一種交聯(lián)線粒體靶向阿霉素脂質(zhì)體及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物及其制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抗腫瘤藥物脂質(zhì)體及其制備方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 化療是治療癌癥的主要手段之一，但目前癌癥患者化療后的死亡率仍然居高不 下。多藥耐藥（multidrugresistance，MDR)是臨床上化療失敗的主要原因之一。阿霉素是 癌癥化療常用的藥物，但阿霉素等化療藥物的大量使用容易使細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性。腫瘤細(xì)胞 的耐藥性分為先天性與后天獲得性兩大類。研究表明，腫瘤細(xì)胞基因或基因表型發(fā)生變化 引起細(xì)胞凋亡通路改變，最終導(dǎo)致腫瘤先天耐藥性的出現(xiàn)。線粒體是細(xì)胞的"動力工廠"，同 時也是"自殺武器庫"，能啟動細(xì)胞凋亡通路，因而腫瘤細(xì)胞先天性耐藥與線粒體功能異常 密切相關(guān)。以線粒體作為抗癌藥物傳遞系統(tǒng)的靶點，將傳統(tǒng)化療藥物遞送到腫瘤細(xì)胞的線 粒體、促使線粒體啟動凋亡通路，釋放細(xì)胞色素C，激活caSpaSe9/3,從而實現(xiàn)腫瘤細(xì)胞"自 殺"式死亡，這將是克服腫瘤先天性耐藥性，提高腫瘤治療效果的一種有效手段。
[0003] CN104523723A提供了一種由嵌段共聚物葉酸-聚乙二醇-聚天冬氨酸、線粒體 靶向阿霉素、三苯基磷（TPP-D0X)和阿霉素構(gòu)成的線粒體靶向膠束載藥系統(tǒng)。該膠束載藥 系統(tǒng)具有線粒體靶向功能，但在將藥物阿霉素遞送到腫瘤細(xì)胞線粒體的過程中存在以下問 題：（1)葉酸是疏水性分子，在水溶液環(huán)境中，根據(jù)親疏水特性，葉酸分子更傾向于分布在 膠束的疏水內(nèi)核中而不是分布在膠束的親水外層，從而導(dǎo)致細(xì)胞對葉酸修飾的載體攝取率 低下，影響抗腫瘤效果；(2)三苯基磷是一種有機磷農(nóng)藥，對眼、上呼吸道、粘膜和皮膚有刺 激性，且有神經(jīng)毒性。毒理學(xué)研究資料顯示，LD50700mg/kg(大鼠經(jīng)口），800~1600mg/ kg(小鼠經(jīng)口），LC5012167mg/m3,4小時（大鼠吸入）。因此將三苯基磷用于藥用材料存在 安全隱患。目前未見有關(guān)具有線粒體靶向功能的阿霉素脂質(zhì)體報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種交聯(lián)線粒體靶向阿霉素脂質(zhì)體 及其制備方法，以使該脂質(zhì)體不僅具有線粒體靶向性，而且腫瘤細(xì)胞攝取量大，安全性高。
[0005] 本發(fā)明所述交聯(lián)線粒體靶向阿霉素脂質(zhì)體，由鹽酸阿霉素、磷脂、膽固醇和可交 聯(lián)線粒體靶向聚乙二醇化磷脂藥用材料組成，所述鹽酸阿霉素與磷脂的質(zhì)量比為1 : (5~ 20)，所述磷脂、膽固醇、可交聯(lián)線粒體靶向聚乙二醇化磷脂藥用材料的摩爾比為（50~ 90) : (2~47) : (3~8)，所述可交聯(lián)線粒體靶向聚乙二醇化磷脂藥用材料的結(jié)構(gòu)式為
[0006]
[0007] 所述結(jié)構(gòu)式中，n= 10,12,14,16。
[0008] 上述交聯(lián)線粒體靶向阿霉素脂質(zhì)體，所述磷脂為大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化卵 磷脂中的一種。
[0009] 本發(fā)明所述交聯(lián)線粒體靶向阿霉素脂質(zhì)體的制備方法，工藝步驟如下：
[0010] (1)可交聯(lián)線粒體靶向聚乙二醇化磷脂藥用材料的制備
[0011] 以脂肪酸酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-馬來酰亞胺、多肽D- (KLAKLAK) 2-C5和有機 堿為原料，多肽d-(klaklak)2-c5、有機堿、脂肪酸酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-馬來酰亞胺 的摩爾比為（1~3) : (1~3) :1，所述多肽D-(KLAKLAK) 2-C5的氨基酸序列為序列表中SEQ IDN0 :1 所述；
