1日，〔.等（1987)]\]\1〇1.13;[01.196:901-917，也見冊￥.11旨1119.1111'。.日。.1110。本文使用 Rabat定義。每個VH和化通常由Ξ個CDR和四個FR組成，其從氨基端至簇基端W下述順序排 列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。
[0163] 抗體的VH或化鏈可進一步包括所有或部分重鏈或輕鏈恒定區(qū)，從而分別形成免疫 球蛋白重鏈和輕鏈。在一種實施方式中，抗體是具有兩條免疫球蛋白重鏈和兩條免疫球蛋 白輕鏈的四聚體，其中免疫球蛋白重鏈和輕鏈通過例如二硫鍵相互連接。在IgG中，重鏈恒 定區(qū)包括Ξ個免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域，CH1、CH2和C冊。輕鏈恒定區(qū)包括化結(jié)構(gòu)域。重鏈和輕鏈的 可變區(qū)包含與抗原相互作用的結(jié)合結(jié)構(gòu)域?？贵w的恒定區(qū)通常介導(dǎo)抗體與宿主組織或因子 的結(jié)合，所述宿主組織或因子包括免疫系統(tǒng)的各種細胞(例如，效應(yīng)細胞)和經(jīng)典補體系統(tǒng) 的第一組分(Clq)。免疫球蛋白的輕鏈可W是K或λ類型的。在一種實施方式中，抗體被糖基 化?？贵w對于抗體-依賴性細胞毒性和/或補體介導(dǎo)的細胞毒性可W是功能性的。
[0164] 抗體的一個或多個區(qū)域可W是人的或?qū)嶋H上是人的。例如，一個或多個可變區(qū)可 W是人的或?qū)嶋H上是人的。例如，一個或多個CDR可W是人的，例如HC CDRUHC CDR2、HC CDR3、LC CDRULC CDR2和LC CDR3。每個輕鏈CDR均可W是人的。肥CDR3可W是人的。一個 或多個框架區(qū)可W是人的，例如HC或LC的FR1、FR2、FR3和FR4。例如，F(xiàn)c區(qū)域可W是人的。在 一種實施方式中，所有的框架區(qū)是人的，例如具有人的體細胞例如產(chǎn)生免疫球蛋白的造血 細胞或非造血細胞產(chǎn)生的抗體的框架的序列。在一種實施方式中，人序列是生殖系序列，例 如由生殖系核酸編碼的生殖系序列。在一種實施方式中，選擇的Fab的框架(FR)殘基可轉(zhuǎn)化 成最類似的靈長類生殖系基因，尤其是人生殖系基因中的相應(yīng)殘基的氨基酸類型。恒定區(qū) 中的一個或多個可W是人的或?qū)嶋H上是人的。例如，至少70 %、75 %、80 %、85 %、90 %、 92%、95%、98%或100%的免疫球蛋白可變區(qū)、恒定區(qū)、恒定結(jié)構(gòu)域(邸1、邸2、邸3、化1)或 整個抗體可W是人的或?qū)嶋H上是人的。
[0165] 所有或部分抗體可由免疫球蛋白基因或其區(qū)段編碼。示例性人免疫球蛋白基因包 括K、A、a(IgAl和IgA2)、丫（1邑61、1邑62、1邑63、1邑64)、6、6和4恒定區(qū)基因，^及許多免疫球蛋 白可變區(qū)基因。全長免疫球蛋白"輕鏈"（約25邸a或約214個氨基酸化在NH2-末端(約110個 氨基酸）的可變區(qū)基因和在C00H--末端的K或λ恒定區(qū)基因編碼。全長免疫球蛋白"重錐'（約 50邸a或約446個氨基酸)類似地由可變區(qū)基因（約116個氨基酸)和其他上述恒定區(qū)基因之 一例如丫（編碼約330個氨基酸)編碼。人肥的長度變化很大，因為肥CDR3從約3個氨基酸殘 基變化至超過35個氨基酸殘基。
