收集在燒瓶中的 洗液沖洗探針。如果pH值太低，則可以使用0. 1N的乙酸鈉（在去離子水中的水溶液）來 調(diào)節(jié)。
[0145] 2.然后將燒瓶輕輕加塞并在37±2°C下置于培養(yǎng)箱中不少于3小時且不超過3. 25 小時，每小時旋動該燒瓶。
[0146] 3.然后將燒瓶中的內(nèi)容物定量地轉(zhuǎn)移到標(biāo)記的250ml容量瓶中至體積為200ml。
[0147] 使用卡瑞（Carrez)試劑（醋酸鋅；亞鐵氰化鉀）澄清并過濾以這種方式制備的水 解產(chǎn)物。在這些條件下，淀粉被充分水解為葡萄糖。用于此步驟的試劑制備如下。
[0148] 1.通過稱取219. 0±0. 10g二水合醋酸鋅到1000ml的容量瓶中，并加入30ml冰醋 酸來制備卡瑞（Carrez) (I)試劑。然后用去離子水補足容量瓶體積，加塞并搖晃。該溶液 無限期穩(wěn)定。
[0149] 2.通過稱取106. 0±0. 10g亞鐵氰化鉀到1000ml容量瓶中來制備卡瑞（Carrez) (II)試劑。然后用去離子水補足容量瓶體積，加塞并搖晃。該溶液無限期穩(wěn)定。
[0150] 澄清步驟然后如下進行。
[0151] 1.將2X5ml等分的卡瑞（Carrez) (I)溶液加入到包含水解產(chǎn)物的燒瓶中并旋動 該燒瓶。將2X5ml等分的卡瑞（Carrez) (II)溶液加入到燒瓶中并旋動該燒瓶。將燒瓶靜 置10分鐘至一小時。用去離子水補足燒瓶體積，加塞并倒置若干次以使內(nèi)容物混合。
[0152] 2.通過沃特曼（Whatman) 4號濾紙（18cm)過濾提取物的等分，并且收集約100ml 濾液。將5. 0ml的濾液轉(zhuǎn)移到標(biāo)記的100ml容量瓶中。然后用去離子水補足容量瓶體積， 加塞并充分搖晃。
[0153] (水解前）樣品中游離葡萄糖的量也通過測量經(jīng)重復(fù)上述步驟所制備的樣品中的 葡萄糖水平來測定，但不加入2 X5ml等分的淀粉轉(zhuǎn)葡糖苷酶溶液（水解部分的步驟1)。
[0154] 葡萄糖水平用分光光度法從樣品定量。在用分光光度計測量前，過氧化氫從葡萄 糖氧化酶對樣品中游離的葡萄糖作用而產(chǎn)生（氧化酶法（G0D-PAP)反應(yīng)），這種過氧化氫用 于氧化4-氨基安替比林和苯酚，其中會產(chǎn)生顏色。該顏色通過分光光度法測量。
[0155] 對于此步驟，試劑制備如下。
[0156] 1.通過稱取0. 5000±0. 0010g的葡萄糖到500ml的容量瓶中，溶解于去離子水中 以補足體積，加塞并混合來制備〇. 〇5g/l的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。轉(zhuǎn)移5. 0毫升的上述溶液至 100ml容量瓶中，并用去離子水補足體積，加塞并充分混合。該溶液必須在制備當(dāng)天使用。
[0157] 2.葡萄糖氧化酶法（G0P0D)(也稱為葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法G0DP0D)試劑， 在葡萄糖試劑緩沖液中包含大于12000U/L的葡萄糖氧化酶，大于650U/L的過氧化物酶以 及0. 04mM的4-氨基安替比林，每次制備1升。它是根據(jù)在各種標(biāo)準(zhǔn)分析方法，例如A0AC 方法995. 16中使用的用于測定葡萄糖的常規(guī)技術(shù)所制備的。如果在2°C至5°C下保存在琥 珀色燒瓶中，其可以穩(wěn)定三個月。
[0158] 然后進行如下的分光光度計步驟。
[0159] 1.將4ml的葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法（G0DP0D)試劑加入到50ml的琥珀色的 加塞試管中。加入1000 y L的如上所得的稀釋濾液，并立即加塞且渦旋充分混合。
