中，濃縮至每lml含0.lg生藥量；濃縮后的膏劑加糊精調(diào)和，紫外線消毒 殺菌后裝瓶。
[0065] 具體實(shí)施例3:采摘新鮮蒲公英，洗凈晾曬，共4500g后，放入提取罐加熱提取2 次，每次1-2小時(shí)，去上清液，合并提取液，100-120目濾過(guò)，再經(jīng)截流分子量為5000-10000 的超濾柱超濾，超濾液減壓濃縮相對(duì)密度為80°C時(shí)1.06的浸膏，作為組分1，將所述其余原 料將茵陳ll〇〇g，溪黃草1200g，夏枯草1200g，柴胡1100g，白芍1200g，當(dāng)歸1100g，玉米須 1100g，白茅根1200g，虎杖1200g，木香1100g，五味子1200g，柏子仁1100g，金銀花1200g， 天花粉1200g，莪術(shù)1200g，墨旱蓮1100g，制首烏1100g，車前子1100g，梔子1100g，生地 ll〇〇g，穿心蓮ll〇〇g，放入5-10倍量水中，浸泡1-2小時(shí)，加熱提取2次，每次1-2小時(shí)，去 上清液，合并提取液，100-120目濾過(guò)，將2次提取液合并靜置，減壓回收乙醇，并濃縮至藥 液濃度為〇. 6g生藥/mL，抽濾后，濾液的相對(duì)密度約為20°C時(shí)1. 08 ;減壓至0. 03-0. 08MPa， 溫度保持在60-80°C，濃縮至相對(duì)密度為1. 20,溫度至60°C_70°C的浸膏，作為組分2。將組 分1組分2混合置入雙效真空濃縮器中，濃縮至90°C時(shí)相對(duì)密度為1. 05的濃縮液，置0~ 5°C低溫冷藏24小時(shí)；將冷藏液加0. 3%的助濾劑硅藻土，過(guò)濾，濾液再置入雙效真空濃縮 器中，濃縮至每lml含0.lg生藥量；濃縮后的膏劑加組分1的精油然后加蜂膠調(diào)和，紫外線 消毒殺菌后裝瓶。
[0066] 具體實(shí)施例4:采摘新鮮蒲公英，洗凈晾曬，共4500g后，泡入10倍量乙醇中，加 熱提取2次，每次1-2小時(shí)，去上清液，合并提取液，100-120目濾過(guò)，再經(jīng)截流分子量為 5000-10000的超濾柱超濾，超濾液減壓濃縮相對(duì)密度為80°C時(shí)1. 06的浸膏，加熱濃縮至 膏狀，靜置備用，成組分1。將茵陳ll〇〇g，溪黃草1200g，夏枯草1200g，柴胡1100g，白芍 1200g，當(dāng)歸1100g，玉米須1100g，白茅根1200g，虎杖1200g，木香1100g，五味子1200g，柏 子仁1100g，金銀花1200g，天花粉1200g，莪術(shù)1200g，墨旱蓮1100g，制首烏1100g，車前子 ll〇〇g，梔子ll〇〇g，生地ll〇〇g，穿心蓮ll〇〇g，將所述原料藥放入粉碎機(jī)粉碎后，將顆粒物 放入乙醇中加熱回流提取2次，每次1~2小時(shí)，將2次提取液合并靜置；將上述乙醇提取 過(guò)的藥渣加10倍量水加熱回流提取2次，每次1~2小時(shí)，將2次提取液合并靜置，將上述 兩種提取液合并，作為組分2 ;合并組分1組分2減壓濃縮相對(duì)密度為80°C時(shí)1. 36的濾液， 回收乙醇，調(diào)入蜂膠，紫外線殺菌后裝瓶。
[0067] 試驗(yàn)例1 :本發(fā)明急性毒性試驗(yàn)
[0068] -、試驗(yàn)材料：
[0069] 動(dòng)物：昆明種小鼠，體重21_24g，雌雄各半，山東大學(xué)生物試驗(yàn)室育種。藥物：本發(fā) 明口服液（按實(shí)施方法2制備）。
[0070]二、方法：
[0071] 1、LD50計(jì)算：采用改良寇氏法，將小鼠隨機(jī)分成5組，每組10只，雌雄各半，將 栓劑溶解，配成最大濃度，按小鼠最大允許容量給藥，所給劑量按生藥量依次為18,14. 4， 11. 5,9. 2, 7. 4 (g.kg-1)，在動(dòng)物禁食（不禁水）18小時(shí)后，一日內(nèi)分兩次給藥（間隔半小 時(shí)），每次〇. 5ml，觀察動(dòng)物死亡情況。
[0072] 2、最大耐受劑量測(cè)定（MTD值）：取小鼠20只，雌雄各10只。將栓劑加蒸餾水溶解， 配成最高濃度，按動(dòng)物的最大耐受量，以注射灌喂器能抽動(dòng)為準(zhǔn)。在動(dòng)物禁食（不禁水）18 小時(shí)后，一日內(nèi)分兩次給藥（間隔半小時(shí)），每次〇. 5ml(每ml含生藥0. 36g)，總藥量為18g生藥/kg.d，相當(dāng)臨床成人50Kg體重用量的300倍。給藥后連續(xù)觀察7天。