[0166] 術(shù)語全長抗體的"抗原結(jié)合片段"指保持特異性結(jié)合感興趣祀標的能力的全長抗 體的一個或多個片段。術(shù)語全長抗體的"抗原結(jié)合片段"包括的結(jié)合片段的例子包括(i)Fab 片段，其是由化、VH、化和CH1結(jié)構(gòu)域組成的單價片段；（ii)F(ab'）2片段，其是包括在較鏈區(qū) 通過二硫鍵連接的兩個化b片段的二價片段；（iii)由VH和邸1結(jié)構(gòu)域組成的Fd片段；（iv)由 抗體的單臂的化和VH結(jié)構(gòu)域組成的Fv片段，（v)dAb片段(Ward等，（1989)化ture 341: 544-546)，其由VH結(jié)構(gòu)域組成;和(Vi)保持功能的分離的互補決定區(qū)(CDR)。此外，盡管Fv片段的 兩個結(jié)構(gòu)域化和VH由單獨的基因編碼，但是它們可使用重組方法通過合成的連接體連接， 所述連接體使它們能夠形成為單個蛋白質(zhì)鏈，其中VL和VH區(qū)域配對W形成稱為單鏈Fv (scFv)的單價分子。見例如，美國專利5,260，203、4,946,778和4,881,175; Bird等（1988) Science 242:423-426;和Huston等（1988)P;roc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-5883。
[0167] 可使用任何適當?shù)募夹g(shù)獲得抗體片段，所述技術(shù)包括本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī) 技術(shù)。術(shù)語"單特異性抗體"指對于具體的祀標例如表位顯示單一結(jié)合特異性和親和力的抗 體。該術(shù)語包括"單克隆抗體"或"單克隆抗體組合物"，其如本文所使用的指單一分子組合 物的抗體或其片段的制劑，而不考慮抗體如何產(chǎn)生。
[0168] 如本文所使用，"人源化的"免疫球蛋白可變區(qū)指運樣的免疫球蛋白可變區(qū)：其被 修飾W包括足夠數(shù)量的人框架氨基酸位置，使得免疫球蛋白可變區(qū)不在正常人中引起免疫 原性應(yīng)答/'人源化的"免疫球蛋白的描述包括例如U. S. 6，407，213和U. S. 5，693，762。
[0169] 抑制常數(shù)化i)提供對抑制劑效力的測量;其是使酶活性減半所需要的抑制劑的濃 度并且不取決于酶或底物濃度。通過下列獲得在不同的底物濃度的表觀KKKi，app):測量 不同濃度的抑制劑(例如，抑制結(jié)合蛋白）對反應(yīng)程度的抑制作用(例如，酶活性）；將作為抑 制劑濃度的函數(shù)的準一級速率常數(shù)的變化擬合至Morrison方程式(方程式1)，產(chǎn)生對表觀 Ki值的評估。從Ki，app對底物濃度的圖的線性回歸分析提取的y-截距獲得Ki。
[0170]
[017。 方程式1
[017引其中V =測量速率;vO =沒有抑制劑的情況下的速率;Ki，app =表觀抑制常數(shù)；I = 總抑制劑濃度;和E =總酶濃度。
[0173] D.試劑盒
