經(jīng)報道功能失調(diào)的C1-INH對激 膚形成級聯(lián)具有正常的活性，因此不發(fā)生血管性水腫，但是它不能抑制Cls，使得C1異常地 有活性和C4被消耗(7)。因此，當(dāng)前可用的技術(shù)不允許測量在功能上抑制激膚形成級聯(lián)(例 如抑制PKa巧日/或FXIIa)的C1-INH的水平。
[0059] 本公開是基于采用化ISA方法基于激活的因子ΧΠ 或血漿激膚釋放酶的抑制測量 功能性C1-INH的新測定的發(fā)展，用于診斷HAE的I和II型。運(yùn)些測定尤其與地al信號傳導(dǎo)途 徑相關(guān)的疾病/病癥有生理相關(guān)性，因此相對于現(xiàn)有技術(shù)中已知的方法是重要的進(jìn)步。
[0060] 本文所述的是基于PKa巧日/或FXII(例如活性形式的蛋白質(zhì)）的抑制測量C1-INH的 水平的新測定方法，和用于完成所述測定方法的試劑盒。而且，本文所述的是運(yùn)樣的測定方 法在診斷具有通過PKal介導(dǎo)的疾病/病癥諸如HAE的患者或處于通過PKal介導(dǎo)的疾病/病癥 諸如HAE風(fēng)險中的患者的應(yīng)用，或在評估疾病/病癥的治療中的應(yīng)用。
[0061]
[0062] ^方便，在進(jìn)一步描述本發(fā)明之前，在運(yùn)里定義說明書、實施例和所附的權(quán)利要 求中采用的某些術(shù)語。其他術(shù)語在說明書中出現(xiàn)時被定義。
[0063] 單數(shù)形式"一個"、"一種"和"所述/該"包括復(fù)數(shù)參考物，除非上下文另外明確指 出。
[0064] 如本文所使用，術(shù)語"獲取(acquire)"或"獲取(acquiring)"指通過"直接獲取"或 "間接獲取"物理實體或值獲得對物理實體或值例如數(shù)值的擁有。"直接獲取"意思是執(zhí)行程 序(例如，對樣品進(jìn)行測定或測試或"分析樣品"，如該術(shù)語在本文定義的那樣），W獲得物理 實體或值。"間接獲取"指接收來自另一方或來源(例如，直接獲取物理實體或值的第Ξ方實 驗室)的物理實體或值。直接獲取物理實體包括執(zhí)行程序例如分析樣品，其包括物理物質(zhì)例 如原料的物理變化。示例性變化包括由兩種或更多種原料制造物理實體、剪切或破碎物質(zhì)、 分離或純化物質(zhì)、將兩個或更多個分開的實體組合成混合物、進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)一一包括斷裂 或形成共價或非共價鍵。直接獲取值包括執(zhí)行包括樣品或另一物質(zhì)中的物理變化的程序， 例如執(zhí)行包括物質(zhì)例如樣品、分析物或試劑中的物理變化的分析程序(有時本文稱為"物理 分析"）；執(zhí)行分析方法，例如包括下述一個或多個步驟的方法:從另一物質(zhì)分離或純化物質(zhì) 例如分析物或其片段或其他衍生物，將分析物或其片段或其他衍生物與另一物質(zhì)例如緩沖 液、溶劑或反應(yīng)物組合，或改變分析物或其片段或其他衍生物的結(jié)構(gòu)，例如通過在分析物的 第一和第二原子之間斷裂或形成共價或非共價鍵、或通過改變試劑或其片段或其他衍生物 的結(jié)構(gòu)，例如通過在試劑的第一和第二原子之間斷裂或形成共價或非共價鍵。
