大規(guī)模生產(chǎn)果實(shí)細(xì)胞以及用此類細(xì)胞治療疾病的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及大規(guī)模生產(chǎn)果實(shí)細(xì)胞的方法。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案涉及大規(guī)模體外 生產(chǎn)果實(shí)細(xì)胞的方法，其包括初級(jí)和次生代謝物。本發(fā)明進(jìn)一步涉及通過(guò)施用果實(shí)細(xì)胞的 細(xì)胞系愈傷組織培養(yǎng)物治療、預(yù)防、緩解或減輕與代謝綜合征或代謝疾病相關(guān)聯(lián)的一或多 種病癥或并發(fā)癥的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 大規(guī)模方法為本領(lǐng)域已知且為工業(yè)化生產(chǎn)各種材料所必需。由于大規(guī)模方法不能 通過(guò)與小規(guī)模方法相同的方式進(jìn)行，因此即使存在小規(guī)模生產(chǎn)方法，也必須設(shè)計(jì)大規(guī)模生 產(chǎn)材料的特定方法。
[0003] 營(yíng)養(yǎng)保健品有時(shí)是使用合成方法制備的，提供希望的活性成分，如多酚，其是在果 實(shí)細(xì)胞中天然發(fā)現(xiàn)。然而，使用合成方法未與活性成分一起提供有時(shí)有助于配制物的效力 的天然成分。
[0004] 其它類型的營(yíng)養(yǎng)保健品是從天然植物中制備的；然而，所有已知的從植物中制備 營(yíng)養(yǎng)保健品的大規(guī)模生產(chǎn)方法包括從制備的植物細(xì)胞中提取，以獲得希望的活性成分。然 而，當(dāng)提取例如含有多酚的植物時(shí)，在提取物中，多酚（包括白藜蘆醇）的量可能非常高，因 此，最終產(chǎn)物也許是苦味的。僅一部分植物可以被成功提取，因?yàn)閮H其含有希望量的活性成 分。
[0005] 制備果實(shí)細(xì)胞的小規(guī)模方法為本領(lǐng)域已知；然而，大規(guī)模方法更難以設(shè)計(jì)，因?yàn)槠?趨于擴(kuò)大初級(jí)代謝物的生產(chǎn)，同時(shí)使次生代謝物的產(chǎn)生最小化。由于活性成分如多酚是次 生代謝物，因此其大規(guī)模生產(chǎn)是復(fù)雜的。
[0006]因此，本領(lǐng)域需要從天然物料制備果實(shí)細(xì)胞的大規(guī)模方法，其包括生產(chǎn)果實(shí)細(xì)胞 的初級(jí)代謝產(chǎn)物和次生代謝產(chǎn)物。
[0007] 代謝異常與肥胖癥、胰島素抗性、葡萄糖耐量下降、II型糖尿病（DMII)、血脂異 常、脂肪肝、脂肪性肝炎、脂肪性變相關(guān)。這些異常使中風(fēng)、心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)上升。代謝綜 合征的病因?qū)W被認(rèn)為是多因素的，涉及遺傳學(xué)影響和環(huán)境影響。
[0008] 動(dòng)脈粥樣硬化是血管床疾病，是由血管壁中形成脂肪沉積物使得血管內(nèi)血流通道 狹窄引起的。這一過(guò)程可能影響所有的動(dòng)脈，尤其是冠狀動(dòng)脈，并且可能導(dǎo)致最終的冠狀動(dòng) 脈堵塞，結(jié)果是心臟病發(fā)作，其是美國(guó)早逝的主要原因。