[0174] 本公開還提供用于評價在功能上抑制PKal和/或FXII的C1-INH的試劑盒。運樣的 試劑盒可包括：（a)本文所述的捕獲試劑和(b)結(jié)合C1-INH的檢測試劑，其也是在本文中被 描述，例如抗-C1-INH抗體，和任選的（c)Cl-INH。在一些實施方式中，捕獲試劑包括(i)活性 形式的因子ΧΠ 或其C1-INH-結(jié)合片段；（ii)活性形式的激膚釋放酶或其C1-INH-結(jié)合片段； 或和(ii)的組合。在一些實施方式中，捕獲試劑被固定在基質(zhì)上諸如微板。
[0175] 在一些實施方式中，試劑盒可包括根據(jù)本文所述的任何方法進行使用的說明書。 包括的說明書可包括對如何使用試劑盒中包含的組分測量樣品中功能性C1-INH水平的描 述，所述樣品可W是收集自人患者的生物樣品。
[0176] 與試劑盒使用相關(guān)的說明書一般包括關(guān)于每種組分的量和用于進行本文所述的 試驗方法適當?shù)臈l件的信息。試劑盒中的組分可為單位劑量、散裝(例如，多劑量包裝)或亞 單位劑量。本發(fā)明的試劑盒中提供的說明書通常是標簽或包裝插入物(例如，試劑盒中包括 的紙片)上的書面說明書，但是也可接受機器可讀的說明書(例如，在磁盤或光盤上攜帶的 說明書）。
[01W]標簽或包裝插入物指示試劑盒用于基于PKal和/或FXII的抑制評價功能性C1-INH 的水平?？商峁┱f明書用于實踐本文所述的任何方法。
[0178]本發(fā)明的試劑盒在適當?shù)陌b中。適當?shù)陌b包括但不限于管形瓶、瓶子、廣口 瓶、柔性包裝(例如，密封聚醋薄膜(Mylar)或塑料袋)等。也考慮與具體的設(shè)備一起使用的 包裝，比如吸入器、鼻施用設(shè)備(例如，霧化器)或注入設(shè)備比如微型累。試劑盒可具有無菌 進入口（例如容器可W是靜脈注射溶液袋或管形瓶，其具有皮下注射針可刺破的阻塞物）。 容器也可具有無菌進入口（例如容器可W是靜脈注射溶液包或管形瓶，其具有皮下注射針 可刺破的塞子）。
[0179] 試劑盒可任選地提供另外的組分比如緩沖液和解釋信息。通常，試劑盒包括容器 和在容器上或與其結(jié)合的標簽或包裝插入物(一個或多個）。在一些實施方式中，本公開提 供了制造包括上述試劑盒內(nèi)容物的制品。
[0180] 測定方法在疾病診斷和預(yù)后中的應(yīng)用
[0181] 本文所述的測定方法和試劑盒可用于評估疾病，例如進行疾病的診斷或預(yù)后。評 估可包括鑒定受試者具有本文所描述的疾病的風(fēng)險或具有本文所描述的疾病，例如地al介 導(dǎo)的病癥，比如HAE(例如I型和/或II型HAE)。評估也可包括監(jiān)測疾病的治療，比如評估治療 地al介導(dǎo)的病癥比如HAE(例如I型和/或II型HAE)的效力。
[0182] A.診斷
[0183] 在一些實施方式中，執(zhí)行測定方法和試劑盒，測定從候選受試者(例如被懷疑患有 PKal-介導(dǎo)的病癥諸如HAE的人患者）中收集的生物學(xué)樣品（例如血液樣品或血漿樣品）的 C1-INH的水平。然后，將C1-INH水平與參考值比較，W確定受試者是否具有地al-介導(dǎo)的病 癥或處于地曰^介導(dǎo)的病癥的風(fēng)險。參考值可W是能夠結(jié)合本文所述的捕獲試劑(例如地al 或FXII)的C1-INH的對照水平。在一些實施方式中，對照水平是能夠結(jié)合捕獲試劑的對照樣 品，諸如獲自健康受試者或健康受試者群體的樣品（例如血液或血漿樣品）中C1-INH的水 平，所述健康受試者或健康受試者群體優(yōu)選與候選受試者屬于相同的物種。如本文中使用 的，健康受試者是在測量C1-INH的水平時明顯沒有目標疾?。ɡ鏟Kal-介導(dǎo)的病癥諸如 HAE)的受試者，或沒有所述疾病的歷史的受試者。
