，N，2, 2-五甲基丙-1-銨的合成：
[0193] 通過與化合物1005相同的合成程序，使用3-氨基_N，N，N，2, 2-五甲基丙-1-銨 作為偶聯(lián)劑制備1006。
[0195]
[0196] 2000、3000和4000的制備已詳細(xì)描述于TO-2011/139513中：
[0198] 以下一般程序應(yīng)用于合成權(quán)利要求1的化合物：
[0200] 在室溫下，將 iPr2NEt 或Et3N(l-20eq.)加入到 2000(leq.)、胺（l-1.5eq.)和 TBTU(l-2eq.)在DMF或THF中的溶液中。將反應(yīng)在室溫或從40°C至115°C的升高溫度下 攪拌16-72小時，然后用飽和碳酸氫鈉水溶液淬滅。水層用EtOAc萃取。合并的有機(jī)相經(jīng) Mg2S04干燥并在真空下濃縮，得到粗產(chǎn)物，其通過制備型HPLC純化。
[0201]
[0203]
[0205] 以下一般程序應(yīng)用于合成權(quán)利要求1的化合物：
[0207]在室溫下，將 iPr2Net 或Et3N(l-20eq.)加入到 3000(leq.)、胺（l-1.5eq.)和 TBTU(l-2eq.)在DMF或THF中的溶液中。將反應(yīng)在室溫或從40°C至115°C的升高溫度下 攪拌16-72小時，然后用飽和碳酸氫鈉水溶液淬滅。水層用EtOAc萃取。合并的有機(jī)相經(jīng) Mg2S04干燥并在真空下濃縮，得到粗產(chǎn)物，其通過制備型HPLC純化。
[0210]
[0212]
[0213] 4001 的制備：
[0215] 步驟 1 :將化合物 4000 (20mg)和二氯亞砜（sulfurous dichloride) (63mg)混合在 一起。將反應(yīng)混合物加熱至60°C，保持6小時。在真空下除去溶劑，提供粗化合物4000-In， 其不經(jīng)純化即用于下一步驟中。
[0216] 步驟2 :在室溫下，將iPr2NEt (9. 14mg)加入到步驟1的4000-In和2-氨 基-N，N，N-三甲基乙銨（4. 7mg)在DMF(lmL)中的溶液中。將反應(yīng)在室溫下攪拌16小時。 通過制備型HPLC分離化合物4001。
[0218] 生物學(xué)方法
[0219] 感染測定。使用標(biāo)準(zhǔn)化的方法學(xué)（Bartosch，B.，Dubuisson，J.*C0sset，F(xiàn).-L. J. Exp. Med. 2003,197:633-642)制備的HCV假顆粒是通過293T細(xì)胞的基于脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染操 作，使用表達(dá)鼠白血病病毒殼體和聚合酶蛋白、編碼螢光素酶報告基因的MLV基因組和來 自HCV或水泡性口膜炎病毒（VSV)的被膜糖蛋白的質(zhì)粒制備的。基因型la HCV E1和E2 被膜編碼序列源自于H77C分離物（GenBank登錄號AF009606)。在轉(zhuǎn)染后3天收集含有假 顆粒的培養(yǎng)基，過濾，并在_20°C儲存作為病毒儲備液。在384孔板中通過在存在或缺少測 試抑制劑的情況下混合假病毒（lx 104個Huh7細(xì)胞/孔）進(jìn)行感染，隨后在37°C溫育。在 感染后2天測量熒光素酶活性（反映假顆粒進(jìn)入宿主細(xì)胞的程度）。通過評價對VSV假顆 粒感染的抑制確定化合物抑制HCV的特異性。
[0220] 化合物和數(shù)據(jù)分析。將測試化合物以3倍連續(xù)稀釋于二甲亞砜（DMS0)中，得到 50. 0 yM至0. 04pM的測試終濃度范圍。最大活性（對照的100% )和背景分別源自于含有 DMS0但無抑制劑的對照孔或未感染的孔。然后將每個化合物測試孔中的單個信號除以背 景扣除后的平均對照值并乘以100%以確定百分比活性。將測定重復(fù)進(jìn)行兩次并計算平均 EC 5Q值（反映實(shí)現(xiàn)50 %病毒復(fù)制的抑制的濃度）。化合物EC 5(|數(shù)據(jù)表達(dá)為A = 0. 01彡10nM ; B = 10-1000nM?；衔锏拇硇詳?shù)據(jù)報告于表2中。
[0221] 表 2.