[0160] 2.對單獨的1000 y L等分的去離子水與稀釋（0. 05g/l)的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)該 步驟。
[0161] 3.將上面得到的所有試管轉(zhuǎn)移到黑暗的柜子中室溫下放置60至120分鐘。
[0162] 4.分光光度計樣品試管裝有待測量的溶液檢查吸光度讀數(shù)，以確認(rèn)它是穩(wěn)定的。 記錄樣品的吸光度。對葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)該過程。然后測量并第二次記錄這些溶液的吸 光度。
[0163] 然后基于存在于水解后的樣品中的葡萄糖的總量使用下面的公式計算糊化的淀 粉樣品所占的百分比：
[0164]
[0165] 其中
[0166] AbsSMP =樣品溶液的吸光度
[0167] ConcSTD =標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，g/1 (0? 05g/l)
[0168] Vol_lSMP =初始樣品體積，1，（從澄清步驟的步驟1為250ml)
[0169] Vol_2SMP =最終樣品體積，ml，（稀釋后為100ml)
[0170] AbsSTD =標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度
[0171] Vol_3SMP =用于樣品稀釋所采取的等分體積，ml，（5. 0ml)
[0172] WtSMP =樣品的重量，g。
[0173] 對存在于水解步驟之前的樣品中的游離葡萄糖進行修正。對沒有水解的部分，重 復(fù)剛才所述的計算。然后從水解的部分所計算的百分比中減去從游離葡萄糖所得的百分 比，以得到糊化的淀粉樣品的真實百分比。
[0174] 為了計算淀粉糊化的百分比，就必須知道樣品中淀粉的百分比。樣品中淀粉的總 百分比使用尤爾斯氏旋光方法（Ewers polarimetric method) (IS06493:2000)來測定。
[0175] 然后用糊化的淀粉樣品的真實百分比除以樣品中淀粉的百分比，并乘以100,以便 得到淀粉糊化的百分比。
[0176] (ix)質(zhì)地剖面分析
[0177] 質(zhì)地剖面分析（Texture Profile Analysis, TPA)允許測定若干個參數(shù)來表征樣 品的質(zhì)地。樣品在測試前首先在22°C培養(yǎng)1小時。將樣品從培養(yǎng)箱中取出后立即進行測 試。然后將樣品橫向切割成1〇_厚度的切片。這些樣品平放在平整表面的中心使得樣品 在縱向方向上被壓縮。使用質(zhì)地分析儀（穩(wěn)定微系統(tǒng)公司（Stable Micro Systems)的TA HD Plus質(zhì)地分析儀），尺寸足以壓縮樣品的整個表面的壓縮壓板被用來以lmm/s的速度壓 縮所述產(chǎn)品至50 %應(yīng)變，或它的總高度的50 %。在10mm高的樣品的情況下，至50 %應(yīng)變的 距離為5mm。一旦達到所需要的應(yīng)變距離，探針隨后就立即以lmm/s的速率向上移動并且在 超過基板l〇mm處，即原始樣品高度處停止。完成第一次壓縮循環(huán)后，將壓縮壓板暫停5秒 的時間段，在該時間段內(nèi)，該產(chǎn)品依賴于其材料特性，能夠恢復(fù)其部分原始形狀和形式。然 后進行第二次壓縮循環(huán)。壓縮壓板以lmm/s的速度向下移動到在第一次壓縮期間所要求達 到的50%應(yīng)變的距離（在此情況下為5mm)。達到所要求的應(yīng)變距離后，探針則立即以1mm/ s的速率向上移動，并在原始探針高度停止。