[0184] 對照水平也可W是預(yù)定的水平。運樣的預(yù)定的水平可表示不具有目標疾病或不處 于目標疾病風(fēng)險中的受試者群體中功能性C1-INH(能夠結(jié)合捕獲試劑)的水平。其還可表示 不太可能受益于用地al抑制劑進行治療的受試者群體中功能性C1-INH的水平。
[0185] 預(yù)定的水平可采用各種形式。例如，其可W是單個臨界值(cut off value)，比如 中值或平均值。在一些實施方式中，可基于比較組確定運樣的預(yù)定水平，比如其中一個定義 的組已知具有目標疾病和另一定義的組已知沒有該目標疾病。可選地，預(yù)定的水平可W是 一個范圍例如表示在預(yù)定的百分數(shù)W內(nèi)對照群體中功能性C1-INH的水平的范圍。
[0186] 可通過常規(guī)技術(shù)測定如本文所描述的對照水平。在一些例子中，可通過對如本文 所述的對照樣品進行常規(guī)方法(例如，為獲得如本文所描述的測試樣品中能夠結(jié)合捕獲劑 的C1-INH的水平的相同測定)獲得對照水平。在其他實例中，C1-INH的水平可獲得自對照群 體的成員，并且可通過例如計算程序分析結(jié)果，W獲得代表對照群體中C1-INH的水平的對 照水平(預(yù)定的水平）。
[0187] 通過比較獲得自候選受試者的樣品中能夠結(jié)合捕獲劑的C1-INH的水平與本文所 描述的參考值，可確定候選受試者是否具有地al介導(dǎo)的疾病(例如，HAE)或處在上述疾病的 風(fēng)險中。例如，如果候選受試者的結(jié)合捕獲劑的C1-INH的水平偏離參考值(例如，與參考值 相比降低），那么候選受試者可能被鑒定為具有疾病或處在所述疾病的風(fēng)險中。
[0188] 如本文中使用的，"升高的水平或高于參考值的水平"表示結(jié)合捕獲試劑的C1-INH 的水平高于參考值，諸如預(yù)定的闊值或?qū)φ諛悠分薪Y(jié)合捕獲試劑的Cl-INH的水平。對照水 平在本文詳細描述。結(jié)合捕獲試劑的C1-INH的升高的水平包括運樣的C1-INH水平，其例如 高于參考值1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、150%、 200%、300%、400%、500%或更多。結(jié)合捕獲試劑的C1-INH的升高的水平還包括增加從零 狀態(tài)(例如樣品中沒有或不可檢測的結(jié)合捕獲劑的C1-INH)到非零狀態(tài)(例如樣品中一些或 可檢測的結(jié)合捕獲劑的C1 -1NH)的現(xiàn)象(phenomenon)。
[0189] 如本文中使用的，"降低的水平或低于參考值的水平"表示結(jié)合捕獲試劑的C1-INH 的水平低于參考值，諸如預(yù)定的闊值或?qū)φ諛悠分薪Y(jié)合捕獲試劑的C1-INH。對照水平在本 文詳細描述。結(jié)合捕獲試劑的C1-INH的降低的水平包括運樣的C1-INH水平，其例如比參考 值低1 %、5%、10%'20%'30%'40%'50%'60%'70%'80%'90%'100%、150%'200%、 300%、400%、500%或更多。結(jié)合捕獲試劑的C1-INH的降低的水平還包括降低從非零狀態(tài) (例如樣品中一些或可檢測的結(jié)合捕獲劑的C1-INH)到零狀態(tài)(例如樣品中沒有或不可檢測 的結(jié)合捕獲劑的C1-INH)的癥候。
