克服化學(xué)治療抗性的雷公藤提取物的制作方法
【專利說明】
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0002] 本申請(qǐng)要求于2012年8月19日提交的美國(guó)申請(qǐng)序列號(hào)61/684, 792的優(yōu)先權(quán)，并 且本文通過引用包括其公開內(nèi)容。
技術(shù)領(lǐng)域
[0003] 本發(fā)明涉及增強(qiáng)化學(xué)治療藥物之效力的化合物和天然物質(zhì)。
【背景技術(shù)】
[0004] 在持續(xù)的化學(xué)治療的過程中總是產(chǎn)生抗藥性?？朔搯栴}是癌癥治療中的重大 挑戰(zhàn)。事實(shí)上，腫瘤細(xì)胞利用多種機(jī)制來提高其對(duì)化學(xué)治療藥物的抗性。例如，腫瘤細(xì)胞 可過表達(dá)多藥抗性轉(zhuǎn)運(yùn)體和癌蛋白表皮生長(zhǎng)因子受體基因以及誘導(dǎo)NF-E2相關(guān)因子2 ( - 種上調(diào)參與谷胱甘肽代謝和藥物解毒的多種基因的氧化還原敏感轉(zhuǎn)錄因子（redoxsensing transcription factor))的活性。參見（Huang 等，2005a ;Makarovskiy 等，2002 ;Wang 等，2010) ;(Salzberg 等，2007;Sirotnak 等，2000) ;(Singh 等，2010;Zhang 等，2010);和 (Huang 和 Sadee，2003 ;Seruga 等，2010)。刺猜通路（Hedgehog pathway)是參與化學(xué)抗性 的另一細(xì)胞信號(hào)通路。（Domingo-Domenech等，2012)
[0005] 迄今為止，還未發(fā)現(xiàn)被設(shè)計(jì)用于靶向特定抗性機(jī)制的物質(zhì)是有效的。然而，用于解 決抗藥性之新治療的一種潛在來源是傳統(tǒng)的中草藥。事實(shí)上，這樣的藥物已使用了數(shù)千年 用以恢復(fù)由多種疾病造成的身體功能失衡。用草藥的治療通常包括攝入包含多種化學(xué)組分 的草藥"提取物"，其可潛在地作用于體內(nèi)的不同位點(diǎn)和通路。因此，這些藥物具有靶向多 種細(xì)胞和分子機(jī)制的潛能，這可提供克服藥物抗性的新機(jī)遇或者僅僅提高藥物的效力。參 見Chow&Huang 2010，Pon等2010。如本文中所述，來自一種特定傳統(tǒng)中草藥Triperygium wilfordii (中文（普通話）名稱為雷公藤）的乙醇提取物使對(duì)化學(xué)治療藥物之治療已經(jīng)有 了抗性的癌細(xì)胞變得敏感，這樣使得癌癥再一次對(duì)化學(xué)治療藥物變得敏感。
[0006] 發(fā)明概述
[0007] 本發(fā)明涉及雷公藤的有機(jī)溶劑提取物及其在癌癥治療（特別是在治療對(duì)化學(xué)治 療藥物之治療已經(jīng)表現(xiàn)出一些抗性的癌癥）中的用途。在提取物的多種實(shí)施方案中可用的 雷公藤有機(jī)溶劑提取物可以是（i)乙醇提取物；并且可由如圖1中所描述的MS/LC色譜圖 所鑒定。
[0008] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療癌癥的方法。所述方法向有此需要的患者施 用（a)雷公藤的有機(jī)溶劑提取物和（b)化學(xué)治療藥物的組合。以對(duì)治療癌癥有效的組合量 施用雷公藤的有機(jī)溶劑提取物（a)和化學(xué)治療藥物（b)。被治療的癌癥至少部分地對(duì)單獨(dú) 化學(xué)治療藥物（b)的治療有抗性。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，該方法（a)以使（b)的效 力提高到超過（b)單獨(dú)施用之效力的量施用。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，癌癥可以是乳 腺癌、白血病或前列腺癌，并且化學(xué)治療藥物（b)是目前用于治療此類癌癥的藥物，例如， 多西他賽、柔紅霉素、曲妥珠單抗和拉帕替尼。