[0065] 如本文所使用，"分析"樣品包括執(zhí)行程序，其設(shè)及樣品或另一物質(zhì)例如原料的物 理變化。示例性變化包括由兩種或更多種原料制造物理實體、剪切或破碎物質(zhì)、分離或純化 物質(zhì)、將兩個或更多個分開的實體組合成混合物、進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)一一包括斷裂或形成共價 或非共價鍵。分析樣品可包括執(zhí)行包括物質(zhì)例如樣品、分析物或試劑的物理變化的分析程 序(有時本文稱為"物理分析"）；執(zhí)行分析方法，例如其包括下述一個或多個步驟的方法:從 另一物質(zhì)分離或純化物質(zhì)例如分析物或其片段或其他衍生物，將分析物或其片段或其他衍 生物與另一物質(zhì)例如緩沖液、溶劑或反應(yīng)物組合，或改變分析物或其片段或其他衍生物的 結(jié)構(gòu)，例如通過在分析物的第一和第二原子之間斷裂或形成共價或非共價鍵，或通過改變 試劑或其片段或其他衍生物的結(jié)構(gòu)，例如通過在試劑的第一和第二原子之間斷裂或形成共 價或非共價鍵。
[0066] 如本文所使用，術(shù)語"激動劑"意思是指模擬或上調(diào)（例如，加強(qiáng)或補(bǔ)充）蛋白質(zhì)生 物活性的試劑。激動劑可W是野生型蛋白質(zhì)或其具有野生型蛋白質(zhì)的至少一種生物活性的 衍生物。激動劑可也W是增加蛋白質(zhì)的至少一種生物活性的化合物。激動劑也可W是增加 多膚與另外的分子例如祀膚或核酸的相互作用的化合物。
[0067] 如本文所使用，術(shù)語"括抗劑"意思是指下調(diào)（例如，阻抑或抑制）蛋白質(zhì)的至少一 種生物活性的試劑。括抗劑可W是抑制或降低蛋白質(zhì)和另外的分子例如祀膚或酶基質(zhì)之間 的相互作用的化合物。括抗劑可也W是降低或抑制存在的表達(dá)蛋白質(zhì)的量的化合物。典型 地，抑制蛋白或基因指降低蛋白質(zhì)或基因的表達(dá)或相關(guān)活性至少10%或更多例如20%、 30%、40%或50%、60%、70%、80%、90%或更多，或降低表達(dá)或相關(guān)的活性大于1倍、2倍、3 倍、4倍、5倍、10倍、50倍、100倍或更多，如通過本文所述的或本領(lǐng)域知道的一種或多種方法 測量的。
[006引如本文所使用，"結(jié)合親和力"指表觀締合常數(shù)（apparent association con stant)或Ka。Ka是解離常數(shù)化d)的倒數(shù)。結(jié)合蛋白對于具體的祀分子可例如具有至少 105、10 6、107、108、109、101哺10>-1的結(jié)合親和力。結(jié)合蛋白相對于第二祀標(biāo)對第一祀標(biāo)更 高的親和力結(jié)合可由比結(jié)合第二祀標(biāo)的Ka(或數(shù)值Kd)更高的結(jié)合第一祀標(biāo)的Ka(或更小數(shù) 值Kd)指示。在運(yùn)樣的情況下，結(jié)合蛋白相對于第二祀標(biāo)(例如，處于第二構(gòu)象的相同蛋白質(zhì) 或其模擬物;或第二蛋白質(zhì))具有對于第一祀標(biāo)(例如，處于第一構(gòu)象的蛋白質(zhì)或其模擬物） 的特異性。結(jié)合親和力的差異(例如，對于特異性或其他比較)可W是至少1.5、2、3、4、5、10、 15、20、37.5、50、70、80、91、100、500、1000或105倍。
[0069] 可通過各種方法包括平衡透析、平衡結(jié)合、凝膠過濾、ELISA、表面等離子共振或光 譜學(xué)(例如，使用巧光試驗)測定結(jié)合親和力。用于評估結(jié)合親和力的示例性條件是在TRIS-緩沖液(5〇1111了1?15、15〇1111化(：1、51111化(：12，抑7.5)中。運(yùn)些技術(shù)可用于測量結(jié)合的和游離 的結(jié)合蛋白的濃度，其作為結(jié)合蛋白（或祀標(biāo))濃度的函數(shù)。結(jié)合的結(jié)合蛋白（[結(jié)合])的濃 度與游離的結(jié)合蛋白（[游離])的濃度和祀標(biāo)上的結(jié)合蛋白的結(jié)合位點(diǎn)的濃度相關(guān)，其中 (N)是每個祀分子的結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)量，如下述方程式：