[0190] 在一些實施方式中，候選受試者是具有地al介導(dǎo)的病癥例如本文所公開的那些病 癥比如HAE的癥狀的人患者。例如，受試者患有水腫、腫脹，其中所述腫脹完全或主要是外周 的;等麻疹;發(fā)紅、疼痛和沒有感染跡象的腫脹;非組胺介導(dǎo)的水腫，腫脹的復(fù)發(fā)性發(fā)作或其 組合。在其他實施方式中，受試者在收集樣品時沒有地al介導(dǎo)的病癥的癥狀、沒有地al介導(dǎo) 的病癥癥狀的歷史或沒有地al介導(dǎo)的病癥比如HAE的病史。在仍其他實施方式中，受試者耐 受抗組胺療法、皮質(zhì)類固醇療法或二者。
[0191 ]在一些實施方式中，設(shè)及血漿激膚釋放酶活性的疾病或病況是遺傳性血管性水腫 (HAE)。遺傳性血管性水腫化AE)也稱為"Quincke水腫"、C1醋酶抑制劑缺陷、C1抑制劑缺陷 和遺傳性血管神經(jīng)性水腫化A肥）"HAE的特征在于嚴重腫脹(血管性水腫）的復(fù)發(fā)發(fā)作，其可 影響例如四肢、面部、生殖器、胃腸道和氣道。HAE的癥狀包括例如臂、腿、嘴唇、眼睛、舌和/ 或喉魄的腫脹;可設(shè)及喉魄腫脹和突然嘶啞的氣道阻塞；沒有明顯原因的腹部疫李的重復(fù) 發(fā)作；和/或腸的腫脹，其可W是嚴重的并且可導(dǎo)致腹部疫李、嘔吐、脫水、腹瀉、疼痛和/或 休克?；荚揌AE的約Ξ分之一的個體在發(fā)作期間被發(fā)展稱為邊緣性紅斑的非癢皮疹。
[0192] 氣道的腫脹可威脅生命并且造成一些患者的死亡。死亡率估計為15-33% dHAE每 年導(dǎo)致約15，000-30，000例急診室訪問。
[0193] 創(chuàng)傷或壓力例如牙科操作、疾病(例如，病毒疾病比如感冒和流感）、月經(jīng)和外科手 術(shù)可觸發(fā)血管性水腫的發(fā)作。為了預(yù)防HAE的急性發(fā)作，患者可嘗試避免先前造成發(fā)作的具 體的刺激。但是，在許多情況下，在沒有已知觸發(fā)物的情況下出現(xiàn)發(fā)作。典型地，HAE癥狀首 先出現(xiàn)在幼年期并且在青春期惡化。平均，未治療的個體每1至2周發(fā)作，并且大部分發(fā)作持 續(xù)約3至4天（旨111'.]11111.]1化.旨0￥/。〇]1(1；[1：；[0]1/116的(1；[1日巧-日叫；[06(161]1日）。發(fā)作的頻率和持續(xù) 時間在具有遺傳性血管性水腫的人之間，甚至在同一家族的人之間變化非常大。
[0194] 有Ξ種類型的HAE，稱為1、11和ΙΠ 型。估計HAE每50,000人中影響1個人，1型占病 例的約85%，II型占病例的約15%，而III型非常少見。III型是最新描述的形式，并且最初 認為僅發(fā)生在女性中，但是已經(jīng)鑒定出具有受影響的男性的家族。在一些實施方式中，本文 所述的測定方法可用于診斷I型HAE或II型HAE。見下面的實例。
[0195] HAEW常染色體顯性模式遺傳，使得受影響的人可從一個受影響的親本遺傳突變。 也可發(fā)生基因的新突變，并且因此HAE也可出現(xiàn)在其家族沒有該病癥歷史的人中。估計20-25%的病例源自新的自發(fā)突變。
