（乙烯基咪唑）和一些 亞氨基取代的聚磷腈。聚合物的銨鹽或季銨鹽也可由主鏈氮或側(cè)鏈亞氨基來形成。堿性側(cè) 基的例子為氨基和亞氨基。
[0094] 此外，用于本發(fā)明的方法的組合物可以包括至少一種治療劑。例如，該組合物可 以含有助于治療炎癥或疼痛的鎮(zhèn)痛劑、或防止該組合物治療的部位感染的抗感染劑。更具 體地，有用的治療劑的非限制性例子包括以下治療類別：鎮(zhèn)痛劑，例如非類固醇抗炎藥、阿 片激動(dòng)劑和水楊酸鹽；抗感染劑，例如驅(qū)蟲藥、抗厭氧菌藥、抗生素、氨基糖苷類抗生素、抗 真菌抗生素、頭孢菌素類抗生素、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素、雜β-內(nèi)酰胺類抗生素、青霉素類抗 生素、喹諾酮類抗生素、磺胺類抗生素、四環(huán)素類抗生素、抗分枝桿菌藥、抗結(jié)核抗分支桿菌 藥、抗原蟲藥、抗瘧抗原蟲藥、抗病毒劑、抗逆轉(zhuǎn)錄病毒劑、殺疥螨劑、抗炎劑、皮質(zhì)類固醇抗 炎劑、止癢劑/局部麻醉劑、局部抗感染藥、抗真菌局部抗感染藥、抗病毒局部抗感染藥；電 解劑和腎劑，例如酸化劑、堿化劑、利尿劑、碳酸酐酶抑制劑利尿劑、髓袢利尿劑、滲透性利 尿劑、保鉀利尿劑、噻嗪類利尿劑、電解質(zhì)替換劑和尿酸排泄促進(jìn)劑；酶，例如胰腺酶和溶 栓酶；胃腸劑，例如止瀉藥、胃腸抗炎劑、胃腸抗炎劑、抗酸抗?jié)儎?、胃酸泵抑制劑抗?jié)?劑、胃粘膜抗?jié)儎?、?-阻滯抗?jié)儎?、膽石溶解劑、消化劑、催吐劑、瀉藥和大便軟化劑 和促動(dòng)力劑；全身麻醉劑，例如吸入麻醉藥、鹵代吸入麻醉藥、靜脈麻醉藥、巴比妥類靜脈全 麻藥、苯二氮平類靜脈麻醉藥和阿片激動(dòng)劑靜脈麻醉藥；激素和激素改進(jìn)劑，例如墮胎藥、 腎上腺劑、皮質(zhì)類固醇腎上腺劑、雄激素、抗雄激素、免疫生物劑例如免疫球蛋白、免疫抑制 劑、類毒素和疫苗；局部麻醉劑，例如酰胺局部麻醉藥和酯類局部麻醉藥；肌肉骨骼劑，例 如抗痛風(fēng)抗炎劑、皮質(zhì)類固醇抗炎劑、金化合物抗炎劑、免疫抑制抗炎劑、非類固醇消炎藥 (NSAIDs)、水楊酸抗炎劑、礦物質(zhì)；和維生素，例如維生素 Α、維生素 Β、維生素 C、維生素 D、維 生素 E和維生素 K。
[0095] 用于本發(fā)明的方法的組合物可以包括細(xì)胞培養(yǎng)成分，例如包括氨基酸、金屬、輔酶 因子、以及小數(shù)量的其它細(xì)胞的培養(yǎng)基，例如一些其它細(xì)胞通過干細(xì)胞的后續(xù)分化而出現(xiàn)。
[0096] 用于本發(fā)明的方法的組合物可以通過，例如從培養(yǎng)基中沉淀出對(duì)象的細(xì)胞并將它 們?cè)賾腋≡谄谕娜芤夯虿牧现衼碇苽洹？梢酝ㄟ^例如離心、過濾、超濾等將細(xì)胞沉淀和/ 或從培養(yǎng)基中脫除。
[0097] 本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地確定組合物中且以本發(fā)明的方法進(jìn)行給藥的細(xì)胞 和可選的載體的量。在實(shí)施方式中，任何添加劑（除活性細(xì)胞之外）在磷酸鹽緩沖液 中以0.001 %至50% (重量）溶液的量存在，有效成分以大約微克到毫克存在，例如約 0· OOO Iwt %至約5wt % (重量％ )，優(yōu)選約0· OOO Iwt %至約Iwt %，還更優(yōu)選約0· OOO Iwt % 至約0. 05wt %或約0.0 Olwt %至約20wt %，優(yōu)選約0.0 lwt %至約IOwt %，還更優(yōu)選約 0.05wt%至約5wt%。當(dāng)然，對(duì)于任何待被給藥至動(dòng)物或人的組合物，以及對(duì)于任何特定 的給藥方法，因此優(yōu)先確定：毒性，例如通過確定在合適的動(dòng)物模型（例如嚙齒類動(dòng)物如老 鼠）中的致死劑量（LD)和LD50 ;和該組合物的劑量、該組合物中成分的濃度和給藥組合物 的時(shí)機(jī)，其引發(fā)適當(dāng)?shù)捻憫?yīng)。這樣的確定不需要根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員的知識(shí)、本公開和本文 引用的文獻(xiàn)進(jìn)行過度的實(shí)驗(yàn)。并且，連續(xù)給藥的時(shí)間可以無需過度的實(shí)驗(yàn)而確定。
[0098] 用于本發(fā)明的方法組合物可通過尤其局部注射（包括導(dǎo)管給藥）、全身注射、局部 注射、靜脈注射、子宮內(nèi)注射或腸胃外給藥來給藥。當(dāng)給藥本文所述的治療組合物（例如， 藥物組合物）時(shí)，通常將它配制成單位劑量的可注射形式（溶液、懸浮液、乳液）。
