列腺癌）。通過(guò)本發(fā)明的方法可治療的血液學(xué)腫瘤包括例如慢性髓細(xì)胞源性白血病 (chronic myelogenous leukemia，CML)，其特征在于在血液、骨髓、脾、肝以及有時(shí)在其他 組織中不成熟粒細(xì)胞（例如中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞）的異常增殖。
[0072] 適于與本發(fā)明的雷公藤提取物或提取物組分組合使用的化學(xué)治療藥物的非限制 性實(shí)施例包括：拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，包括例如多柔比星和柔紅霉素；紫杉烷類，包括多西他 賽；祀向嵌入到靶細(xì)胞表面的受體（例如HER受體）的生物制劑，所述HER受體包括HER2/ neu，其為曲妥珠單抗（以Heireptinw商標(biāo)名出售）的靶標(biāo)。
[0073] 如本文所使用的術(shù)語(yǔ)"治療"是指向具有對(duì)化學(xué)治療藥物有抗藥性之癌癥的對(duì)象 共施用雷公藤的乙醇提取物和化學(xué)治療藥物，目的是治療、治愈、減輕、緩減、改變、補(bǔ)救、改 進(jìn)、改善或影響癌癥。在多種實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法將本發(fā)明的雷公藤的乙醇提取物和 與提取物共施用的化學(xué)治療藥物同時(shí)施用或即時(shí)先后施用，而在另一些實(shí)施方案中，在施 用化學(xué)治療藥物之前施用雷公藤的乙醇提取物以使被治療的癌細(xì)胞在與化學(xué)治療藥物接 觸之前至少部分地變得敏感。
[0074] 術(shù)語(yǔ)"有效量"是指使癌細(xì)胞對(duì)指定化學(xué)治療藥物的抗性降低所需的雷公藤乙醇 提取物的量。如本領(lǐng)域的技術(shù)人員所公認(rèn)的，有效量可依賴于施用的途徑、賦形劑的使用和 共同使用其他藥劑的可能性而不同。
[0075] 如上所述，本發(fā)明包括包含雷公藤提取物或提取物組分的藥物組合物。為了實(shí)踐 本發(fā)明的方法，上述的藥物組合物可以經(jīng)口、腸道外、通過(guò)吸入氣霧劑、表面地、經(jīng)直腸、經(jīng) 鼻、口腔、經(jīng)陰道或通過(guò)植入儲(chǔ)庫(kù)（implanted reservoir)來(lái)施用。本文中所使用的術(shù)語(yǔ) "腸道外"包括皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、滑膜內(nèi)（intrasynovial)、胸骨內(nèi)、 鞘內(nèi)、病灶內(nèi)（intralesional)和盧頁(yè)內(nèi)注射或輸注技術(shù)。
[0076] 可注射組合物可以常規(guī)的形式制備，或者作為液體溶液或混懸液，適于在注射之 前液體中溶液或混懸液的固體形式或者作為乳劑。注射劑、溶液和乳劑還可包含一種或更 多種賦形劑。合適的賦形劑是例如水、鹽水、葡萄糖、甘油或乙醇。此外，如果需要，待施用 的藥物組合物還可含有少量的無(wú)毒性輔助物質(zhì)，例如潤(rùn)濕劑或乳化劑、PH緩沖劑、穩(wěn)定劑、 溶解性增強(qiáng)劑和其他這樣的試劑，例如，乙酸鈉、脫水山梨糖醇單月桂酸酯、油酸三乙醇胺 和環(huán)糊精。
[0077] 用于口服施用的組合物可以是任何可口服的劑型，包括但不限制于膠囊劑、片劑、 乳劑和水混懸劑、分散體和溶液劑。在口服使用片劑的情況下，通常使用的載體包括乳糖和 玉米淀粉。通常還添加潤(rùn)滑劑，例如硬脂酸鎂。對(duì)于以膠囊形式口服施用時(shí)，可用的稀釋劑 包括乳糖和干燥的玉米淀粉。當(dāng)口服施用水混懸劑或乳劑時(shí)，活性成分可與乳化劑或助懸 劑組合混懸或溶解在油相中。