[0196] SERPING1基因的突變造成I型和II型遺傳性血管性水腫。沈RPING1基因提供制備 對于控制炎癥重要的C1抑制劑蛋白質(zhì)的指令。C1抑制劑阻止促進炎癥的某些蛋白質(zhì)的活 性。造成I型遺傳性血管性水腫的突變導(dǎo)致血液中C1抑制劑水平下降。相反，造成II型的突 變導(dǎo)致產(chǎn)生功能異常的C1抑制劑。在沒有適當水平的功能性C1抑制劑的情況下，產(chǎn)生過量 的緩激膚。緩激膚通過增加流體穿過血管壁向身體組織的滲漏而促進炎癥。身體組織中過 量積聚的流體造成患有I型和II型遺傳性血管性水腫的個體中可見的腫脹的發(fā)作。
[0197] F12基因的突變與III型遺傳性血管性水腫的一些病例相關(guān)。F12基因提供制備凝 結(jié)因子XII的指令。除了在血液凝固（凝結(jié)）中發(fā)揮關(guān)鍵的作用之外，因子ΧΠ 也是炎癥的重 要的刺激劑并且參與產(chǎn)生緩激膚。F12基因中的某些突變導(dǎo)致產(chǎn)生具有增加活性的因子 XII。結(jié)果，產(chǎn)生更多的緩激膚并且血管壁變得更滲漏，運導(dǎo)致腫脹的發(fā)作。III型遺傳性血 管性水腫的其他病例的原因仍是未知的。一個或多個仍未鑒定的基因中的突變可能是造成 運些病例中的病癥的原因。
[0198] HAE可與源自變態(tài)反應(yīng)或其他醫(yī)學(xué)病況的其他形式的血管性水腫類似地呈現(xiàn)，但 是其病因和治療明顯不同。當遺傳性血管性水腫被誤診為變態(tài)反應(yīng)時，其最常見用抗組胺 藥、類固醇類和/或腎上腺素治療，其通常對HAE無效，盡管腎上腺素可用于威脅生命的反 應(yīng)。對具有腹部腫脹的患者，誤診也導(dǎo)致不必要的試探性外科手術(shù)，并且在一些HAE患者中， 腹部疼痛錯誤地診斷為身屯、失調(diào)的。
[0199] 可例如，使用問卷例如由患者、臨床醫(yī)生或家族成員完成的問卷評估HAE的癥狀。 運樣的問卷是本領(lǐng)域已知的并且包括例如視覺模擬評分(visual analog scale)。見例如 McMillan, C.V.等化 tent. 2012; 5(2): 113-26。
[0200] 與血漿激膚釋放酶活性有關(guān)的其他示例性疾病或病況包括非組胺-依賴性特發(fā)性 血管性水腫、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、克羅恩病、狼瘡、阿爾茨海默氏疾病、敗血癥性休克、燒傷、腦 缺血性/再灌注損傷、腦水腫、糖尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病性腎病、黃斑性水腫、血管炎、動脈 或靜脈血栓形成、與屯、室輔助設(shè)備或支架相關(guān)的血栓形成、具有血栓形成的肝素-誘導(dǎo)的血 小板減少癥、血栓栓塞病和伴隨不穩(wěn)定的屯、絞痛的冠屯、病、水腫、眼病、痛風(fēng)、腸疾病、口腔 粘膜炎、神經(jīng)病痛、炎性疼痛、椎管狹窄退行性脊柱病、術(shù)后腸梗阻、主動脈瘤、骨關(guān)節(jié)炎、遺 傳性血管性水腫、肺栓塞、中風(fēng)、頭部創(chuàng)傷或瘤周腦水腫、脈毒癥、急性大腦中動脈(MCA)缺 血性事件（中風(fēng)）、再狹窄（例如血管成形術(shù)之后）、系統(tǒng)性紅斑狼瘡腎炎、自身免疫疾病、炎 性疾病、屯、血管疾病、神經(jīng)疾病、與蛋白質(zhì)錯折疊相關(guān)的疾病、與血管生成相關(guān)的疾病、高血 壓腎病和糖尿病性腎病、變應(yīng)性疾病和呼吸疾病(例如過敏癥、哮喘、慢性阻塞性肺部疾病、 急性呼吸窘迫綜合癥、囊性纖維化、持續(xù)性鼻炎)和組織損傷(例如燒傷或化學(xué)損傷）。