[0099] EPC的遺傳修飾
[0100] 在一個(gè)實(shí)施方式中，在本發(fā)明的方法中使用的細(xì)胞被遺傳性地修飾。優(yōu)選地， 細(xì)胞被遺傳修飾以產(chǎn)生異源蛋白質(zhì)。通常，細(xì)胞將被遺傳修飾，使得從細(xì)胞中分泌異源 蛋白質(zhì)。然而，在實(shí)施方式中，細(xì)胞可被修飾以表達(dá)功能性的不編碼蛋白質(zhì)的多核苷酸 (non-protein encoding polynucleotide)，例如雙鏈 RNA (通常用于 RNA 沉默）、反義寡核 苷酸或催化核酸（例如核糖酶或脫氧核酶）。在一個(gè)實(shí)施方式中，EPC被遺傳性地修飾以表 達(dá)或過度表達(dá)選自內(nèi)皮型一氧化氮合成酶（eNOS)、血紅素氧化酶（HMOXl)和前列環(huán)素合成 酶（PTGIS)的蛋白質(zhì)。
[0101] 在以足夠支持所修飾的細(xì)胞的生長(zhǎng)的量的至少一種細(xì)胞因子的存在下，遺傳修飾 的細(xì)胞可以被培養(yǎng)。由此獲得的遺傳修飾的細(xì)胞可以被立即使用（例如，移植）、培養(yǎng)和體 外擴(kuò)增、或儲(chǔ)存供以后用。所修飾的細(xì)胞可以通過本領(lǐng)域中公知的方法進(jìn)行儲(chǔ)存，例如在液 氮中冷凍。
[0102] 如本文所用的遺傳修飾包括任何遺傳修飾的方法，其涉及將外源的或外來的多核 苷酸引入至本文所述的細(xì)胞內(nèi)、或修飾細(xì)胞內(nèi)的內(nèi)源基因。遺傳修飾包括但不限于轉(zhuǎn)導(dǎo) (在體外或體內(nèi)，宿主DNA從宿主或供體到受體的病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)移）、轉(zhuǎn)染（利用分離的病 毒DNA基因組的細(xì)胞的轉(zhuǎn)化）、脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)移、電穿孔、磷酸鈣轉(zhuǎn)染、或共沉淀等。轉(zhuǎn)導(dǎo) 的方法包括細(xì)胞和生產(chǎn)者細(xì)胞的直接共培養(yǎng)、或在具有或不具有合適的生長(zhǎng)因子和聚陽(yáng)離 子的情況下，單獨(dú)以病毒上清液培養(yǎng)培養(yǎng)。
[0103] 盡管前述內(nèi)容指具體優(yōu)選的實(shí)施方式，但是將理解本發(fā)明不限于此。本領(lǐng)域的普 通技術(shù)人員將想到對(duì)所公開的實(shí)施方式進(jìn)行各種修改，且這樣的修改意欲落在本發(fā)明的范 圍之內(nèi)。
[0104] 在本說明書中引用的所有的出版物、專利申請(qǐng)和專利通過全文引用并入本文。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于治療肺動(dòng)脈高血壓（PAH)的方法，所述方法包括： 提供分離的內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPC); 用前列環(huán)素處理所述EPC，其中所述處理后的EPC表現(xiàn)出具有增強(qiáng)血管生成能力的過 度增生的表型；以及 將包括所述處理后的EPC的組合物給藥至患有PAH的對(duì)象。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述前列環(huán)素選自依前列醇鈉、曲前列環(huán)素、伊 洛前列素和PGI2受體激動(dòng)劑。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述對(duì)象為人。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述EPC是自體的。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述EPC是從患有PAH的對(duì)象的血液中分離的。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述EPC是內(nèi)皮集落形成細(xì)胞。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述EPC被遺傳性地修飾。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述組合物為還包括至少一種藥學(xué)上可接受的 載體的藥物組合物。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述組合物還包括與EPC不同的至少一種治療 劑。