[0078] 就與制劑中的活性成分兼容的意義而言，藥物組合物中的載體必須是"可接受 的"（且優(yōu)選能夠使其穩(wěn)定）并且對(duì)于待治療的對(duì)象無(wú)害。例如，一種或更多種增溶劑（其 與稠合的二環(huán)或三環(huán)化合物或者更多的增溶劑形成更多種可溶性復(fù)合物）可被用作遞送 活性化合物的可藥用載體。其他載體的實(shí)例包括膠體二氧化硅、硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉 和D&C黃色#10。
[0079] 實(shí)施例 [0080] 實(shí)施例1
[0081] 雷公藤的認(rèn)證。雷公藤的根購(gòu)自三元藥物有限公司（Sanyuan Pharmaceuticals Co. Ltd.)(中華人民共和國(guó)吉林?。?，并在澳門科技大學(xué)的澳門醫(yī)學(xué)和健康應(yīng)用研宄所 (Macau Institute of Applied Research for Medcine and Health of Macau University of Science and Technology，Macau)進(jìn)行認(rèn)證，如下。根據(jù)相同的方案對(duì)雷公藤的根皮和 根木質(zhì)部進(jìn)行了認(rèn)證。因此，將根皮和根木質(zhì)部組織各自研磨成粉末并使其通過(guò)60目篩。 對(duì)于每種根或木質(zhì)部制備物，精確稱量0. 2g研磨粉末并添加20mL乙酸乙酯。于45°C下使用 浴超聲處理1小時(shí)以提取樣品。將該混合物過(guò)濾，并用20mL甲醇重懸殘余物，隨后于45°C 下通過(guò)浴超聲再處理1小時(shí)。將乙酸乙酯提取物和甲醇提取物合并，并使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器將 其蒸干。用2ml甲醇使固體提取物重構(gòu)，并通過(guò)0.45 μ g過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾。HPLC-DAS
[0082] 用 Agilent 1200 系列 LC 系統(tǒng)和模塊（Agilent Technologies，Santa Clara，CA) 進(jìn)行高壓液相色譜（HPLC)層析。使用對(duì)稱（Symmetry) C18 (250 X 4.6mm，5 μ m)柱（Waters Corp.，Milford，MA)進(jìn)行色譜層析。分析柱的溫度設(shè)定為20°C，且檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。使 用含乙腈（A)和0. 1%的磷酸（v/v) (B)的流動(dòng)相以Iml/分鐘流量進(jìn)行線性梯度洗脫。梯 度開始于40 %的洗脫劑A和60 %的洗脫劑B。在20分鐘內(nèi)將梯度線性改變至50 %的洗脫 劑B，在20分鐘內(nèi)至25 %的洗脫劑B，并在10分鐘內(nèi)至20 %的洗脫劑B。然后在10分鐘 內(nèi)將梯度進(jìn)一步變回至80%的洗脫劑B，并保持在該百分比。雷公藤根皮和木質(zhì)部組織的 HPLC-二極管-陣列檢測(cè)（HPLC-DAD)色譜圖指紋分別示于圖IA和IB。
[0083] 雷公藤提取物的制備。將雷公藤根木質(zhì)部組織（390. 61g)置于混合器中并混合成 小塊。將混合的根材料加入到2L的95%乙醇中，超聲處理1小時(shí)，然后在95%乙醇中浸漬 過(guò)夜。之后，使用真空加壓過(guò)濾該材料，并收集乙醇。加壓過(guò)濾后剩余的殘余物用600mL的 95%乙醇洗滌兩次，并在每次洗滌周期中，超聲處理30分鐘。來(lái)自兩次洗滌的乙醇與初始 的2L乙醇合并在一起，并且使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸發(fā)合并的提取物，然后冷凍干燥。前述提取 步驟的總產(chǎn)率為產(chǎn)生16. 16g乙醇提取材料，其通過(guò)在硅膠60上吸附蒸發(fā)的產(chǎn)物并且使吸 附的材料按以下溶劑的順序依次提取而進(jìn)一步分餾：95%的乙醇和氯仿。對(duì)乙醇和氯仿提 取物的化學(xué)增敏作用進(jìn)行了定量。還制備了水提取物并將其與乙醇和氯仿的提取物比較從 而確定了其CE。雷公藤水提物來(lái)自中國(guó)云南，并且獲自江陰天江藥物有限公司（Tianjiang Pharmaceutical Co.，Ltd·，中國(guó)江蘇），并通過(guò) ACE Pharmaceuticals Ltd (Hong Kong)市 售可得。