[0201] 被鑒定為具有PKal-介導(dǎo)的病癥或處于PKal-介導(dǎo)的病癥風(fēng)險的受試者可W進行 治療，諸如本文所述的那些治療。 巧202] B.評價治療效力
[0203]本文所述的測定方法還可用于評價PKa^介導(dǎo)的病癥(例如HAE)的治療的效力。例 如，在治療前和治療后或在治療過程中，多個生物學(xué)樣品（例如血液或血漿樣品）可收集自 進行治療的受試者。功能性C1-INH的水平（能夠抑制PKal和/或FXII)可通過本文所述的任 意測定方法測量。如果功能性Cl-INH的水平在治療后或在治療過程中增加(在稍后收集的 樣品中的功能性C1-INH的水平與較早收集的樣品中的功能性C1-INH的水平進行比較)保持 相同或增加，則指示治療是有效的。在一些實例中，治療設(shè)及治療劑諸如本文所述的激膚釋 放酶結(jié)合劑、本文所述的緩激膚B2受體括抗劑或本文所述的C1-INH取代劑。治療劑的實例 包括但不限于DX-2930或DX88。
[0204] 如果受試者被鑒定為不響應(yīng)治療，則更高劑量和/或更高的治療劑給藥頻率被施 用至經(jīng)鑒定的受試者。在一些實施方式中，在被鑒定為響應(yīng)治療或不需要進一步治療的受 試者中保持、降低或終止治療劑的劑量或給藥頻率?？蛇x地，不同的治療可施用至被發(fā)現(xiàn)為 不響應(yīng)第一治療的受試者。
[0205] 簽量
[0206] 本文所述的還有治療具有?1(3^介導(dǎo)的病癥諸如HAE或處于?1(3^介導(dǎo)的病癥諸如 HAE風(fēng)險中的受試者的方法。與參考值相比（例如如本文所述的），受試者具有降低水平的功 能性C1-INH(能夠抑制PKal或FXII)，其可通過本文所述的任何測定方法測定。
[0207] 處于地al-介導(dǎo)的或緩激膚-介導(dǎo)的病癥的風(fēng)險中或遭受(例如具有)pKal-介導(dǎo)的 或緩激膚-介導(dǎo)的病癥的受試者可用任何適當?shù)闹委焺┲委?。在一些實施方式中，提供的?法包括基于測定的輸出為受試者選擇治療。提供的測定允許檢測樣品中存在的功能性C1-INH和緩激膚途徑的激活的成分，例如血漿激膚釋放酶、因子Xlla和因子Xlla等，之間的相 互作用。低水平的運類相互作用指示樣品中低功能性C1-INH的水平。在一些實施方式中，為 受試者選擇治療，例如用激膚釋放酶結(jié)合劑，例如用C1-INH替代治療劑，與對照樣品或參考 相比，所述受試者的樣品具有小于90 %、小于85 %、小于80 %、小于75 %、小于70 %、小于 65 %、小于60 %、小于55 %、小于55 %、小于50 %、小于45 %、小于40 %、小于35 %、小于30 %、 小于25%、小于20%、小于15%、小于10%或小于5%的功能性CI-INH結(jié)合活性。
[0208] 在一些實施方式中，方法包括W下兩個步驟之一或二者:基于測定的輸出，選擇或 施用治療劑，例如如本文所描述的激膚釋放酶結(jié)合劑，例如如本文所描述的緩激膚B2受體 括抗劑，例如如本文所描述的C1-INH取代劑，用于施用至受試者。
[0209] 在一些實施方式中，血漿激膚釋放酶結(jié)合蛋白或多膚被施用至受試者。在一些實 施方式中，激膚釋放酶結(jié)合劑是激膚釋放酶抑制劑例如膚、小分子抑制劑、激膚釋放酶抗體 或其片段。在一些實施方式中，緩激膚B2受體的括抗劑被施用至受試者。在一些實施方式 中，C1-INH替換治療劑被施用至受試者。