10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述組合物促進(jìn)肺血管修復(fù)。11. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，將所述EPC和至少一種生長(zhǎng)因子聯(lián)合給藥。12. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中，所述生長(zhǎng)因子選自FGF、VEGF-A、VEGF-B、BMP-4 和TGF- 0。13. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，將所述EPC和間充質(zhì)干細(xì)胞或已經(jīng)與間充質(zhì)干 細(xì)胞接觸且包含它的一種或多種成分的培養(yǎng)基聯(lián)合給藥。14. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，將所述EPC和前列環(huán)素聯(lián)合給藥。15. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，在所述EPC的分離之前，用前列環(huán)素預(yù)處理所述 對(duì)象。16. -種用于促進(jìn)EPC生長(zhǎng)的方法，所述方法包括： 提供分離的EPC; 用前列環(huán)素處理所述EPC;以及 其中，所述前列環(huán)素增強(qiáng)所述EPC的生長(zhǎng)。17. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中，所述EPC從人分離。18. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中，所述EPC從組織或細(xì)胞培養(yǎng)物中分離。19. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中，所述前列環(huán)素為曲前列環(huán)素。20. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中，所述處理后的EPC表現(xiàn)出具有增強(qiáng)血管生成能 力的過度增生的表型。21. -種用于治療PAH的方法，所述方法包括： 提供分離的EPC;以及 將前列環(huán)素和所述EPC聯(lián)合給藥至患有PAH的對(duì)象。22. -種用于治療PAH的方法，所述方法包括： 提供分離的EPC; 將所述EPC給藥至患有PAH的對(duì)象；以及 將前列環(huán)素給藥至所述對(duì)象。23. -種用于治療PAH的方法，所述方法包括： 提供分離的EPC; 將前列環(huán)素給藥至患有PAH的對(duì)象；以及 將所述EPC給藥至所述對(duì)象。24. 根據(jù)權(quán)利要求21-23中任一項(xiàng)所述的方法，其中，將所述EPC和間充質(zhì)干細(xì)胞或已 經(jīng)與間充質(zhì)干細(xì)胞接觸且包含它的一種或多種成分的培養(yǎng)基聯(lián)合給藥。25. 根據(jù)權(quán)利要求21-23中任一項(xiàng)所述的方法，其中，將所述前列環(huán)素和間充質(zhì)干細(xì)胞 或已經(jīng)與間充質(zhì)干細(xì)胞接觸且包含它的一種或多種成分的培養(yǎng)基聯(lián)合給藥。
【專利摘要】本申請(qǐng)針對(duì)一種用于治療肺動(dòng)脈高血壓(PAH)的方法，該方法包括：提供分離的內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPC)；用前列環(huán)素處理EPC，其中該處理后的EPC表現(xiàn)出具有增強(qiáng)血管生成能力的過度增生的表型；以及將包括該處理后的EPC的組合物給藥至患有PAH的對(duì)象。
【IPC分類】A61K35/12, A61K35/28, A61K31/557, A61P9/12, A61K35/14
【公開號(hào)】CN104936603
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201380050778
【發(fā)明人】R·杰夫斯, T·彼得森, R·M·伊拉甘, M·瓦德
【申請(qǐng)人】聯(lián)合治療公司
【公開日】2015年9月23日
【申請(qǐng)日】2013年7月30日
【公告號(hào)】CA2880811A1, EP2879684A2, US20150216909, WO2014022376A2, WO2014022376A3