[0009] 脂肪肝疾病涵蓋一系列的臨床病癥，其組織學(xué)特征主要在于肝的大泡性脂肪變 性。脂肪肝疾病的組織病理學(xué)譜的范圍是從簡(jiǎn)單的脂肪肝（脂肪變性）到脂肪性肝炎一一 脂肪肝的一種，其具有不同程度的纖維化。脂肪性肝炎可以是漸進(jìn)性的，并且可以導(dǎo)致肝硬 化、肝衰竭以及肝細(xì)胞性肝癌，并且可能是隱源性肝硬化的主要原因。脂肪肝疾病的通常的 風(fēng)險(xiǎn)因素是肥胖癥、II型糖尿病和高脂血癥。
[0010] II型糖尿病是最普通的慢性人疾病，在美國(guó)影響成年人群的8%以及65歲以上年 齡的人口的19%。
[0011] 代謝綜合征也稱為"死亡四重奏"或"綜合征X"或"胰島素抗性綜合征"，是一系列 各種疾病的風(fēng)險(xiǎn)因素，所述疾病例如心血管疾病、中風(fēng)和II型糖尿?。匆葝u素抗性）、高 胰島素血癥、腹部肥胖癥（由腹部?jī)?nèi)脂肪積聚引起）、升高的血清脂質(zhì)以及高血壓。25%在 美國(guó)生活的成年人被診斷為患有代謝綜合征。有人認(rèn)為代謝綜合征的病理生理學(xué)與胰島素 抗性相關(guān)。風(fēng)險(xiǎn)因素包括如下：升高的腰圍（男性彡l〇2cm，女性彡88cm)、升高的甘油三酯 (>150mg/dL)、降低的高密度脂蛋白（HDL)膽固醇（男性<40mg/dL，女性<50mg/dL)、升高的 血壓（>130/85mm Hg)以及升高的空腹血糖（>100mg/dL)。其它風(fēng)險(xiǎn)因素也可能促成代謝綜 合征。另外，在不同人群中所述風(fēng)險(xiǎn)因素可能改變。
[0012] 空腹血糖異常（IFG)是與胰島素抗性相關(guān)聯(lián)的血糖代謝障礙的糖尿病前狀態(tài)，定 義為空腹血糖水平101_126mg/dL。
[0013] 糖耐量異常（IGT)是與胰島素抗性相關(guān)聯(lián)的血糖代謝障礙的糖尿病前狀態(tài)，其定 義與IFG的定義相似，或者定義為口服高葡萄糖飲食，通常是75克葡萄糖，之后兩小時(shí)血糖 水平 141-199mg/dL。
[0014] 許多代謝疾病的特征在于甘油三酯積聚和胰島素抗性。
[0015] 各種身體組織如肌肉、肝和胰腺組織中的甘油三酯積聚被認(rèn)為是導(dǎo)致代謝疾病 產(chǎn)生的器官特異性胰島素抗性的重要因素。此外，組織中脂滴（其與術(shù)語(yǔ)脂肪粒（lipid body)相同）的積聚在胰島素抗性的產(chǎn)生中早期出現(xiàn)，并且與其嚴(yán)重性相關(guān)。
[0016] 持續(xù)性高血壓是一些疾病和失調(diào)的風(fēng)險(xiǎn)因素之一。高血壓是缺血性中風(fēng)，西方世 界的第三大致死原因的單一最重要的可修正的風(fēng)險(xiǎn)因素。在血壓（BP)讀數(shù)高于120/80毫 米萊柱（mm Hg)，中風(fēng)的風(fēng)險(xiǎn)開(kāi)始增加。多數(shù)對(duì)高血壓的判斷表明，當(dāng)高血壓定義為收縮血 壓（SBP)彡160mm Hg和/或舒張血壓（DBP)彡95mm Hg時(shí)，中風(fēng)的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)為大約4〇
[0017] 基于社區(qū)的研究證明在多達(dá)50-60 %的患者中高血壓促成心臟衰竭的產(chǎn)生。 在高血壓患者中，心臟衰竭的風(fēng)險(xiǎn)上升，男性上升2倍，女性上升3倍。根據(jù)弗雷明漢 (Framingham)研究，高血壓占心臟衰竭案例的約四分之一。
[0018] 高血壓不僅是確定的心血管風(fēng)險(xiǎn)因素，還增加動(dòng)脈粥樣硬化的風(fēng)險(xiǎn)。臨床試驗(yàn)顯 示，在DBP最高的五分之一中，即使具有額外的高膽固醇和吸煙的風(fēng)險(xiǎn)，高血壓仍然顯著促 成動(dòng)脈粥樣硬化的風(fēng)險(xiǎn)。