[0070] [結(jié)合]=Ν·[游離]/((1/Ka) +[游離])。
[0071] 盡管沒有必要總是精確測定Ka，但是因為有時足W獲得對例如使用比如化ISA或 FACS分析的方法測定的親和力的定量測量，其與Ka成比例，并且因此可用于比較，比如確定 更高的親和力是否是例如高2倍，W獲得對親和力的定性測量或獲得對親和力的推導(dǎo)一一 例如通過功能測定例如體外或體內(nèi)測定的活性。
[0072] 術(shù)語"結(jié)合蛋白"指可與祀分子相互作用的蛋白質(zhì)。該術(shù)語與"配體"互換使用。"血 漿激膚釋放酶結(jié)合蛋白"指可與血漿激膚釋放酶相互作用（例如，結(jié)合）的蛋白質(zhì)，并且包 括，尤其包括，優(yōu)選或特異性與血漿激膚釋放酶相互作用和/或抑制血漿激膚釋放酶的蛋白 質(zhì)。如果蛋白質(zhì)使得血漿激膚釋放酶的活性與在沒有該蛋白質(zhì)并且在相同條件下的血漿激 膚釋放酶的活性相比下降，則該蛋白質(zhì)抑制血漿激膚釋放酶。在一些實施方式中，血漿激膚 釋放酶結(jié)合蛋白是抗體。
[0073] 術(shù)語"捕獲劑"指特異性結(jié)合其配體的部分。
[0074] 如本文所使用，術(shù)語"復(fù)合物"或"復(fù)合物形成"指彼此之間具有特異性親和力的成 員之間的復(fù)合物。
[0075] "保守氨基酸取代"是其中氨基酸殘基被具有類似側(cè)鏈的氨基酸殘基替換的取代。 本領(lǐng)域已經(jīng)定義了具有類似側(cè)鏈的氨基酸殘基家族。運(yùn)些家族包括具有堿性側(cè)鏈的氨基酸 (例如，賴氨酸、精氨酸、組氨酸）、具有酸性側(cè)鏈的氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸）、具有不 帶電的極性側(cè)鏈的氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酷胺、谷氨酷胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半 脫氨酸）、具有非極性側(cè)鏈的氨基酸(例如，丙氨酸、鄉(xiāng)氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙 氨酸、甲硫氨酸、色氨酸）、具有0-分支側(cè)鏈的氨基酸(例如，蘇氨酸、鄉(xiāng)氨酸、異亮氨酸)和具 有芳族側(cè)鏈的氨基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸）。
[0076] 生物聚合物的基序序列可包括可W是變化的氨基酸的位置。例如，在該背景下，除 非另外指出，符號"X"-般指任何氨基酸(例如，二十種天然氨基酸的任意氨基酸），例如指 任何非半脫氨酸的氨基酸。也可例如，使用括弧和斜線指示其他允許的氨基酸。例如，"(A/ W/F/N/Q)"意思是丙氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、天冬酷胺和谷氨酷胺在該具體位置是被允許 的。
[OOW]如本文所使用，"檢測劑"指結(jié)合待檢測部分的部分。通常其產(chǎn)生信號例如巧光或 產(chǎn)生可測量的化合物。
