本文公開的治療劑給所述受試者。在某些實(shí)施方式中， 所述治療劑選自：激膚釋放酶結(jié)合劑;緩激膚B2受體括抗劑;或C1-INH取代劑。在具體實(shí)施 方式中，所述治療劑包括DX-88。在【具體實(shí)施方式】中，所述治療劑包括DX-2930。在具體實(shí)施 方式中，所述治療劑包括EPIKAk2。
[0044] 在進(jìn)一步的方面中，本發(fā)明提供反應(yīng)混合物，其包括本文所述的捕獲試劑，其任選 地與C1-IHN復(fù)合，和任選地與檢測(cè)試劑復(fù)合。在實(shí)施方式中，反應(yīng)混合物包括受試者血漿。 在一些實(shí)施方式中，樣品的未復(fù)合的成分已經(jīng)被去除，例如通過洗涂。
[0045] 在進(jìn)一步的方面中，本發(fā)明提供基質(zhì)，其包括本文所述的一種或多種捕獲劑，例如 W下之一或兩者：i)包括活性形式的因子ΧΠ 或其C1-INH-結(jié)合片段的部分;或ii)包活性形 式的激膚釋放酶或其C1-INH-結(jié)合片段的部分。在一些實(shí)施方式中，所述基質(zhì)包括部分i和 i i，其獨(dú)立地布置在可訪問的區(qū)域中。
[0046] 在再另外的方面中，本發(fā)明提供設(shè)備，其包括基質(zhì)，所述基質(zhì)上布置至少一種本文 公開的捕獲試劑，并且在一些實(shí)施方式中，所述基質(zhì)上布置本文公開的捕獲試劑中的兩種。 在實(shí)施方式中，第一捕獲試劑布置在所述基質(zhì)的第一區(qū)域和第二捕獲試劑布置在所述基質(zhì) 的第二區(qū)域，例如在不同的壁中。
[0047] 在另外的方面中，本發(fā)明提供試劑盒，其包括W下的一種或多種:本文所述的捕獲 試劑之一或兩者，其任選地布置在基質(zhì)上;檢測(cè)試劑，例如抗C1-INH抗體或抗-抗-C1-INH抗 體;和標(biāo)準(zhǔn)品，例如C1-INH。
[0048] 本發(fā)明一種或多種實(shí)施方式的細(xì)節(jié)在附圖和下面的描述中闡釋。本發(fā)明的其他特 征、目的和優(yōu)勢(shì)通過說明書和附圖W及通過權(quán)利要求書將變得明顯。
[0049] 所有引用的參考文獻(xiàn)的內(nèi)容一一包括遍及本申請(qǐng)引用的文獻(xiàn)參考，出版的專利， 公開的或非公開的專利申請(qǐng)W及下面列舉的那些的內(nèi)容在運(yùn)里通過參考W它們的全部明 確并入本文，用于本文的目的或本文引用的主題。
【附圖說明】
[0050] 圖1描述通過ELISA對(duì)激膚釋放酶-C1-INH復(fù)合物形成的示例性檢巧U。從左到右-正 常對(duì)照、I型HAE、II型HAE和ΠI型HAE患者血漿樣品。
[0051 ]圖2描述通過化ISA對(duì)激活的因子XII-C1 - INH復(fù)合物形成的示例性檢測(cè)。從左到 右-正常對(duì)照、I型HAE、II型HAE和ΠI型HAE患者血漿樣品。
[0052] 圖3是基于FXII a的抑制通過化ISA分析測(cè)量C1 -INH水平的示例性方法的示意圖 /J、- 〇