[0019] 據(jù)報(bào)道，在85%-95%的患有慢性腎?。–KD)的患者中出現(xiàn)高血壓。未控制的高 血壓是產(chǎn)生CKD的風(fēng)險(xiǎn)因素，并且是美國(guó)末期腎臟疾病的第二主要原因。
[0020] 過(guò)去，多數(shù)注意力關(guān)注于DBP ;但是現(xiàn)在認(rèn)識(shí)到高SBP和高脈壓差（SBP和DBP之 間的數(shù)值差異）也是風(fēng)險(xiǎn)因素。重要的是，有人證明了，將SBP和DBP組合評(píng)估相較于評(píng)估 2個(gè)單獨(dú)因素改進(jìn)了心血管風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)。盡管如此，DBP仍然是重要的心血管風(fēng)險(xiǎn)因素。在 Franklin等的研究中，單獨(dú)的舒張高血壓是心血管風(fēng)險(xiǎn)因素。患有單獨(dú)的舒張高血壓的對(duì) 象占高血壓人群的14%，且發(fā)現(xiàn)其心血管風(fēng)險(xiǎn)是具有正常BP的對(duì)象的約兩倍（Schillaci 等，2009)。此外，中國(guó)全國(guó)范圍的數(shù)據(jù)庫(kù)確定了，單獨(dú)的舒張高血壓是心血管疾病的獨(dú)立的 風(fēng)險(xiǎn)因素。
[0021] 脂質(zhì)過(guò)氧化是指細(xì)胞損害中的過(guò)程中的脂質(zhì)氧化變質(zhì)。脂質(zhì)過(guò)氧化可能是一種若 干風(fēng)險(xiǎn)因素可以通過(guò)其促進(jìn)心血管疾病的機(jī)制。
[0022] 發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)過(guò)氧化與心血管風(fēng)險(xiǎn)因素，如年齡、甘油三酯、吸煙、膽固醇高密度脂蛋 白（HDL)和體重指數(shù)（BMI)，高度相關(guān)。
[0023] 懷孕、卵巢切除和絕經(jīng)后的女性顯示比未懷孕、卵巢未切除和絕經(jīng)前的女性更高 的脂質(zhì)過(guò)氧化水平，并且這些狀態(tài)過(guò)程中的高脂質(zhì)過(guò)氧化水平是其上升的CVD風(fēng)險(xiǎn)的原 因，至少是部分原因。
[0024] 從患有原發(fā)性高血壓的患者費(fèi)力的低密度脂蛋白（LDL)顯示上升的氧化傾向。因 此，氧化的LDL (Ox-LDL)可能傾向于加速的動(dòng)脈粥樣硬化，并且脂質(zhì)過(guò)氧化的LDL的傾向可 能是與LDL血漿濃度本身同樣重要的動(dòng)脈粥樣硬化的風(fēng)險(xiǎn)因素。
[0025] 流量介導(dǎo)的擴(kuò)張（FMD)，內(nèi)皮功能紊亂的表現(xiàn)，可以作為若干疾病的指標(biāo)。FMD對(duì) 于冠狀動(dòng)脈疾病有高度預(yù)測(cè)性，F(xiàn)MD每下降百分之一的優(yōu)勢(shì)比為1. 32 (p = 0. 001)。不僅在 動(dòng)脈粥樣硬化中，F(xiàn)MD還在系統(tǒng)性硬化中與疾病進(jìn)展高度相關(guān)。FMD值與疾病持續(xù)時(shí)間負(fù)相 關(guān)。
[0026] 在絕經(jīng)后的女性中，低FMD值與產(chǎn)生高血壓的想到風(fēng)險(xiǎn)的升高相關(guān)。