[0210]治療劑例如激膚釋放酶抑制劑例如緩激膚B2受體括抗劑例如C1-INH取代劑，可與 另一療法一起施用，作為治療設(shè)及血漿激膚釋放酶和/或緩激膚活性的疾病或病況的聯(lián)合 療法的部分。例如，用激膚釋放酶抑制劑、緩激膚B2受體括抗劑或C1-INH取代劑中的一個或 多個，例如用激膚釋放酶抑制劑、緩激膚B2受體括抗劑或C1-INH取代劑中的一個或多個和 另一療法的聯(lián)合療法，可W多種不同的配置被提供。第一試劑可在施用其他療法之前或之 后施用。在一些情況下，同時或時間上接近地(例如，注射之間的短時間間隔，比如相同的治 療期間)施用第一試劑和另一療法(例如，治療劑）。也可W更大的時間間隔施用第一試劑和 其他療法。
[0211] 血漿激膚釋放酶結(jié)合劑
[0212] 血漿激膚釋放酶結(jié)合劑(例如，結(jié)合蛋白，例如多膚，例如抑制性多膚，例如抗體， 例如抑制性抗體或其他結(jié)合劑，例如小分子)是對各種疾病和病況有用的治療劑，所述疾病 和病況例如設(shè)及血漿激膚釋放酶活性的疾病和病況。例如，在一些實施方式中，設(shè)及血漿激 膚釋放酶活性的疾病或病況是遺傳性血管性水腫化AE)。在一些實施方式中，血漿激膚釋放 酶結(jié)合蛋白或多膚被施用至處在地al介導(dǎo)的或緩激膚介導(dǎo)的病癥風(fēng)險或遭受地al介導(dǎo)的 或緩激膚介導(dǎo)的病癥的受試者。
[0213] 激膚釋放酶一-組織和/或血漿激膚釋放酶一一的許多有用的蛋白質(zhì)抑制劑包括 Kunitz結(jié)構(gòu)域。如本文所使用，"Kunitz結(jié)構(gòu)域"是具有至少51個氨基酸的多膚結(jié)構(gòu)域并且 包含至少兩個，和優(yōu)選地Ξ個，二硫鍵。折疊結(jié)構(gòu)域，W便第一和第六半脫氨酸、第二和第四 W及第Ξ和第五半脫氨酸形成二硫鍵(例如，在具有58個氨基酸的Kunitz結(jié)構(gòu)域中，半脫氨 酸可存在于對應(yīng)氨基酸5、14、30、38、51和55的位置，其根據(jù)下面提供的8?1'1同源序列的編 號，并且可在位置5和55，14和38，和30和51的半脫氨酸之間形成二硫鍵），或者，如果存在兩 個二硫鍵，它們可在其半脫氨酸的相應(yīng)的亞組之間形成。各半脫氨酸之間的間隔可在對應(yīng)： 5至55、14至38和30至51位置之間的下述間隔的7、5、4、3、2、1或0個氨基酸W內(nèi)，其根據(jù)下面 提供的BPTI序列的編號。ΒΡ??序列可用作參考來指任何一般性Kunitz結(jié)構(gòu)域中的具體位 置。感興趣的Kunitz結(jié)構(gòu)域與BPTI的比較可通過鑒定最佳適合比對進行，其中比對的半脫 氨酸的數(shù)量最大化。
[0214] BPTI的Kunitz結(jié)構(gòu)域的3D結(jié)構(gòu)高分辨率）是已知的。一種X射線結(jié)構(gòu)作為" 6PTI"存放在化ooWiaven蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫中（Brookhaven Protein Data Bank)。一些BPTI同 源物的3D結(jié)構(gòu)是已知的化igenbrot等，（1990)P;rotein