[0053] 圖4包括顯示對(duì)照樣品和HAE樣品中示例性功能化ISA的數(shù)據(jù)的圖表。圖4A描述用 于基于Cls的抑制測(cè)量C1-INH的商業(yè)上可得的功能ELISA的數(shù)據(jù)。圖4B描述用于基于激膚釋 放酶的抑制測(cè)量C1-INH的示例性功能化ISA分析的數(shù)據(jù)。圖4C描述用于基于FXII的抑制測(cè) 量Cl-INH的示例性功能ELISA分析的數(shù)據(jù)。
[0054] 發(fā)明詳述
[0055] 血漿激膚釋放酶(pKal)是接觸系統(tǒng)的絲氨酸蛋白酶組分并且是循環(huán)中主要的產(chǎn) 生緩激膚的酶。接觸系統(tǒng)在暴露于外源或帶負(fù)電荷的表面時(shí)通過任一因子Xlla(活性形式 的因子ΧΠ 或FXII)被激活，或通過脯氨酷簇膚酶在內(nèi)皮細(xì)胞表面上被激活(Sainz I.Μ.等， 化romb化emost 98,77-83,2007)。血漿激膚釋放酶的激活經(jīng)其對(duì)因子ΧΠ 的反饋激活增強(qiáng) 了內(nèi)在凝聚并且經(jīng)產(chǎn)生促炎性九膚緩激膚而加重炎癥。作為循環(huán)中的主要激膚原酶，血漿 激膚釋放酶主要負(fù)責(zé)產(chǎn)生脈管系統(tǒng)中的緩激膚。C1-抑制劑蛋白（C1-INH)中的遺傳缺陷導(dǎo) 致遺傳性血管性水腫(HAE)?；糎AE的患者遭受通常由未知的觸發(fā)劑促發(fā)的疼痛水腫的急性 發(fā)作(Zuraw B丄.等，N &igl J Med 359,1027-1036,2008)。通過動(dòng)物模型中藥理學(xué)試劑的 使用或遺傳研究，血漿激膚釋放酶-激膚系統(tǒng)(血漿KKS)已經(jīng)牽設(shè)到各種疾病。
[0056] 遺傳性血管性水腫（HAE)I型和II型是常染色體顯性病癥，特征在于肢端 (extremities)、面部、胃腸道或上呼吸道腫脹（1)。發(fā)作持續(xù)2-5天，并且，如果不適當(dāng)治療， 喉部腫脹尤其可致命。由于運(yùn)是罕見的病癥(影響1:20,000至1:50,000的人），具有可變的 表現(xiàn)，所W診斷會(huì)被錯(cuò)過。HAE通常通過C1-INH基因中的雜合突變引起，運(yùn)導(dǎo)致降低的蛋白 質(zhì)水平（I型HAE，病例的85%)或降低的功能（II型齡6，15%)(2)。在1型齡6中，(：1-1畑蛋白 質(zhì)水平低，并且功能水平成比例地低，然而，在II型HAE中，蛋白質(zhì)水平正常，或甚至上升，但 功能水平低。因此，功能測(cè)定是必要的，不僅為了確認(rèn)HAE的診斷，而且II型疾病的診斷不能 沒有它。
[0057] C1INH是絲氨酸蛋白酶，其抑制補(bǔ)體的激活的蛋白質(zhì)、凝結(jié)和形成激膚的級(jí)聯(lián)。當(dāng) 前可用的用于評(píng)估C1-INH功能水平的測(cè)定利用生色分析或復(fù)合ELISA方法測(cè)量C1-INH對(duì)補(bǔ) 體級(jí)聯(lián)的CIS的抑制。生色分析通常被認(rèn)為是優(yōu)選的（3)，但是兩種方法都具有局限性。生色 分析更可能具有偶然的假陽性，而復(fù)合化ISA僅具有62%的陰性預(yù)測(cè)值。
[0058] 本領(lǐng)域已知的復(fù)合化ISA和生色方法的局限是該測(cè)定測(cè)量C1-INH對(duì)補(bǔ)體級(jí)聯(lián)的酶 的活性，其不是PKal-介導(dǎo)的疾病諸如HAE的原因。實(shí)際上，已