[0078] "表位"指祀化合物上被結(jié)合蛋白（例如，抗體比如Fab或全長抗體)結(jié)合的位點(diǎn)。在 祀化合物是蛋白質(zhì)的情況下，位點(diǎn)可完全由氨基酸組分組成、完全由蛋白質(zhì)的氨基酸的化 學(xué)修飾(例如，糖基部分)組成或由其組合組成。重疊表位包括至少一種常見的氨基酸殘基、 糖基基團(tuán)、憐酸根基團(tuán)、硫酸根基團(tuán)或其他分子特征。
[0079] 如果第一結(jié)合蛋白結(jié)合祀化合物上第二結(jié)合蛋白結(jié)合的相同位點(diǎn)或結(jié)合與第二 結(jié)合蛋白結(jié)合的位點(diǎn)重疊(例如，50%、60%、70%、80%、90%、或100 %重疊，例如就氨基酸 序列或其他分子特征(例如，糖基基團(tuán)、憐酸根基團(tuán)或硫酸根基團(tuán)）而言）的位點(diǎn)，則第一結(jié) 合蛋白（例如，抗體)與第二結(jié)合蛋白（例如，抗體)一樣"結(jié)合相同的表位"。
[0080] 如果第一結(jié)合蛋白與其表位的結(jié)合降低（例如，10%、20%、30%、40%、50%、 60 %、70 %、80 %、90 %、100 %或更多)結(jié)合其表位的第二結(jié)合蛋白的量，那么第一結(jié)合蛋白 (例如，抗體)與第二結(jié)合蛋白（例如，抗體）"競爭結(jié)合"。競爭可W是直接的（例如，第一結(jié)合 蛋白結(jié)合與第二結(jié)合蛋白結(jié)合的表位相同的或重疊的表位)或間接的（例如，第一結(jié)合蛋白 與其表位的結(jié)合造成祀化合物的空間改變，其降低了第二結(jié)合蛋白結(jié)合其表位的能力）。
[0081] 如本文所使用，"功能性"生物分子是其展示被表征的性質(zhì)和/或活性的形式的生 物分子。
[0082] 如下進(jìn)行兩條序列之間的"同源性"或"序列同一性"（該術(shù)語在本文可交換使用） 的計算。為了最佳比較目的比對序列(例如，空隙可引入第一和第二氨基酸之一或二者或核 酸序列中，W進(jìn)行最佳比對，并且為了比較目的可忽略非同源序列）。使用GCG軟件包中的 GAP程序?qū)⒆罴驯葘Υ_定為最佳分?jǐn)?shù)，其中采用Blossum 62評分矩陣，空隙罰分為12、空隙 延伸罰分為4,和移碼空隙罰分為5。然后比較在相應(yīng)的氨基酸位置或核巧酸位置的氨基酸 殘基或核巧酸。當(dāng)?shù)谝恍蛄兄械奈恢帽慌c第二序列中的相應(yīng)位置的相同的氨基酸殘基或核 巧酸占據(jù)時，則分子在該位置是一致的（如本文所使用，氨基酸或核酸"同一性"與氨基酸或 核酸"同源性"等同）。兩條序列之間的同一性百分?jǐn)?shù)是由序列共享的一致位置數(shù)目的函數(shù)。
[0083] 在優(yōu)選的實施方式中，為了比較目的而比對的參考序列的長度是參考序列長度的 至少30 %，優(yōu)選地至少40%，更優(yōu)選地至少50%，甚至更優(yōu)選地至少60%，和甚至更優(yōu)選地 至少70%、80%、90%、92%、95%、97%、98%或100%。例如，參考序列可^是免疫球蛋白可 變結(jié)構(gòu)域序列的長度。