[0009] 雷公藤的有機(jī)溶劑提取物（a)和化學(xué)治療藥物（b)可以依次施用或共施用。當(dāng)它 們依次施用時(shí)，在施用（b)之前施用至少一部分（a)。可以以相同的方式并且使用相似的或 相同的化學(xué)治療組合物來施用雷公藤的有機(jī)溶劑提取物（a)。如上面所指出的，在本發(fā)明 的一個(gè)方法中，雷公藤的有機(jī)溶劑提取物（a)和化學(xué)治療藥物（b)可共施用并且可在含有 (a)和（b)兩者的單一組合物中。因此，本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案涉及化學(xué)治療組合物，其 包含（a)雷公藤的有機(jī)溶劑提取物和（b)化學(xué)治療藥物的組合以及可藥用載體，其中以有 效治療癌癥的組合量施用（a)和（b)。
[0010] 表格簡(jiǎn)述
[0011] 表 1 報(bào)告了用 12 μ g/ml 的雷公藤提取物（Lei Gong Teng extract，LGT-E)預(yù)處 理、隨后用多種濃度的多西他賽處理72小時(shí)的多西他賽抗性PC3-TxR細(xì)胞的磺酰羅丹明 B(sulforhodamine B，SRB)細(xì)胞生存力測(cè)定結(jié)果。
[0012] 表2報(bào)告了用多種濃度的多西他賽處理72小時(shí)且不用LGT-E預(yù)處理的多西他賽 抗性PC3-TxR細(xì)胞的SRB細(xì)胞生存力測(cè)定結(jié)果。
[0013] 表3報(bào)告了用25 μ g/ml的LGT-E預(yù)處理、隨后用多種濃度的多西他賽處理72小 時(shí)后的多西他賽抗性PC3-TxR細(xì)胞的SRB細(xì)胞生存力測(cè)定結(jié)果。
[0014] 表4報(bào)告了用多種濃度的多西他賽處理72小時(shí)且不用LGT-E預(yù)處理的多西他賽 抗性PC3-TxR細(xì)胞的SRB細(xì)胞生存力測(cè)定結(jié)果。
[0015] 表5報(bào)告了用50 μ g/ml的LGT-E預(yù)處理、隨后用多種濃度的多西他賽處理72小 時(shí)后的多西他賽抗性DU145-TxR細(xì)胞的SRB細(xì)胞生存力測(cè)定結(jié)果。
[0016] 表6報(bào)告了用多種濃度的多西他賽處理72小時(shí)且不用LGT-E預(yù)處理的多西他賽 抗性DU145-TxR細(xì)胞的SRB細(xì)胞生存力測(cè)定結(jié)果。
[0017] 表7報(bào)告了用25 μ g/ml的LGT-E預(yù)處理、隨后用多種濃度的多西他賽處理72小 時(shí)后的多西他賽抗性DU145-TxR細(xì)胞的SRB細(xì)胞生存力測(cè)定結(jié)果。
[0018] 表8報(bào)告了用多種濃度的多西他賽處理72小時(shí)且不用LGT-E預(yù)處理的多西他賽 抗性DU145-TxR細(xì)胞的SRB細(xì)胞生存力測(cè)定結(jié)果。
[0019] 表9報(bào)告了用12. 5 μ g/ml的LGT-E預(yù)處理、隨后用多種濃度的多西他賽處理72 小時(shí)后的多西他賽抗性DU145-TxR細(xì)胞的磺酰羅丹明B(SRB)細(xì)胞生存力測(cè)定結(jié)果。
[0020] 表10報(bào)告了用多種濃度的多西他賽處理72小時(shí)且不用LGT-E預(yù)處理的多西他賽 抗性DU145-TxR細(xì)胞的SRB細(xì)胞生存力測(cè)定結(jié)果。
[0021] 表11報(bào)告了用多種濃度的多西他賽處理72小時(shí)后或不用LGT-E預(yù)處理的多西他 賽抗性PC3-TxR細(xì)胞的SRB細(xì)胞生存力測(cè)定結(jié)果。