[0027] FMD與缺血性晚期慢性心臟衰竭（ACHF)患者中升高的死亡風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)（Shechter 等，2009)。此外，無(wú)論對(duì)心臟衰竭（HF)和動(dòng)脈粥樣硬化風(fēng)險(xiǎn)因素的治療情況如何，持續(xù)性 低FMD均是慢性缺血性HF患者中的心臟事件的預(yù)測(cè)指標(biāo)。
[0028] 中風(fēng)患者具有比非中風(fēng)患者顯著更低的流量介導(dǎo)的擴(kuò)張（FMD)值。經(jīng)調(diào)整年齡、 性別和存在卵圓孔未閉（PF0)之后，F(xiàn)DM是隱源性中風(fēng)的獨(dú)立的預(yù)測(cè)指標(biāo)。
[0029] 最后，在患有雜合的家族性高膽固醇血癥（heFH)的兒童中，所述兒童易感于提早 的動(dòng)脈粥樣硬化，在結(jié)構(gòu)性動(dòng)脈粥樣硬化性變化出現(xiàn)之前檢測(cè)到降低的FMD。
[0030] 已知源自含有多酚的果實(shí)的營(yíng)養(yǎng)保健品的有益作用。紅葡萄酒作為這些調(diào)節(jié)性 成分的來(lái)源的用途因?yàn)槠漭^高的乙醇含量和糖分而受限。此外，已經(jīng)顯示葡萄酒和釀酒葡 萄的治療性作用依賴于種類、位置、年份（年度氣候）、加工等，及因此依賴紅葡萄酒、葡萄 或葡萄種子作為這些調(diào)節(jié)性化合物的來(lái)源導(dǎo)致無(wú)法進(jìn)行原材料的均一的或一致的供應(yīng)。此 外，果實(shí)通常被殘余的殺真菌劑、病原體、殺蟲(chóng)劑和污染物等污染。
[0031] 此外，來(lái)自紅葡萄酒和果實(shí)提取物的多酚的胃腸道輸送的潛在益處受限于其靶組 織和細(xì)胞的生物利用度。由于其通過(guò)腸道時(shí)的生物利用度的明顯差異，在指定食物中某一 多酚的豐度與其作為體內(nèi)活性化合物的濃度之間無(wú)相關(guān)性可描繪。例如小腸中類黃酮的吸 收范圍為劑量的0-60%范圍，消除半衰期為2-48小時(shí)。大多數(shù)多酚在腸道中經(jīng)歷廣泛代 謝，主要以甲基葡糖苷酸或葡糖苷酸硫酸鹽形式存在于血清和尿液中。在已知的多酚中， 在紅葡萄、紅葡萄酒及其它食物如不同種類的漿果和花生中發(fā)現(xiàn)的植物抗毒素白藜蘆醇 (反式-3, 5, 4'-三羥基芪）（RES)已經(jīng)引起眾多關(guān)注。確信其是造成"法國(guó)悖論（French paradox) "的原因，這是與盡管高脂飲食但心血管疾病的低發(fā)生率相關(guān)的一個(gè)現(xiàn)象，是適度 引用紅葡萄酒的結(jié)果。然而，RES的物理化學(xué)性質(zhì)如低水溶性及其高肝臟攝取有損于其生物 利用度。此外，由于快速和廣泛代謝隨之形成各種代謝物，RES的口服生物利用度非常低。
[0032] 關(guān)于RES活性和作用的研究主要依賴于白藜蘆醇的三個(gè)來(lái)源，即純合成的RES，天 然植物來(lái)源的RES (例如Poligonum cupcidatum提取物）產(chǎn)物，或者較低程度的完整紅葡 萄或其產(chǎn)物（紅葡萄酒、葡萄汁、葡萄提取物）。紅葡萄細(xì)胞（RGC;Fruitura Bioscience Ltd, Israel)是一種天然的專利保護(hù)的培養(yǎng)細(xì)胞配制物，源自葡萄（Vitis vinifera L.)栽 培品種的果實(shí)，包含多酚的全部基質(zhì)，包括白藜蘆醇及天然存在于紅葡萄中的其它成分。