[0084] 評(píng)估提取物的化學(xué)增敏性
[0085] 化學(xué)增敏效應(yīng)（chemosensitizing effect，CE)是當(dāng)化合物和化學(xué)治療藥物共施 用時(shí)，化合物可降低（即化學(xué)增敏）所需化學(xué)治療藥物濃度之半最大抑制濃度（IC 5tl)的程 度的量度。這里，IC5tl是抑制50%細(xì)胞增殖的化學(xué)治療藥物的濃度。CE表示為：CE = IC5qd/ IC5QE+D。IC5cid是針對(duì)評(píng)估的受試提取物（或懷疑具有CE的其他化合物）之化學(xué)治療藥物的 IC5Q。IC5cimi是受試提取物和化學(xué)治療藥物之組合的IC5tl。受試提取物或化合物的CE可根 據(jù)待評(píng)估的細(xì)胞類型和特定的化學(xué)治療劑或種類或者治療劑的組合而不同。
[0086] 通常當(dāng)以高于產(chǎn)生CE所需的濃度施用受試提取物或化合物時(shí)，受試提取物或化 合物也可以是非特異性細(xì)胞毒素（與靶向腫瘤細(xì)胞的化學(xué)治療藥物相反）。理想地，產(chǎn)生 CE所需的受試化合物的濃度顯著低于其IC5tl。可通過(guò)計(jì)算用于受試提取物或化合物的化學(xué) 增敏效用指數(shù)（Chemosensitizing Utility Index，ΟΠ )值來(lái)對(duì)這些濃度之間差異進(jìn)行定 量。CUI表達(dá)為：CUI = CEX (IC5QE/C〇nE)。IC5qe是抑制50%細(xì)胞增殖的提取物（例如，雷 公藤的提取物或提取的化合物）的濃度。Con E是產(chǎn)生理想的CE所需的提取物或化合物的 濃度。然后體內(nèi)的環(huán)境下測(cè)試發(fā)現(xiàn)具有理想CE和CUI值之提取物和化合物作為化學(xué)增敏 劑的潛能。
[0087] CE和⑶I值是從上述的水、乙醇和氯仿提取物中單獨(dú)地獲得的。使用化學(xué)治療劑 多西他賽，聯(lián)合多西他賽抗性的前列腺癌系PC3-TxR(密歇根大學(xué)），使用如下面實(shí)施例5中 所述的基于磺酰羅丹明B(SRB)的增殖測(cè)定進(jìn)行這些分析。所有上述的提取物都與理想的 CE和⑶I值相聯(lián)系。水、乙醇和氯仿提取物的IC5(IE+D濃度分別為9. 3、3. 97和3. 8nM，且⑶I 值分別為17. 74、27. 39和17. 37。基于乙醇相對(duì)較高的⑶I值，選擇乙醇進(jìn)行進(jìn)一步研宄， 如以下實(shí)施例中所記錄。在實(shí)施例中，乙醇被稱為雷公藤提取物（LGT-E)。
[0088] LGT-E的液相色譜和質(zhì)譜（LC-MS)分析。如上述制備的500mg/ml的LGT-E提取 物產(chǎn)品的儲(chǔ)備溶液是通過(guò)將500mg的LGT-E提取物溶解在乙醇中制成的。于80 %的乙腈 中將儲(chǔ)備液進(jìn)一步稀釋至 500 μ g/ml。使用 API3200LC/MS/MS 系統(tǒng)（Applied Biosystems， Foster City，CA，USA)和兩個(gè)裝備有 SIL-20A Prominence 自動(dòng)進(jìn)樣器的 Shimadzu LC-20AD Prominence 液相色譜泵（Shimadzu，Columbia，MD，USA)對(duì) 10 μ I