[0178] 質(zhì)地剖面分析測量的示意圖如圖6所示?？梢钥闯?，測量是以探針?biāo)?jīng)歷的力對 所經(jīng)過的時間來呈現(xiàn)的。這模擬了從第一次咬嚼到接著在同一位置的第二次咬嚼的壓縮， 并且是一項完善的技術(shù)。參考圖6, 1^對應(yīng)于測試過程中探針在第一次壓縮期間在向下的 方向移動并且力被測量的時間段。L2對應(yīng)于測試過程中探針在第一次壓縮期間在向上的方 向移動并且力被測量的時間段。L 4對應(yīng)于測試過程中探針在第二次壓縮期間在向下方向移 動并且正的力被測量的時間段。L5對應(yīng)于測試過程中探針在第二次壓縮期間在向上的方向 移動并且正的力被測量的時間段。
[0179] 該測量所關(guān)注的第一參數(shù)是硬度。這是樣品的第一次壓縮的峰值力。這不必對應(yīng) 于最深壓縮點。在目前的工作中，這也已經(jīng)相對于樣品的區(qū)域被標(biāo)準(zhǔn)化了，壓板在樣品的該 區(qū)域上作用以得到應(yīng)力值。該值表示在咬嚼的動作期間，牙齒會遇到的阻力的量。如上所 述，較高的應(yīng)力值會增加牙齒斷裂的風(fēng)險。
[0180] 所關(guān)注的第二個參數(shù)是內(nèi)聚性。這是第二次壓縮過程的功相對于第一次壓縮過程 的功的度量：
[0181]
[0182] 內(nèi)聚性因此反映了產(chǎn)品相對于第一次形變下的表現(xiàn)承受第二次形變的程度，并且 因此是樣品對后續(xù)咬嚼保持阻力并對動物牙齒提供持續(xù)清潔作用的能力的良好指示。
[0183] 所關(guān)注的第三個參數(shù)是瞬時可恢復(fù)彈性（Instantaneous Recoverable Springiness，IRS)，其是第一次壓縮過程中回彈的度量：
[0184]
[0185] IRS因此是樣品在緊接壓縮向下沖程之后的彈性的指示。
[0186] 第四個參數(shù)是滯后可恢復(fù)彈性（Retarded Recoverable Springiness，RRS)，其是 產(chǎn)品在第一次壓縮期間已經(jīng)形變后物理回彈的度量?；貜椓吭诘诙螇嚎s相對于第一次壓 縮的向下沖程測得：
[0187]
[0188] 因此，RRS是在第二次壓縮的向下沖程之前回彈的量的指示。
[0189] 第五個參數(shù)是回彈性，其是第一次壓縮的撤回過程中的面積相對于第一次壓縮向 下沖程過程中的面積的度量：
[0190]
[0191] 所述回彈性是樣品在試圖恢復(fù)其原始形狀過程中做了多少功的指示，并且因此是 樣品的瞬時彈性的另一種指示。
[0192] 咀嚼物的特性優(yōu)選在其制造56天后測量，在此期間，各咀嚼物保持被單獨密封在 保持在環(huán)境溫度（22 °C )下的密封小袋中。
[0193] 本發(fā)明進一步通過下列實施例說明。應(yīng)當(dāng)理解的是，實施例僅用于說明性的目的， 而并不旨在如上所述限制本發(fā)明。在不偏離本發(fā)明范圍的情況下可以對細(xì)節(jié)做出修改。 實施例
[0194] 實施例1
[0195] 使用表1中的配方生產(chǎn)本發(fā)明的咀嚼物。
[0196]表1
[0197]
[0198] 該咀嚼物使用具有7個料筒、以245rpm的螺桿轉(zhuǎn)速操作、提供85W h kg 1的比機 械能和255kg hr1的產(chǎn)品吞吐率的布勒（BUhler)62mm單螺桿擠出機生產(chǎn)。將粉末引入第 一料筒，將液體引入第二料筒。第三、第四和第五料筒是烹制區(qū)。施加0.53mbar的真空到 第六料筒。第七料筒為最終料筒，具有單通道噴嘴，用于擠出一根擠出物條。將所得的擠出 物條切成重量80g和長度135mm的咀嚼物。
[0199] 實施例2