[0084] 如本文所使用，術(shù)語"在低嚴(yán)格性、中嚴(yán)格性、高嚴(yán)格性或非常高嚴(yán)格性條件下雜 交"描述雜交和洗涂的條件。進(jìn)行雜交反應(yīng)的指導(dǎo)可見于Current Protocolss in Molecular Biology John Wil巧&Sons，N. Υ. (1989)，6.3.1-6.3.6中。水性和非水性方法描 述在該參考文獻(xiàn)中，并且都可被使用。本文提及的具體的雜交條件如下：（1)低嚴(yán)格性雜交 條件，在約45°C在6X氯化鋼/巧樣酸鋼(SSC)中，隨后至少在50°C在0.2X SSC、0.1%SDS洗涂 兩次(對于低嚴(yán)格性條件，洗涂的溫度可增加至55°C); (2)中嚴(yán)格性雜交條件，在約45°C在 6X SSC中，隨后在60°C在0.2X SSC、0.1%SDS中洗涂一次或多次；（3)高嚴(yán)格性雜交條件，在 約45°C在6X SSC中，隨后在65°C在0.2X 85(：、0.1%505中洗涂一次或多次；和(4)非常高的 嚴(yán)格性雜交條件是在65°C0.5M憐酸鋼、7 % SDS，隨后在65°C在0.2X SSC、1 % SDS洗涂一次或 多次。非常高的嚴(yán)格性條件(4)是優(yōu)選的條件并且是應(yīng)當(dāng)被使用的條件，除非另外指出。本 公開包括W低、中、高或非常高的嚴(yán)格性與本文所述的核酸或與其補(bǔ)體例如編碼本文所述 的結(jié)合蛋白的核酸雜交的核酸。核酸長度可W與參考核酸長度相同或在參考核酸長度的 30 %、20 %或10%之內(nèi)。核酸可對應(yīng)編碼本文所述的免疫球蛋白可變區(qū)序列的區(qū)域。
[0085] "分離的組合物"指從天然樣品的至少一種組分的至少90 %中去除的組合物，從所 述天然樣品中可獲得分離的組合物。如果感興趣的種類或種類群體W重量-重量計是至少 5%、10%、25%、50%、75%、80%、90%、92%、95%、98% 或 99% 純的，則人工或天然產(chǎn)生的 組合物可W是"具有至少一定程度的純度的組合物"。
[0086] 如本文所使用，術(shù)語"體外"指在人工環(huán)境中例如在試管或反應(yīng)容器中、細(xì)胞培養(yǎng) 中等發(fā)生的事件，而不是在多細(xì)胞生物體內(nèi)發(fā)生的事件。
[0087] 如本文所使用，術(shù)語"體內(nèi)"指在多細(xì)胞生物體比如人或非人動物中發(fā)生的事件。
[0088] "分離的組合物"指從可獲得分離組合物的天然樣品的至少一種組分的至少90% 中去除的組合物。如果感興趣的種類或種類群體W重量-重量計是至少5%、10%、25%、 50%、75%、80%、90%、92%、95%、98%或99%純的，則人工或天然產(chǎn)生的組合物可^是 "具有至少一定程度的純度的組合物"。
[0089] "分離的"蛋白質(zhì)指從可獲得分離蛋白質(zhì)的天然樣品的至少一種組分的至少90% 中去除的蛋白質(zhì)。如果感興趣的種類或種類群體W重量-重量計是至少5%、10%、25%、 50%、75%、80%、90%、92%、95%、98%或99%純的，則蛋白質(zhì)可^具有。至少"一定程度的 純度。
[0090] 術(shù)語"激膚釋放酶"（例如，血漿激膚釋放酶)指膚酶(切割蛋白質(zhì)中膚鍵的酶），其 是絲氨酸蛋白酶家族的亞類。血漿激膚釋放酶切割激膚原產(chǎn)生激膚，其是一種有效的促炎 性膚。
[0091] 術(shù)語"激膚釋放酶抑制劑"指抑制激膚釋放酶的任何試劑或分子。例如，DX-88(本 文也稱為叩ΕΡ-Γ)是血漿激膚釋放酶的有效的化KlnM)和特異性抑制劑(肥_000883)。（也 見例如W0 95/21601 或W0 2003/103475)。
[0092] 如本文所使用術(shù)語"DX-2922"與術(shù)語^101-Α0?？山粨Q使用。下面描述該抗體的 其他變體。
[0093]
[0094] 如本文所使用的，術(shù)語"DX-2930"與術(shù)語^124-G〇r可互換使用。下面描述該抗體 的其他變體。
