，即高表達(dá)IL-12的非小細(xì)胞肺癌表現(xiàn)出遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的能力更強(qiáng)。
[0042] 此外，本發(fā)明人還通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，在降低了 IL-12的表達(dá)后，非小細(xì)胞肺癌的侵襲 能力也有顯著下降。這不僅提示了在非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移中，炎性反應(yīng)及炎癥因子 IL-12起到了重要的作用，更是可以將IL-12作為治療非小細(xì)胞肺癌，尤其是轉(zhuǎn)移性非小細(xì) 胞肺癌的治療靶點(diǎn)。
[0043] 檢測(cè)方法和試劑盒
[0044] 本發(fā)明涉及定量和定位檢測(cè)人IL-12蛋白水平或mRNA水平的診斷試驗(yàn)方法。這 些試驗(yàn)是本領(lǐng)域所熟知的。試驗(yàn)中所檢測(cè)的人IL-12蛋白水平，可以用于診斷非小細(xì)胞肺 癌轉(zhuǎn)移或遷移。
[0045] 一種檢測(cè)樣品中是否存在IL-12蛋白的方法是利用IL-12蛋白的特異性抗體進(jìn)行 檢測(cè)，它包括：將樣品與IL-12蛋白特異性抗體接觸；觀察是否形成抗體復(fù)合物，形成了抗 體復(fù)合物就表示樣品中存在IL-12蛋白。
[0046] IL-12蛋白或其多核苷酸可用于IL-12蛋白相關(guān)疾病的診斷和治療。本發(fā)明的 多核苷酸的一部分或全部可作為探針固定在微陣列或DNA芯片上，用于分析組織中基因的 差異表達(dá)分析和基因診斷?？笽L-12的抗體可以固定在蛋白質(zhì)芯片上，用于檢測(cè)樣品中的 IL-12蛋白。
[0047] 本發(fā)明還提供了一種檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌的試劑盒，它含有特異性擴(kuò)增IL-12的引 物對(duì)和/或IL-12特異性抗體以及標(biāo)簽或說(shuō)明書。
[0048] 其中，所述的標(biāo)簽或說(shuō)明書注明以下內(nèi)容：當(dāng)檢測(cè)對(duì)象的IL-12相對(duì)-肌動(dòng)蛋白的 mRNA表達(dá)量與癌旁組織的IL-12相對(duì)-肌動(dòng)蛋白的mRNA表達(dá)量之比>2,則提示該檢測(cè)對(duì) 象腫瘤轉(zhuǎn)移的幾率高于普通人群。
[0049] -種典型的本發(fā)明的試劑盒可用于檢測(cè)人非小細(xì)胞肺癌組織樣品或血液樣品。
[0050] 抑制劑
[0051] 利用本發(fā)明蛋白，通過(guò)各種常規(guī)篩選方法，可篩選出與IL-12蛋白發(fā)生相互作用 的物質(zhì)，尤其是抑制劑等。
[0052] 本發(fā)明IL-12的抑制劑（包括抗體以及其他抑制劑），當(dāng)在治療上進(jìn)行施用（給 藥）時(shí)，可抑制IL-12蛋白的表達(dá)和/或活性，進(jìn)而抑制非小細(xì)胞肺癌的轉(zhuǎn)移或遷移。通常， 可將這些物質(zhì)配制于無(wú)毒的、惰性的和藥學(xué)上可接受的水性載體介質(zhì)中，其中pH通常約為 5-8,較佳地pH約為6-8,盡管pH值可隨被配制物質(zhì)的性質(zhì)以及待治療的病癥而有所變化。 配制好的藥物組合物可以通過(guò)常規(guī)途徑進(jìn)行給藥，其中包括（但并不限于）：瘤內(nèi)、肌內(nèi)、腹 膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、或局部給藥。
[0053] 可用于本發(fā)明的抑制劑包括：IL_12的抗體、或L-12的活性抑制劑。典型地， 將IL-12基因作為制備預(yù)防或治療非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移遷移的藥物的靶點(diǎn)的技術(shù)方案，例 如.獲得能夠特異性抑制IL-12表達(dá)量和/或活性的多肽、單克隆抗體，從而現(xiàn)實(shí)抑制非小 細(xì)胞肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移或遷移的目的。
[0054] 本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，它含有安全有效量的本發(fā)明IL-12抑制劑以及 藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。這類載體包括（但并不限于）：鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、 甘油、乙醇、及其組合。藥物制劑應(yīng)與給藥方式相匹配。本發(fā)明的藥物組合物可以被制成針 劑形式，例如用生理鹽水或含有葡萄糖和其他輔劑的水溶液通過(guò)常規(guī)方法進(jìn)行制備。諸如 片劑和膠囊之類的藥物組合物，可通過(guò)常規(guī)方法進(jìn)行制備。藥物組合物如針劑、溶液、片劑 和膠囊宜在無(wú)菌條件下制造?；钚猿煞值慕o藥量是治療有效量，例如每天約1微克-10毫 克/千克體重。
[0055] 抗體
[0056] 本發(fā)明還包括對(duì)人IL-12蛋白具有特異性的多克隆抗體和單克隆抗體，尤其是單 克隆抗體。這里，"特異性"是指抗體能結(jié)合于人IL-12,較佳地，指那些能與人IL-12結(jié)合 但不識(shí)別和結(jié)合于其它非相關(guān)抗原分子的抗體。本發(fā)明的抗體可以通過(guò)本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員 已知的各種技術(shù)進(jìn)行制備。同樣，表達(dá)人IL-12因子或它的抗原的細(xì)胞也可以用來(lái)對(duì)動(dòng)物 致免疫而產(chǎn)生抗體。