[0222]
[0223]
[0224]
[0225] 對于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，本公開不限于上述示例性實(shí)施例，且在不背 離其基本屬性的情況下本公開可按其它具體形式來實(shí)施。因此，期望所述實(shí)施例在所有方 面都應(yīng)被視為示例性而非限制性的，應(yīng)參考所附權(quán)利要求書而非上述實(shí)施例，因此，落入權(quán) 利要求書的等價意義和范圍內(nèi)的所有變化都意圖涵蓋在本申請范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.式I化合物，包括其藥學(xué)上可接受的鹽：其中 a、b和c為氮； 或a和b為氮，而c為-CH; 或b和c為氮，而a為-CH; 或a和c為氮，而b為-CH; R1選自烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、羥基環(huán)烷基、烷氧基環(huán)烷基、齒 代環(huán)烷基、環(huán)烯基、茚滿基、烷基羰基和芐基，其中所述芐基部分被0-3個選自鹵素、烷基、 環(huán)烷基、條基、炔基、羥基、氛基、鹵代烷基、烷氧基和鹵代烷氧基的取代基取代； R2選自烷基、環(huán)烷基、（(Ar1)烷基、（Ar1)環(huán)烷基、（(Ar1)環(huán)烷基）烷基、（(Ar1)烷基） 環(huán)烷基和（（(Ar1)烷基）環(huán)烷基）烷基； Ar1為被0-3個選自鹵素、羥基、氛基、烷基、環(huán)烷基、條基、炔基、鹵代烷基、烷氧基和齒 代烷氧基的取代基取代的苯基； R3為氫、烷基或環(huán)烷基； R4選自氣、鹵素、烷基、烷氧基、烷基氣基和烷基硫基； 或R2和R4可通過碳、氧、氮或硫原子連接以形成環(huán)； X選自 0、NR11、CONR11、NRnNR12和CONRnNR12; R11選自氣、烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、羥基環(huán)烷基、烷氧基環(huán)燒 基、鹵代環(huán)烷基、環(huán)烯基、茚滿基、烷基羰基和芐基，其中所述芐基部分被0-3個選自鹵素、 烷基、鹵代烷基、烷氧基和鹵代烷氧基的取代基取代； R12選自氣、烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、鹵代烷基、環(huán)烷基、羥基環(huán)烷基、烷氧基環(huán)燒 基、鹵代環(huán)烷基、環(huán)烯基、茚滿基、烷基羰基和芐基，其中所述芐基部分被0-3個選自鹵素、 烷基、鹵代烷基、烷氧基和鹵代烷氧基的取代基取代； R5選自烷基、環(huán)烷基、（環(huán)烷基）烷基、（烷基）環(huán)烷基、（（烷基））環(huán)烷基）烷基、橋一-環(huán)烷基、桐合^環(huán)烷基和螺^環(huán)烷基，并被〇 _4個選自鹵素、烷基、環(huán)烷基、羥基烷基、燒氧 基烷基、羥基、烷氧基、芐氧基、C02R13、C0N(R14) (R15)、N(R14) (R15)、四氫呋喃基、四氫吡喃基和 Ar2的取代基取代； 或R5為氫、N-烷氧基羰基哌啶基、哌啶酮基或Ar3; R13選自氣、烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、（（羥基烷基）烷氧基）烷氧基和（（烷氧基） 烷氧基）烷氧基； R14選自氣、烷基、環(huán)烷基、烷基幾基和烷氧基幾基； R15為氫或烷基； 或R14和R15與它們所連接的氮一起為氮雜環(huán)丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或嗎啉 基，并被0-2個選自烷基、烷基羰基和烷氧基羰基的取代基取代； Ar2選自苯基、茚滿基、四氫萘基、異色滿基、苯并二氧雜環(huán)戊烯基、吡啶基、吡唑基、 咪唑基和三唑基，并被0-3個選自氰基、鹵素、烷基、烯基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、 