[0073] 三、試驗(yàn)結(jié)果：
[0074]在LD50計(jì)算中當(dāng)用最大允許濃度和最大允許容量給予小鼠時(shí)（18g/Kg.d)，未見(jiàn) 小鼠死亡，即未測(cè)出LD50,只可求最大耐受劑量，在7天觀察期中，動(dòng)物其食欲、活動(dòng)、毛色、 精神狀態(tài)等皆正常，發(fā)育正常，未見(jiàn)有死亡。即選用相當(dāng)于臨床劑量的300倍藥量，并無(wú)不 良反應(yīng)發(fā)生，表明急性毒性極小，MTD> 18g/Kg.d。
[0075] 試驗(yàn)例2 :本發(fā)明急性皮膚刺激試驗(yàn)報(bào)告
[0076] 1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簷z測(cè)本發(fā)明對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮膚的刺激/腐蝕作用和強(qiáng)度
[0077] 2、材料和方法：
[0078] 2. 1?受試物：本發(fā)明口服液（按實(shí)施例方法2制得）
[0079] 2. 2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：壹級(jí)大耳白種家兔，10只，雌性，體重2. 1-2. 3kg;由青島大學(xué)醫(yī)學(xué) 院生物系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；
[0080] 2. 3?試驗(yàn)方法：
[0081] 選用皮膚完好的健康家兔10只，于試驗(yàn)前24小時(shí)將其背部脊柱兩側(cè)被毛剪掉，去 毛面積左、右各約4cmX4cm。試驗(yàn)時(shí)取受試物0. 2ml涂于2. 5cmX2. 5cm的二層紗布上，敷 貼于一側(cè)去毛皮膚表面，油紙覆蓋，膠布固定。另一側(cè)皮膚作為空白對(duì)照。封閉4小時(shí)后， 去除覆蓋物，并用溫水清洗去殘留受試物，于去除受試物后的1、24和48小時(shí)觀察涂抹部位 皮膚反應(yīng)，并評(píng)分。
[0082] 3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮膚未出現(xiàn)任何紅斑，紅腫，發(fā)炎現(xiàn)象。
[0083] 4、小結(jié)：根據(jù)《消毒技術(shù)規(guī)范》（1999)中皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)判定，本發(fā)明對(duì)動(dòng) 物皮膚刺激強(qiáng)度屬無(wú)刺激性。
[0084] 實(shí)施例3 :長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)資料
[0085] 1、實(shí)驗(yàn)方法
[0086] 將豚鼠隨機(jī)份成4組，每組15只。在豚鼠背部脊柱兩側(cè)將脫毛劑均勻涂上，使其 脫毛范圍約40平方厘米。洗凈脫毛劑，觀察24小時(shí)后每組豚鼠分別涂本發(fā)明口服液溶液 0. 2、0. 4和0. 8ml，分別含生藥92、184和368mg，另一組涂溶媒0. 8ml每日二次，連續(xù)30天， 觀察豚鼠的一般情況，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死動(dòng)物進(jìn)行血液學(xué)、血液生化及病理學(xué)檢查。
[0087]2、結(jié)果
[0088] 上述三組用藥豚鼠軀干去毛區(qū)，未見(jiàn)局部皮膚有水腫、充血、紅斑、出血點(diǎn)及潰瘍。 用藥組與對(duì)照組動(dòng)物毛發(fā)色澤、攝食、四肢活動(dòng)等對(duì)照組無(wú)明顯差異，血液生化檢查，用藥 組與對(duì)照組均在正常范圍。病理組織學(xué)檢查，實(shí)驗(yàn)各組心、肝、腎及局部皮膚均未見(jiàn)明顯病 變。提示，本發(fā)明中藥口服液長(zhǎng)期用藥對(duì)局部皮膚及全身重要臟器均未見(jiàn)明顯的毒性作用。