[0200] 使用改編的過程生產(chǎn)400塊本發(fā)明的咀嚼物。除非另有說明，所有的過程與實施 例1中所述的一致。上面列出的配方中的粉末（麥芽糊精除外）以184kg hr 1的速率連同 麥芽糊精以8kg hr1的速率一起加入到擠出機的第一料筒。對比實施例1的配方，加入到 第二料筒中的液體只有以21kg hr1的速率加入的甘油、以32kg hr 1的速率加入的水和以 10kg hr1的速率加入的丙二醇。這得到75:25的粉末-液體比率。測得第七料筒中的溫 度和壓力分別為112°C和20bar。在制造后的第二天測量這些咀嚼物的性能并且所述性能 在表2中示出。
[0201] 表 2
[0202]
[0203] 實施例3
[0204] 使用另一個改編過程生產(chǎn)另一批本發(fā)明的樣品。除非另有說明，所有的過程與實 施例1中所述的一致。螺桿擠出機以210rpm操作，提供81-83W h kg1的比機械能。測得 扭矩為45%。上面列出的配方的粉末以192kg hr 1的速率加入到擠出機的第一料筒。對比 實施例1的配方，加入到第二料筒中的液體只有以3kg hr 1的速率加入的丙二醇、以30kg hr1的速率加入的甘油和以33kg hr 1的速率加入的水，得到258kg hr 1的總吞吐率。測得 所述第一料筒的溫度為49°C，第二料筒為108°C，第三料筒為109°C，第五料筒為110°C，第 六料筒為119°C以及第七料筒為115°C。測得第七料筒中的壓力為6.8bar。施加到第六料 筒的真空為0. 57mbar。將擠出物切割成具有81g的平均重量和135mm的平均長度的單個的 咀嚼物。在制造的當(dāng)天測試這些咀嚼物的性能并且所述性能在表3中示出。
[0205] 表 3
[0206]
[0207] 實施例4
[0208] 根據(jù)表4中的配方生產(chǎn)本發(fā)明的可食用動物咀嚼物。
[0209] 表 4
[0210]
[0211] 粉末組成上述配方的74. 32wt%。所述螺桿擠出機以177. 5rpm操作，提供369. 6kJ kg 1的比機械能。測得扭矩為46%。上面列出的配方的粉末以119. 5kg hr 1的速率加入到擠 出機的第一料筒。丙二醇以1. 9kg hr 1的速率、甘油以18. 8kg hr 1的速率以及水以20. 6kg hr 1的速率加入。測得第二料筒的溫度為51 °C，第三料筒為100 °C，第四料筒為106 °C，第五 料筒為l〇8°C，第六料筒為98°C以及第七料筒為102°C。施加到第六料筒的真空為0. 5bar。 該咀嚼物的性能在表5中示出。
[0212] 表 5
[0213]
[0214] 實施例5
[0215] 根據(jù)表6中的配方生產(chǎn)本發(fā)明的可食用動物咀嚼物。
[0216]表6
[0217]
[0218] 粉末組成上述配方的76. 08wt%。所述螺桿擠出機以156. 9rpm操作，提供302. 5kJ kg 1的比機械能。測得扭矩為40%。上面列出的配方的粉末以119. 3kg hr 1的速率加入到擠 出機的第一料筒。丙二醇以1. 9kg hr 1的速率、甘油以17. 8kg hr 1的速率并且水以17. 8kg hr1的速率加入。測得第二料筒的溫度為49 °C，第三料筒為99 °C，第四料筒為99 °C，第五料 筒為97°C，第六料筒為95°C以及第七料筒為97°C。施加到第六料筒的真空為0. 5bar。該 咀嚼物的性能在下表7中示出。
[0219] 表 7
[0220]
[0221] 實施例6
[0222] 用一系列粉末_液體比、液體組合物和工藝參數(shù)制得二十三個不同的樣品。粉末 部分的組合物與實施例1中的一致，而液體部分（風(fēng)味組分、丙二醇、水和甘油）以在表8 中給出的量加入到該粉末中。在所有情況下，風(fēng)味組分的量為〇. 〇〇1163wt%。該系列的樣 品表現(xiàn)出優(yōu)異的內(nèi)聚性。
[0223] 表 8
[0224]
[0225] 質(zhì)地剖而分析