N(R16) (R17)和烷基CO的取代基取代； R16選自氣、烷基、環(huán)烷基、烷基幾基和烷氧基幾基； R17為氫或烷基； 或R16和R17與它們所連接的氮一起為氮雜環(huán)丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或嗎啉 基，并被0-2個選自烷基、烷基羰基和烷氧基羰基的取代基取代； Ar3選自苯基、茚滿基、芴基、聯(lián)苯基、三聯(lián)苯基、吡啶基、吡唑基、異噁唑基、咪唑基、噻 唑基、三唑基、苯并噁唑基、吲哚啉基和二苯并呋喃基，并被〇-3個選自氰基、鹵素、烷基、烯 基、鹵代烷基、環(huán)烷基、（C02R13)烷基、（C02R13)烯基、（C0N(R16) (R17))烷基、苯基、羥基、烷氧 基、鹵代烷氧基、烷基羰基、C02R13、C0N(R16) (R17)和PhCONHSOj^取代基取代； 或Ar3為被1個選自芐基、四唑基氧基、噻唑基、苯基吡唑基、甲基噁二唑基、噻二唑基、 三唑基、甲基三唑基、四唑基、吡啶基和二甲氧基嘧啶基的取代基取代的苯基；和 R6為烷基或環(huán)烷基； R7為烷基或環(huán)烷基； R8為烷基或環(huán)烷基； 或R7和R8可通過碳、氧、氮或硫原子連接以形成環(huán)； 或R6、R7和R8可通過碳、氧、氮或硫原子連接以形成二環(huán)； 或R5和R6可通過碳、氧、氮或硫原子連接以形成環(huán)； 或R5、R6和R7可通過碳、氧、氮或硫原子連接以形成二環(huán)或三環(huán)； 或R5、R6、R7和R8可通過碳、氧、氮或硫原子連接以形成三環(huán)或四環(huán)。2.化合物，包括其藥學(xué)上可接受的鹽，該化合物選自：3.化合物，包括其藥學(xué)上可接受的鹽，該化合物選自： ?%4. 組合物，其包含權(quán)利要求1的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。5. 組合物，其包含權(quán)利要求2的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。6. 組合物，其包含權(quán)利要求3的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。7. 權(quán)利要求4的組合物，其進(jìn)一步包含至少一種具有HCV的治療益處的其它化合物， 其中所述化合物選自干擾素、環(huán)孢菌素、白細(xì)胞介素、HCV金屬蛋白酶抑制劑、HCV絲氨酸蛋 白酶抑制劑、HCV聚合酶抑制劑、HCV解螺旋酶抑制劑、HCVNS4B蛋白抑制劑、HCV進(jìn)入抑制 劑、HCV組裝抑制劑、HCV釋出抑制劑、HCVNS5A蛋白抑制劑、HCVNS5B蛋白抑制劑和HCV 復(fù)制子抑制劑。8. 治療丙型肝炎感染的方法，其包括向患者給予治療有效量的權(quán)利要求1的化合物。9. 權(quán)利要求8的方法，其進(jìn)一步包括給予至少一種具有HCV的治療益處的其它化合物， 其中所述化合物選自干擾素、環(huán)孢菌素、白細(xì)胞介素、HCV金屬蛋白酶抑制劑、HCV絲氨酸蛋 白酶抑制劑、HCV聚合酶抑制劑、HCV解螺旋酶抑制劑、HCVNS4B蛋白抑制劑、HCV進(jìn)入抑制 劑、HCV組裝抑制劑、HCV釋出抑制劑、HCVNS5A蛋白抑制劑、HCVNS5B蛋白抑制劑和HCV 復(fù)制子抑制劑。
【專利摘要】公開了式I化合物，包括其藥學(xué)上可接受的鹽，以及組合物和使用這些化合物的方法。所述化合物具有對抗丙型肝炎病毒(HCV)的活性并可用于治療HCV感染者。
【IPC分類】C07D251/52, A61K31/53, A61P31/14
【公開號】CN104955461
【申請?zhí)枴緾N201480005978
【發(fā)明人】汪濤, 尹志偉, 張鐘興, P·M·斯科拉
【申請人】百時美施貴寶公司
【公開日】2015年9月30日
【申請日】2014年1月23日
【公告號】EP2948151A1, US20150322085, WO2014116766A1