[0095]
[0096] 術(shù)語"調(diào)諧劑"指可能夠?qū)е抡{(diào)整的多膚、核酸、大分子、復(fù)合物、分子、小分子、化 合物、種類等(天然存在的或非天然存在的），或由生物材料比如細(xì)菌、植物、真菌或動物細(xì) 胞或組織制備的提取物?？赏ㄟ^包括在測定中評估調(diào)諧劑作為具有功能性質(zhì)、生物活性或 過程或它們組合的抑制劑或活化劑(例如，激動劑、部分括抗劑、部分激動劑、反向激動劑、 括抗劑、抗微生物劑、微生物感染或增殖的抑制劑等）（直接或間接)的潛在活性。在運(yùn)樣的 巧憶中，可一次篩選許多調(diào)諧劑。調(diào)諧劑的活性可W是已知的、未知的或部分已知的。
[0097] "非必需"氨基酸殘基是運(yùn)樣的殘基，其可W與結(jié)合劑例如抗體的野生型序列不 同，而不消除或更優(yōu)選基本上不改變生物活性，但是改變"必需"氨基酸殘基使得活性大大 喪失。
[0098] 待通過本發(fā)明方法治療的"患者"、"受試者"或"宿主"（運(yùn)些術(shù)語可交換使用）可指 人或非人動物。在一些實施方式中，受試者被懷疑具有激膚釋放酶介導(dǎo)的病癥或有激膚釋 放酶介導(dǎo)的病癥的風(fēng)險或遭受激膚釋放酶介導(dǎo)的病癥，例如緩激膚介導(dǎo)的病癥，例如遺傳 性血管性水腫(HAE)、非組胺-依賴性特發(fā)性血管性水腫、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、克羅恩病、狼瘡、 阿爾茨海默氏疾病、敗血癥性休克、燒傷、腦缺血性/再灌注損傷、腦水腫、糖尿病性視網(wǎng)膜 病、糖尿病性腎病、黃斑性水腫、血管炎、動脈或靜脈血栓形成、與屯、室輔助設(shè)備或支架相關(guān) 的血栓形成、具有血栓形成的肝素-誘導(dǎo)的血小板減少癥、血栓栓塞病，和伴隨不穩(wěn)定的屯、 絞痛的冠屯、病、水腫、眼病、痛風(fēng)、腸疾病、口腔粘膜炎、神經(jīng)病痛、炎性疼痛、椎管狹窄退行 性脊柱病、術(shù)后腸梗阻、主動脈瘤、骨關(guān)節(jié)炎、遺傳性血管性水腫、肺栓塞、中風(fēng)、頭部創(chuàng)傷或 瘤周腦水腫、脈毒、急性大腦中動脈(MCA)缺血性事件（中風(fēng)）、再狹窄（例如，血管成形術(shù)之 后）、系統(tǒng)性紅斑狼瘡腎炎、自身免疫疾病、炎性疾病、屯、血管疾病、神經(jīng)疾病、與蛋白質(zhì)錯折 疊相關(guān)的疾病、與血管生成相關(guān)的疾病、高血壓腎病和糖尿病性腎病、變應(yīng)性疾病和呼吸疾 病(例如過敏癥、哮喘、慢性阻塞性肺部疾病、急性呼吸窘迫綜合癥、囊性纖維化、持續(xù)性鼻 炎)和組織損傷(例如燒傷或化學(xué)損傷）。
[0099] 術(shù)語"前激膚釋放酶"和"前血漿激膚釋放酶(pr邱lasma kallikrein)"在本文中 可互換使用并且指酶原形式的活性血漿激膚釋放酶，其也稱為前激膚釋放酶。
[0100] 術(shù)語"預(yù)防（preventing)"或"待預(yù)盼'受試者中的疾病指使受試者進(jìn)行藥學(xué)治療 例如施用藥物，使得疾病的至少一種癥狀被預(yù)防，即，在有害的病況(例如，宿主動物的疾病 或其他有害狀態(tài))的臨床表現(xiàn)之前施用，從而其保護(hù)宿主抵抗有害病況的發(fā)展。"預(yù)防"疾病 也可稱為"預(yù)防（pro地y 1 ax i S ?；?預(yù)防性治療"。