[0089] 試驗(yàn)結(jié)果表明：本發(fā)明口服液實(shí)驗(yàn)安全。該藥對(duì)乙型鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大 腸桿菌的最小抑制濃度為1:150,淋球菌為1:150,白色念珠菌為1:300,對(duì)1:20稀 釋度時(shí)的殺滅時(shí)間為5分鐘，1:50時(shí)為10分鐘，1:100時(shí)為20分鐘，1:200時(shí)為40 分鐘，1:400時(shí)為8小時(shí)。
[0090] 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)：
[0091]蒲公英對(duì)正常小鼠由四氯化碳引起的肝損傷有明顯保護(hù)作用，表現(xiàn)為SG0T顯著 降低，使肝體比降低（大劑量）。對(duì)正常大鼠有顯著的利膽作用，膽汁流量增加持續(xù)2h。熊 去氧膽酸流量增加持續(xù)1小時(shí)。膽汁中膽固醇、膽紅素給藥前和給藥后組間比較未見(jiàn)顯著 差異性。為此我們進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。
[0092] 1、材料與方法
[0093] 藥物：本發(fā)明蒲公英提醇沉液的制備：取一定量本發(fā)明原料藥，水煎兩次，水浴上 濃縮至一定體積后加95乙醇沉淀雜質(zhì)，過(guò)液，濾液回收乙醇。配成100%濃度。
[0094] 對(duì)照組為白云山消炎利膽片，國(guó)藥準(zhǔn)字Z44022243。熊去氧膽酸為日本三菱化成生 產(chǎn)。
[0095] 動(dòng)物ICR小鼠，SD大鼠均由本院動(dòng)物研究室提供。
[0096] 1. 1對(duì)四氯化碳引起的小鼠肝損傷的保護(hù)作用：雄性小鼠78只，體重18_23g，按體 重隨機(jī)分層分成六組，每組13只。本發(fā)明3個(gè)劑量組2. 5g/kg、5.Og/kg、10.Og/kg，陽(yáng)性對(duì) 照藥白云山消炎利膽片l〇g/kg，模型組，水對(duì)照組每天灌胃給藥一次，連續(xù)6d，于第六天給 藥后lh除水對(duì)照組外其余各組均皮下注射0. 15的四氯化碳菜油5ml/kg。16h后摘眼球取 血用北京化工廠產(chǎn)的試劑盒測(cè)定血清SGPT、SG0T。解剖出肝臟稱重，根據(jù)處死時(shí)體重計(jì)算 每只小鼠的肝體比、數(shù)據(jù)以均值士標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間進(jìn)行t檢驗(yàn)。
[0097] 1. 2對(duì)正常大鼠膽汁流量的影響1. 2. 1
[0098] 膽汁流量的測(cè)定：取大鼠60只，雄性，體重250~350g，稱重隨機(jī)分成五組，每組 12只，實(shí)驗(yàn)前禁食12h，不禁水。實(shí)驗(yàn)以10 %烏拉坦1.Og/kg腹腔注射麻醉，仰位固定于手術(shù) 臺(tái)，沿腹正中線切開(kāi)腹壁，找出十二指腸，在降部腸系膜中找到白色有韌性的膽管，在其下 穿二根絲線，結(jié)扎乳頭部，向肝臟方向作"V"形切口，插入硬質(zhì)塑料管，結(jié)扎固定，即可見(jiàn)有 淡黃綠色膽汗流出，試管收集膽汁，術(shù)后以鹽水紗布覆蓋腹腔，待穩(wěn)定lh后，先收集30min 的膽汁，作為給藥前的基礎(chǔ)值，然后分組給藥（經(jīng)十二指腸）。本發(fā)明3個(gè)劑量組2. 5g/kg、 5.Og/kg、10.Og/kg，水對(duì)照組，陽(yáng)性藥熊去氧膽酸0. 5g/kg。給藥后每隔30min收集測(cè)量1 次膽汁。共4h。
[0099] 1. 2. 2膽汁成分的測(cè)定：將給藥前，給藥后4h收集的膽汁測(cè)定膽紅素（伊利康生 物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，咖啡因法）。膽固醇含量測(cè)定用東歐生物工程公司生產(chǎn)的試劑盒，酶 法測(cè)定。
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