[0033]因此，需要可以在大規(guī)模生產(chǎn)方法中制備的天然（植物）組合物，其中活性成分的 量是一致及復(fù)現(xiàn)的（例如克隆制品），是高生物利用度的，及易于施用以治療各種疾病和失 調(diào)，包括與代謝失調(diào)或代謝疾病相關(guān)的病癥或并發(fā)癥。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0034] 在本發(fā)明的實(shí)施方案中，提供了治療、減輕、緩解或預(yù)防代謝綜合征或代謝疾病的 方法，所述方法包括施用包含體外生長(zhǎng)的果實(shí)細(xì)胞的細(xì)胞系愈傷組織培養(yǎng)物的組合物。
[0035] 根據(jù)一些實(shí)施方案，本發(fā)明提供用于治療對(duì)象中的選自如下的一或多種病癥的方 法：冠心?。▌?dòng)脈粥樣硬化）、血壓、缺血性疾病、心臟衰竭、動(dòng)脈粥樣硬化、慢性腎?。–KD) 和腎臟疾病、系統(tǒng)性硬化、慢性心臟衰竭、高血壓、糖尿病、高脂血癥、糖耐量異常、肝性脂肪 變性、高血糖癥、糖尿病前狀態(tài)、新發(fā)糖尿病、胰島素抗性、糖尿病、空腹血糖異常、高甘油三 酯血癥、抗炎癥（脂聯(lián)素）、高膽固醇血癥、低HDL水平、脂肪肝和肥胖癥，所述方法包括給所 述對(duì)象施用包含體外生長(zhǎng)的果實(shí)細(xì)胞的細(xì)胞系愈傷組織培養(yǎng)物的組合物的步驟。在一些實(shí) 施方案中，所述對(duì)象被診斷為患有代謝綜合征。
[0036] 根據(jù)一些實(shí)施方案，果實(shí)細(xì)胞的細(xì)胞系愈傷組織培養(yǎng)物根據(jù)大規(guī)模方法制備，所 述方法包括：將果實(shí)細(xì)胞在瓶中生長(zhǎng)；將果實(shí)細(xì)胞從瓶接種到第一生物反應(yīng)器中；將果實(shí) 細(xì)胞從第一生物反應(yīng)器接種到另一個(gè)生物反應(yīng)器中，其中另一個(gè)生物反應(yīng)器是最后的生物 反應(yīng)器或者是中間生物反應(yīng)器，及其中第一生物反應(yīng)器和另一生物反應(yīng)器至少一個(gè)是一次 性的；及從最后的生物反應(yīng)器中收獲果實(shí)細(xì)胞；其中將從最后的生物反應(yīng)器中收獲的果實(shí) 細(xì)胞干燥。
[0037] 根據(jù)一些實(shí)施方案，使用補(bǔ)充有（enrichedwith)鎂、磷酸鹽或硝酸鹽或者其組合 的GamborgB5培養(yǎng)基。
[0038] 在一些實(shí)施方案中，一次性生物反應(yīng)器是由一或多層聚乙烯制成的。在一些實(shí)施 方案中，一次性生物反應(yīng)器是由聚乙烯內(nèi)層和外層及中間尼龍層制成的。
[0039] 在一些實(shí)施方案中，提供用于治療、減輕、緩解或預(yù)防代謝綜合征或代謝疾病的方 法，所述方法包括施用包含果實(shí)細(xì)胞的細(xì)胞系愈傷組織培養(yǎng)物的組合物，所述果實(shí)細(xì)胞是 根據(jù)包括如下步驟的方法制備的：使果實(shí)細(xì)胞在瓶中生長(zhǎng)；將果實(shí)細(xì)胞從所述瓶接種到第 一生物反應(yīng)器中；將果實(shí)細(xì)胞從所述第一生物反應(yīng)器接種到另一個(gè)生物反應(yīng)器中，其中所 述另一生物反應(yīng)器是最后的生物反應(yīng)器或者是中間生物反應(yīng)器，且其中所述第一生物反應(yīng) 器和另一個(gè)生物反應(yīng)器的至少一個(gè)是一次性的；及從最后的生物反應(yīng)器收獲果實(shí)細(xì)胞；其 中使從最后的生物反應(yīng)器收獲的果實(shí)細(xì)胞干燥。