[0022] 表12報(bào)告了用多種濃度的多西他賽處理72小時(shí)后或不用LGT-E預(yù)處理的多西他 賽敏感性PC3細(xì)胞的SRB細(xì)胞生存力測(cè)定結(jié)果。
[0023] 表13報(bào)告了用多種濃度的LGT-E處理72小時(shí)后的多西他賽敏感性PC3細(xì)胞的 SRB細(xì)胞生存力測(cè)定結(jié)果。
[0024] 表14報(bào)告了用多種濃度的LGT-E處理72小時(shí)后的多西他賽抗性PC3-TxR細(xì)胞的 磺酰羅丹明B(SRB)細(xì)胞生存力測(cè)定結(jié)果。
[0025] 表15報(bào)告了用多種濃度的LGT-E處理72小時(shí)后的多西他賽抗性DU145-TxR細(xì)胞 的SRB細(xì)胞生存力測(cè)定結(jié)果。
[0026] 表16報(bào)告了用多種濃度的LGT-E處理72小時(shí)后的多西他賽敏感DU145細(xì)胞的磺 酰羅丹明B(SRB)細(xì)胞生存力測(cè)定結(jié)果。
[0027] 表17報(bào)告了用于建立每一種藥物的IC5tl的細(xì)胞系和四種化學(xué)治療藥物的濃度范 圍。
[0028] 表18總結(jié)了在多西他賽、柔紅霉素、曲妥珠單抗和拉帕替尼的情況下LGT-E的CE 測(cè)定結(jié)果。
[0029] 表19報(bào)告了用50 μ g/ml的LGT-E預(yù)處理、隨后用多種濃度的多西他賽處理72小 時(shí)的多西他賽敏感DU145細(xì)胞的磺酰羅丹明B(SRB)細(xì)胞生存力測(cè)定結(jié)果。
[0030] 表20報(bào)告了用多種濃度的多西他賽處理72小時(shí)且不用LGT-E預(yù)處理的多西他賽 敏感DU145細(xì)胞的SRB細(xì)胞生存力測(cè)定結(jié)果。
[0031] 表21報(bào)告了用13 μ g/ml的LGT-E預(yù)處理，隨后用多種濃度的Hcrccptin1"處 理72小時(shí)后的丨丨erceptinK)·敏感性、HER2-陽性乳腺導(dǎo)管癌系BT474細(xì)胞的磺酰羅丹明 B(SRB)細(xì)胞生存力測(cè)定結(jié)果。
[0032] 表22報(bào)告了用多種濃度的Herceptin?處理72小時(shí)且不用LFT-E預(yù)處理的 Herceptin"敏感性、HER2-陽性乳腺導(dǎo)管癌系BT474的磺酰羅丹明B(SRB)細(xì)胞生存力測(cè) 定結(jié)果。
[0033] 表23報(bào)告了用13 μ g/ml的LGT-E預(yù)處理、隨后用多種濃度的Herceptin1''處理 72小時(shí)后的Herceptin?抗性、HER2-陽性乳腺導(dǎo)管癌系BT474/Her細(xì)胞的磺酰羅丹明 B(SRB)細(xì)胞生存力測(cè)定結(jié)果。
[0034] 表24報(bào)告了用多種濃度的Herceptinli處理72小時(shí)且沒有用LGT-E預(yù)處理的 Herceptin?抗性、HER2-陽性乳腺導(dǎo)管癌系BT474/Her的磺酰羅丹明B(SRB)細(xì)胞生存力 測(cè)定結(jié)果。
[0035] 表25報(bào)告了用多種濃度的拉帕替尼處理72小時(shí)后的Herceptinli?敏感性、 HER2-陽性乳腺導(dǎo)管癌系BT474的磺酰羅丹明B(SRB)細(xì)胞生存力測(cè)定結(jié)果。
[0036] 表26報(bào)告了用13 μ g/ml的LGT-E預(yù)處理、隨后用多種濃度的HerceptinwI 理72小時(shí)的Herceptinijt性、HER2-陽性乳腺導(dǎo)管癌系BT474-TXR細(xì)胞的磺酰羅丹明 B(SRB)細(xì)胞生存力測(cè)定結(jié)果。
[0037] 表27報(bào)告了用多種濃度的