[0057] 本發(fā)明不僅包括完整的單克隆或多克隆抗體，而且還包括具有免疫活性的抗體片 段，如Fab'或（Fab) 2片段；抗體重鏈；抗體輕鏈；遺傳工程改造的單鏈Fv分子；或嵌合抗 體。
[0058] 本發(fā)明的抗體包括可以抑制IL-12功能的抗體，也可以是不影響人IL-12功能的 抗體。每一類抗體都可以通過(guò)對(duì)人IL-12基因產(chǎn)物的片段或功能域致免疫而產(chǎn)生，而人 IL-12基因產(chǎn)物及其片段可以用重組方法產(chǎn)生或用多肽合成儀進(jìn)行合成。與非修飾形式的 IL-12基因產(chǎn)物結(jié)合的抗體，可以利用在原核細(xì)胞（如E. coli)中產(chǎn)生的基因產(chǎn)物來(lái)免疫動(dòng) 物而得到。與翻譯后修飾形式如糖基化或磷酸化IL-12蛋白或多肽結(jié)合的抗體，可以利用 在真核細(xì)胞如酵母或昆蟲細(xì)胞中產(chǎn)生的基因產(chǎn)物來(lái)免疫動(dòng)物而得到。
[0059] 可用于本發(fā)明的IL-12抗體可以是抗人IL-12蛋白抗體。本發(fā)明的抗人IL-12蛋 白抗體可用于免疫組織化學(xué)技術(shù)中，檢測(cè)活檢標(biāo)本中的人IL-12因子。
[0060] 藥物組合物和給藥方式
[0061] 本發(fā)明提供了含有活性成分（a) IL-12抑制劑；(b)藥學(xué)上可接受的載體；以及任 選的（c)化療劑的藥物組合物。
[0062] 在本發(fā)明的藥物組合物中，IL-12抑制劑IL-12抑制劑的含量沒(méi)有特別限制，通常 為 0· 01-95wt%，較佳地為 0· l-90wt%。
[0063] 本發(fā)明的藥物組合物可以是單方制劑，也可以是復(fù)方制劑。
[0064] 在復(fù)方制劑中，除了含有IL-12抑制劑之外，還可包含其他抗腫瘤化合物，例如化 療劑。代表性的化療劑包括（但并不限于）：烷化劑、抗代謝物、葉酸類似物、嘧啶類似物、嘌 呤類似物以及相關(guān)抑制劑、長(zhǎng)春花堿類、epipodopyvllotoxins、抗生素、L-天冬酞胺酶、拓 撲異構(gòu)酶抑制劑、干擾素、鉬配位復(fù)合物、大黃素取代的脲、甲基肼衍生物、腎上腺皮質(zhì)抑制 劑、腎上腺皮質(zhì)類固醇、孕激素、雌激素、抗雌激素、雄激素、抗雄激素以及促性腺激素-釋 放激素類似物。優(yōu)選的化療劑包括：5-氟尿嘧啶（5-FU)、甲酰四氫葉酸、伊立替康、奧沙利 鉬、卡培他濱、紫杉醇和多西紫衫醇。
[0065] 本發(fā)明的藥物組合物的劑型和制備方法沒(méi)有特別限制，可用本領(lǐng)域常規(guī)通用的制 法制成片劑、膠囊、顆粒劑、緩釋劑、注射劑等各種劑型。優(yōu)選的劑型是口服制劑（如片劑） 和注射劑。
[0066] 在本發(fā)明中，IL-12抑制劑或含IL-12抑制劑的藥物制劑可用于預(yù)防和治療非小 細(xì)胞肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、侵襲或遷移。
[0067] 在本發(fā)明中，給藥方式?jīng)]有特別限制，可以通過(guò)口服、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹腔內(nèi)或皮下 等途徑給藥。
[0068] 本發(fā)明制劑可以每天服用或給藥一次或兩次、或多次，或者以緩釋方式給藥。優(yōu)選 的方式是每天服藥一次，因?yàn)檫@樣便于病人堅(jiān)持，從而顯著提高病人服藥的順應(yīng)性。
[0069] 服用時(shí)，極大多數(shù)病例一般每天應(yīng)用的總劑量為每人lmg~200g，較佳地為 10mg ~100g。
[0070] 本發(fā)明的有益效果
[0071] 本發(fā)明發(fā)現(xiàn)IL-12在非小細(xì)胞肺癌（尤其是鱗癌）的轉(zhuǎn)移中起到重要的作用， IL-12高表達(dá)的非小細(xì)胞肺癌發(fā)生轉(zhuǎn)移的概率更高，而降低IL-12的表達(dá)則有助于減少非 小細(xì)胞癌的轉(zhuǎn)移。因此IL-12不僅可以作為預(yù)測(cè)或判斷非小細(xì)胞肺癌是否轉(zhuǎn)移的分子標(biāo)記 物，還可以作為治療非小細(xì)胞癌或其轉(zhuǎn)移的分子靶點(diǎn)。
[0072] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本 發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照 常規(guī)條件，例如Sambrook等人，分子克?。簩?shí)驗(yàn)室手冊(cè)（New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說(shuō)明，否 則百分比和份數(shù)是重量百分比和重量份數(shù)。
[0073] 通用方法
[0074] 1.蛋白提?。?br>[0075] (1)把組織剪切成細(xì)小的碎片。
[0076] (2)取適當(dāng)量的Western及IP細(xì)胞裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF和 cocktail,使終濃度為ImM。
[0077] (3)按照每20毫克組織加入100-200微升裂解液的比例加入裂解