[0040] 在一些實(shí)施方案中，提供用于治療、減輕、緩解或預(yù)防炎癥的方法，所述方法包括 施用包含果實(shí)細(xì)胞的細(xì)胞系愈傷組織培養(yǎng)物的組合物，所述果實(shí)細(xì)胞是根據(jù)包括如下步驟 的方法制備的：使果實(shí)細(xì)胞在瓶中生長(zhǎng)；將果實(shí)細(xì)胞從所述瓶接種到第一生物反應(yīng)器中； 將果實(shí)細(xì)胞從所述第一生物反應(yīng)器接種到另一個(gè)生物反應(yīng)器中，其中所述另一生物反應(yīng)器 是最后的生物反應(yīng)器或者是中間生物反應(yīng)器，且其中所述第一生物反應(yīng)器和另一個(gè)生物反 應(yīng)器的至少一個(gè)是一次性的；及從最后的生物反應(yīng)器收獲果實(shí)細(xì)胞；其中使從最后的生物 反應(yīng)器收獲的果實(shí)細(xì)胞干燥。
[0041] 在一些實(shí)施方案中，所述組合物可以每天施用一次。
[0042] 在一些實(shí)施方案中，提供粉末形式的組合物，其包含在大規(guī)模生產(chǎn)方法中體外生 長(zhǎng)的葡萄漿果細(xì)胞的細(xì)胞系愈傷組織培養(yǎng)物，其中葡萄漿果細(xì)胞的細(xì)胞系愈傷組織培養(yǎng)物 源自葡萄漿果橫切片、葡萄漿果皮、葡萄漿果肉、葡萄種子、有種子或無(wú)種子栽培種的葡萄 胚或者葡萄種皮中的一或多種；其中葡萄漿果細(xì)胞的細(xì)胞系愈傷組織培養(yǎng)物包含白藜蘆醇 的量為至少l〇〇〇mg/kg粉末。
[0043] 在一些實(shí)施方案中，所述組合物的特征在于在施用一次所述組合物后血漿中白藜 蘆醇的濃度的兩個(gè)峰。
[0044] 在一些實(shí)施方案中，提供降低在靜止?fàn)顟B(tài)和/或在運(yùn)動(dòng)中的舒張血壓和收縮血壓 和/或靜息心率的方法，包括給所述對(duì)象施用包含體外生長(zhǎng)的果實(shí)細(xì)胞的細(xì)胞系愈傷組織 培養(yǎng)物的組合物的步驟。
【附圖說(shuō)明】
[0045]本發(fā)明附圖（僅作為示例）加以描述。具體關(guān)于附圖的詳細(xì)描述，需要強(qiáng)調(diào)的是 圖中顯示的事項(xiàng)只是為了舉例及論述本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案，及是為了提供確信最有效和 易于理解的本發(fā)明的原理描述和觀點(diǎn)而呈現(xiàn)。在這方面，未嘗試顯示比基本理解本發(fā)明必 需的更詳細(xì)的本發(fā)明的結(jié)構(gòu)詳情，結(jié)合附圖的描述使得本領(lǐng)域技術(shù)人員了解可以實(shí)施的本 發(fā)明的一些形式。
[0046] 圖1證實(shí)在角叉菜膠注射之前用RGC制備物、吲哚美辛和水（作為對(duì)照）處理的 大鼠中足水腫的測(cè)量（體積％ )，。使用重復(fù)測(cè)量的雙向AN0VA，然后用Bonferroni事后檢 定進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。對(duì)照組（1M)與陽(yáng)性對(duì)照組（2M)的對(duì)比在2和4小時(shí)顯示統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著 差異（p〈0. 001)。對(duì)照組與RGC-制備物（3M)組的對(duì)比在2和4小時(shí)顯示統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異 (p<0. 001) 〇