[0226] 已通過本發(fā)明實現(xiàn)的質(zhì)地空間的獨特區(qū)域在本發(fā)明的咀嚼物和市售可得的現(xiàn)有 技術(shù)的咀嚼物的質(zhì)地剖面分析測量中演示，如在下表9所示。
[0227] 表 9
[0228]
[0229] 回弾測量比較
[0230] 對一系列市售可得的犬執(zhí)行如上所述的回彈測量來評估本發(fā)明描述的可食用動 物咀嚼物的相對性能。對下列樣品進行了測試：本發(fā)明的一種咀嚼物（實施例1)、希爾 斯 5 (Hills 5t/d)(專門牙科用干燥主食）、寶路Dentastix阻嚼物（Pedigree.?: Dentastix)、寶路?大阻嚼物（Pedigree?JumBone)(大尺寸狗）、耐嚼條（Chewy Bar)、寶路?螺旋咀嚼物（ Pedigree# Twisters)、家中寵物牙科咬棒（Pets at Home Dental Bites)、特斯科牙棒（Tesco Dental Sticks)、貝克美味牙棒（Bakers Dental Delicious)以及貝克肉卷（Bakers Meaty Twists)。使用上述的測量方法對每一種阻嚼物 進行了測試，并且數(shù)據(jù)在表10中呈現(xiàn)（連同它們的標(biāo)準(zhǔn)誤差）。
[0231] 圖7示出了峰值力相對回彈的變化。相對回彈和峰值力都表征了被測量樣品的質(zhì) 地。應(yīng)當(dāng)從圖7中理解，本發(fā)明的咀嚼物相對于現(xiàn)有技術(shù)的樣品占有獨特的質(zhì)地空間。正 是這種獨特的質(zhì)地導(dǎo)致了本發(fā)明的咀嚼物在保持動物口腔健康方面的能力提升。特別是， 當(dāng)本發(fā)明的咀嚼物被動物食用時，高的相對回彈與相對高的峰值力相結(jié)合導(dǎo)致了牙齒清潔 量的增加。
[0232] 表 10
[0233]
[0234] 上表中呈現(xiàn)的數(shù)據(jù)說明本發(fā)明的咀嚼物表現(xiàn)出特別高的內(nèi)聚性，超過了現(xiàn)有可得 的咀嚼物所能實現(xiàn)的水平。這種高內(nèi)聚性與改進的功效有關(guān)，如下詳述。
[0235] 發(fā)明人的結(jié)論是令人驚奇的高內(nèi)聚性是由本發(fā)明所述咀嚼物的獨特的組合物來 實現(xiàn)的。特別地，可以認(rèn)為馬鈴薯淀粉的存在對制造該獨特的質(zhì)地特別有效。通過在現(xiàn)有 技術(shù)中使用的貢獻淀粉的組分與在本發(fā)明中使用的那些相比較即可理解：
[0236]寶路?咀嚼物"A"（ Pedigree幾chew "A"）（市售可得的）含有貢獻自大豆粉 (總配方的42wt% )和硬質(zhì)小麥粉（總配方的35wt% )的淀粉成分。
[0237] 寶路?咀嚼物"B"（Pedigree?chew "B"）（市售可得的）含有貢獻自米粉（總 配方的20wt% )，碎米（總配方的19% )，小麥淀粉（總配方的16wt% )，木薯淀粉（總配 方的3wt% )和硬粒小麥粉（總配方的3wt% )的淀粉。
[0238] 寶路⑩:咀嚼物"C"（Pedigree?chew "C"）（市售可得的）含有貢獻自玉米粉 (總配方的38wt% )和小麥淀粉（總配方的21wt% )的淀粉。
[0239] 可以理解的是，本發(fā)明與市售可得的咀嚼物的區(qū)別在于含馬鈴薯淀粉作為淀粉組 分的部分。特別地，本發(fā)明的咀嚼物含有馬鈴薯淀粉和高度糊化的淀粉，有助于形成本發(fā)明 的咀嚼物的獨特質(zhì)地。
[0240] 持續(xù)時間
[0241] 針對不同的產(chǎn)品尺寸和不同的狗尺寸測定本發(fā)明的動物咀嚼物的持續(xù)時間。
[0242] 首先進行"預(yù)喂食"以評估狗對產(chǎn)品是否接受或適口。拒絕食用產(chǎn)品或只食用產(chǎn) 品的部分任何動物都不包括在主喂食測試中。預(yù)喂食階段