[0101] 如本文所使用，本文使用術(shù)語"基本上一致的"（或"基本上同源的"）來指運(yùn)樣的第 一氨基酸或核酸序列，其包含足夠數(shù)量的與第二氨基酸或核酸序列一致或等同的（例如，具 有類似的側(cè)鏈例如保守的氨基酸取代)氨基酸殘基或核巧酸，使得第一和第二氨基酸或核 酸序列具有類似的活性(或編碼具有類似活性的蛋白質(zhì)），例如結(jié)合活性，結(jié)合偏好或生物 活性。在抗體的情況下，相對于相同抗原，第二抗體具有相同的特異性并且具有至少50%、 至少25%或至少10%的親和力。
[0102] 與本文公開的序列類似或同源的（例如，至少約85%序列同一性)序列也是本申請 的一部分。在一些實施方式中，序列同一性可W是約85%、90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%、99% 或更高。
[0103] 另外，當(dāng)核酸區(qū)段在選擇性雜交條件(例如，高度嚴(yán)格雜交條件）下與鏈的補(bǔ)體雜 交時，存在本質(zhì)上的同一性。核酸可存在于整個細(xì)胞中、細(xì)胞溶解產(chǎn)物中或部分純化或基本 上純的形式中。
[0104] 生物聚合物的基序序列可包括運(yùn)樣的位置，其可W是變化的氨基酸。例如，在該背 景下，除非另外指出，符號"r 一般指任何氨基酸（例如，二十種天然氨基酸中的任意氨基 酸），例如指任何非半脫氨酸氨基酸。也可例如，使用括弧和斜線指示其他允許的氨基酸。例 如，"(A/W/F/N/Q)"意思是丙氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、天冬酷胺和谷氨酷胺在該具體位置是 被允許的。
[0105] 可通過任何現(xiàn)有技術(shù)已知的方法測定統(tǒng)計顯著性。示例性統(tǒng)計檢驗包括:學(xué)生T檢 驗、Mann Whitney U非參數(shù)檢驗和Wilcoxon非參數(shù)統(tǒng)計檢驗。一些統(tǒng)計學(xué)上顯著的關(guān)系的P 值小于0.05或0.02。指示兩個狀態(tài)之間可區(qū)分的定性或定量的區(qū)別的術(shù)語例如"誘導(dǎo)"、"抑 審r、"加強(qiáng)"、"升高"、"增加"、"降低"等可指兩個狀態(tài)之間的差異，例如統(tǒng)計學(xué)上顯著的差 異。
[0106] 如本文所使用，"樣品"指包括來自受試者的組織例如血液、血漿或蛋白質(zhì)的組合 物。樣品包括從受試者獲得的初始未處理的樣品W及隨后處理的例如部分純化或保藏形 式。示例性樣品包括血液、血漿、眼淚或粘液。在一些實施方式中，樣品是血液或血漿。
[0107] 相對于未治療的受試者，"治療有效的劑量統(tǒng)計學(xué)上顯著的程度或至少約 20%，更優(yōu)選至少約40%，甚至更優(yōu)選至少約60%，和仍更優(yōu)選至少約80%優(yōu)選地調(diào)節(jié)可測 量的參數(shù)例如血漿激膚釋放酶活性。可在預(yù)測人病癥和病況效力的動物模型系統(tǒng)中評估化 合物調(diào)節(jié)可測量參數(shù)例如疾病相關(guān)的參數(shù)的能力。可選地，可通過檢查化合物體外調(diào)節(jié)參 數(shù)的能力評估組合物的該性質(zhì)。
[0108] "治療"受試者中的疾病(或病況)或"治療"具有疾病的受試者指使受試者進(jìn)行藥 學(xué)治療例如施用藥物，使得治愈、緩解或減輕疾病的至少一種癥狀。
[0109] 術(shù)語"預(yù)防"受試者中的疾病指使受試者進(jìn)行藥學(xué)治療例如施用藥物，使得疾病的 至少一種癥狀被預(yù)防，即，在有害的病況(例如，宿主動物的疾病或其他有害的狀態(tài))的臨床 表現(xiàn)之前施用，從而其保護(hù)宿主抵抗發(fā)展有害病況。"預(yù)防"疾病也可稱為"預(yù)防"或"預(yù)防性 治療"。