[0047] 圖2顯示在研究期間通過(guò)熱板（Hot Plate)測(cè)量的每組的痛覺(jué)過(guò)敏作用分布（結(jié) 果以與時(shí)間成函數(shù)的"熱板延時(shí)，自基線％ "表示）。使用重復(fù)測(cè)量的雙向AN0VA，然后用 Bonferroni事后檢定進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。對(duì)照組（1M)與陽(yáng)性對(duì)照組（2M)的對(duì)比在2和4小 時(shí)顯示統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異（P〈〇. 05-0. 01)。對(duì)照組與RGC(3M)對(duì)比在4小時(shí)顯示統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著 差異（P〈〇. 01)。
[0048] 圖3顯示通過(guò)熱板測(cè)量的每組的痛覺(jué)過(guò)敏作用分布（結(jié)果以與時(shí)間成函數(shù)的"熱 板延時(shí)s，基線-實(shí)際時(shí)間"表示）。使用重復(fù)測(cè)量的雙向AN0VA，然后用Bonferroni事后 檢定進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。對(duì)照組（1M)與陽(yáng)性對(duì)照組（2M)的對(duì)比在2和4小時(shí)顯示統(tǒng)計(jì)學(xué)顯 著差異（P〈〇. 05-0. 01)。對(duì)照組與RGC-處理的小鼠（3M)對(duì)比在4小時(shí)顯示統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差 異（p〈0. 01) 〇
[0049] 圖4顯示4個(gè)不同批次的在補(bǔ)充的Gamborg B5培養(yǎng)基的大規(guī)模一次性生物反應(yīng) 器中生長(zhǎng)的紅葡萄細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線。在20直至40天，細(xì)胞經(jīng)歷指數(shù)生長(zhǎng)，產(chǎn)生500gr/l鮮 生物量。這些細(xì)胞繼續(xù)生長(zhǎng)并且可以達(dá)到更高的生物量。
[0050] 圖5顯示高果糖飲食飼喂的大鼠中的收縮血壓（BP)vs時(shí)間，補(bǔ)充或不補(bǔ)充不同量 的紅葡萄細(xì)胞（RGC)，在基線以及飲食3周后和5周后。
[0051] 圖6A是關(guān)于RGC中的白藜蘆醇的LC-MS分析的UV色譜圖（人=306nm)且圖6B 是關(guān)于RGC中的白藜蘆醇的LC-MS分析的提取離子色譜圖（m/z-227. 0701-227. 0737)。
[0052] 圖7顯示陰性的代表性的反式-RES配糖體的ESI質(zhì)譜（RT 4. 64min，m/ z389. 1250)，其中白藜蘆醇（m/z 227. 0719)是m/z 389. 1250的源內(nèi)片段化產(chǎn)物離子。
[0053] 圖8提供了白藜蘆醇（RES)在水中的溶解性結(jié)果，比較RGC-RES、合成的RES和植 物RES的溶解性。
[0054] 圖9A和9B顯示在施用一劑RGC RES之后反式-RES的血漿含量，其中圖9A顯示 總反式-RES，圖9B顯示游離反式-RES。呈現(xiàn)的數(shù)值是平均數(shù)（n = 15)。
[0055] 圖10顯示在食用RGC之后12周RGC對(duì)對(duì)象中血漿脂質(zhì)過(guò)氧化的作用（一起顯示 施用了 200mg和400mg RGC的對(duì)象）。
[0056] 圖11顯示FMD值相對(duì)陽(yáng)性的變化70%的對(duì)象的百分比（*p〈0. 05, #p〈0. 005)。
[0057] 發(fā)明詳述
[0058] 在如下詳細(xì)描述中，闡述了很多具體細(xì)節(jié)以充分理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人 員應(yīng)理解本發(fā)明可以不用這些具體細(xì)節(jié)而實(shí)施。在其它情況中，未詳細(xì)描述熟知的方法、程 序和成分免得使本發(fā)明模糊不清。
[0059] 本發(fā)明的實(shí)施方案涉及治療、減輕、緩解或預(yù)防代謝綜合征或與代謝綜合征相關(guān) 的任何病癥或并發(fā)癥的方法，所述方法包括施用包含體外生長(zhǎng)的果實(shí)細(xì)胞的細(xì)胞系愈傷組 織培養(yǎng)物的組合物，所述病癥或并發(fā)癥例如高血壓、糖尿?。╠iabetes)、高脂血癥、糖耐量 異常、肝性脂肪變性、高血糖癥、糖尿病前狀態(tài)、新發(fā)糖尿病、胰島素抗性、糖尿?。―iabetes Mellitus)、空腹血糖異常、高甘油三酯血癥、高膽固醇血癥、低HDL水平、脂肪肝和肥胖癥。 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞在如下所描述的大規(guī)模方法中生長(zhǎng)。
[0060] 如本文所用，短語(yǔ)"果實(shí)細(xì)胞培養(yǎng)物"是指在大規(guī)模方法中體外生長(zhǎng)的果實(shí)細(xì)胞的 細(xì)胞系愈傷組織培養(yǎng)物。所述果實(shí)細(xì)胞培養(yǎng)物可以是單一細(xì)胞培養(yǎng)物（如本文所用，果實(shí) 細(xì)胞系培養(yǎng)物或克隆培養(yǎng)物）或包含來(lái)源于具有不同基因型的果實(shí)（例如，不同品種）的 細(xì)胞或來(lái)源于單一果實(shí)的若干細(xì)胞類型或組織的異源細(xì)胞培養(yǎng)物。本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)物可 以源自果實(shí)的任何部分，例如，果皮、果肉、種皮和種仁（seed flesh)。
[0061] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"治療（treating) "是指預(yù)防一些或全部與疾病、病癥或失調(diào)相 關(guān)的癥狀。術(shù)語(yǔ)"治療"也指緩解、改善或減輕癥狀或疾病的潛在原因，延長(zhǎng)患有疾病的患 者的預(yù)期壽命，預(yù)防疾病以及完全從疾病復(fù)原。
[0062] 詞語(yǔ)"治療（treat) "或"治療（treatment) "可以進(jìn)一步指目的在于減緩（減輕） 不想要的生理學(xué)變化或失調(diào)的治療。為了本發(fā)明的目的，有益的或想要的臨床結(jié)果包括但 不限于緩和癥狀、減小疾病程度、穩(wěn)定的（即不變壞）疾病狀態(tài)、延遲或減緩疾病進(jìn)展、改善 或減輕疾病狀態(tài)以及緩解（部分或全部），無(wú)論可檢測(cè)或不可檢測(cè)。"治療（treating)"還 可以指與不接受治療的預(yù)期存活相比延長(zhǎng)存活。
[0063] 詞語(yǔ)"預(yù)防（prevent) "和"預(yù)防（prevention) "涉及用于保護(hù)或防止沒(méi)有給定病 癥的個(gè)體進(jìn)展到該病癥的預(yù)防藥或預(yù)防性手段。需要預(yù)防的個(gè)體包括易發(fā)或易感病癥的那 些個(gè)體。
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