[0110] "預(yù)防性有效量"指W劑量和在必要的時間周期內(nèi)實現(xiàn)期望的預(yù)防性結(jié)果的有效 的量。典型地，因為預(yù)防性劑量在疾病早期階段之前或在疾病早期階段用于受試者，所W預(yù) 防性有效量將小于治療有效量。
[0111] 標(biāo)題，包括字母或數(shù)字標(biāo)題僅僅為了易于理解和閱讀，并且在沒有相反指示的表 達(dá)下，不強(qiáng)調(diào)優(yōu)選的時間順序或等級。 巧112] 基于PKal和/或FXII的抑制測量C1-INH的測定方法和試劑盒
[0113] 本文提供的是方法和試劑盒，其用于基于C1-INH結(jié)合和抑制活性激膚釋放酶和/ 或活性FXII的能力測量功能性C1-INH的水平。運(yùn)樣的方法可如下完成:通過使含C1-INH的 樣品與本文所述的捕獲試劑接觸，和測量所述樣品中結(jié)合捕獲試劑的C1-INH的水平。在一 些實施方式中，樣品中總C1-INH的水平(例如C1-INH蛋白質(zhì)的水平，與C1-INH是否結(jié)合本文 所述的捕獲試劑無關(guān))也被測量。
[0114] 血漿蛋白酶C1抑制劑(C1-INH)通常在調(diào)節(jié)各種生理途徑，包括補(bǔ)體激活（例如C1 復(fù)合物中Clr和CIS蛋白酶的抑制）、血液凝結(jié)、纖維蛋白溶解和激膚產(chǎn)生中發(fā)揮重要的作 用。C1-INH結(jié)合和抑制因子Xlla、因子Xllf和激膚釋放酶。C1-INH是蛋白質(zhì)的絲氨酸蛋白酶 抑制蛋白超家族的成員，具有巧中結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)。C1-INH的C-末端絲氨酸蛋白酶抑制蛋白結(jié)構(gòu) 域提供蛋白質(zhì)的抑制活性。示例性人C1-INH的氨基酸序列顯示在下面（登錄號NP_ 000053.2)
[0115] 〉gi I 73858568 |ref I NP_000053.2 I 血漿蛋白酶Cl抑制劑前體[智人（Homo sapiens)]
[0116] MAS 化 TLL化LIXLLAGDRASSNPNATSSSSQD陽化 QDRGEGKVATTVISKMLFVEPILEVSSLPTTNSTTNSATK ITANTTDEPTTQPTTEPTTQPTIQPTQPTTQLPTDSPTQPTTGSFCPGPVTLCSDLE甜STEAVLGDALVDFSLKLY HAFSAMKKVETNMAFSPFSIAS化TQVLLGAGENTKTNLESILSYP邸FTCV冊ALKGFTTKGVTSVSQI即SPDLA I 畑 TFVNASRTLYSSSPRVLS 順 SDANLELINTWVAKNTNNKIS 化 LD 化 PSDT 化化 LNAI 化 SAKWKTT 抑 PKKT RMEPFHFKNSV 化 VPMMNSKKYPVAHFIDQTLKAKVG 化化 SHNLSLVILVPQNLKHRLEDMEQALSPSVFKAIMEK LEMSKFQPTLLTLPRIKVTTSQDMLSIMEKLEFFDFSYDLNLCGLT邸PDLQVSAMQHQTVLELTETGVEAAAASAI SVARTLLVFEVQQPFLFVLWDQQHKFPVFMGRVYDPRA(SEQ ID N0:1)
[0117] "活性"或"功能性"Cl-INH是指Cl-INH多膚或Cl-INH多膚片段，其保留類似的生物 學(xué)和/或免疫學(xué)活性，但不一定與天然產(chǎn)生的C1-INH，包括成熟形式，一致。在一些實施方式 中，活性或功能性C1-INH