[0012] 在氮氣保護下，將脂肪酸酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-馬來酰亞胺、有機堿和第 一溶劑混合均勻得到第一溶液，所述第一溶劑的用量應(yīng)使第一溶液中脂肪酸酰磷脂酰乙醇 胺-聚乙二醇-馬來酰亞胺的濃度為100~300mmol/L;
[0013] 在氮氣保護下，將多肽D- (KLAKLAK)2-(：5溶于第二溶劑中得到第二溶液，第二溶劑 的用量應(yīng)使第二溶液中多肽D-(KLAKLAK)2-(：5的濃度為100~900mol/L;
[0014] 將第一溶液和第二溶液混合，在避光、攪拌下于20~40°C反應(yīng)12~48小時，反應(yīng) 結(jié)束后除去溶劑得到固態(tài)物質(zhì)，將所得固態(tài)物質(zhì)用氯仿或二甲亞砜溶解后過濾掉不溶物， 收集濾液，除去濾液中的溶劑即得到可交聯(lián)線粒體靶向聚乙二醇化磷脂藥用材料；
[0015] (2)交聯(lián)線粒體靶向阿霉素脂質(zhì)體的制備
[0016] 將磷脂、膽固醇和步驟（1)制備的可交聯(lián)線粒體靶向聚乙二醇化磷脂藥用材料溶 于第三溶劑中得到第三溶液，所述磷脂、膽固醇、可交聯(lián)線粒體靶向聚乙二醇化磷脂藥用材 料的摩爾比為（50~90) : (2~47) : (3~8)，所述第三溶劑用量應(yīng)使所得第三溶液中磷脂 濃度為1~10mm〇l/L，去除第三溶劑得到脂膜，將所得脂膜與濃度為250~350mmol/L的硫 酸氨緩沖液混合并經(jīng)超聲分散均勻得到脂質(zhì)體懸液，所述硫酸氨緩沖液的用量應(yīng)使脂質(zhì)體 懸液中磷脂濃度為〇. 1~10mm〇l/L，將所得脂質(zhì)體懸液裝入半透膜中，將半透膜浸入去離 子水中透析4~12小時，透析結(jié)束后，將透析后的脂質(zhì)體懸液與濃度為1~10mg/mL的阿 霉素鹽酸鹽水溶液混合均勻得到混合懸液，所述阿霉素鹽酸鹽水溶液的用量應(yīng)使所得混合 懸液中鹽酸阿霉素與磷脂的質(zhì)量比為1 : (5~20)，然后在持續(xù)通入氧氣和攪拌的條件下向 所得混合懸液中加入乙二硫醇并反應(yīng)〇. 5~24小時，加入的乙二硫醇與混合懸液中可交聯(lián) 線粒體靶向聚乙二醇化磷脂藥用材料的摩爾比為（1~5) :1，反應(yīng)時間屆滿后，將游離藥物 和未反應(yīng)的乙二硫醇去除，即得到交聯(lián)線粒體靶向阿霉素脂質(zhì)體。
[0017] 上述方法中，所述脂肪酸酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-馬來酰亞胺為脂肪酸酰磷 脂酰乙醇胺為二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-馬來酰胺、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇 胺-聚乙二醇2000-馬來酰胺、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-馬來酰胺、二月桂 酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-馬來酰胺中的一種。
[0018] 上述方法中，步驟（1)中所述有機堿為三乙胺、4-二甲氨基吡啶或者N、N-二異丙 基乙胺中的任一種。
[0019] 上述方法中，步驟（1)中所述第一溶劑為二氯甲烷或氯仿。
[0020] 上述方法中，第二溶劑為甲醇、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜中的一種。
[0021] 上述方法中，步驟（2)中所述第三溶劑為三氯甲烷，或二氯甲烷與甲醇以體積比 (1~3) :1組合得到的組合溶劑。
[0022] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：
[0023] 1、本發(fā)明提供了一種新的具有交聯(lián)結(jié)構(gòu)和線粒體靶向功能的阿霉素脂質(zhì)體。
[0024] 2、本發(fā)明所述交聯(lián)線粒體靶向阿霉素脂質(zhì)體中的藥用材料可交聯(lián)線粒體靶向聚 乙二醇化磷脂具有聚乙二醇鏈，從而具有長循環(huán)功能功能（實施例6)，并具有可交聯(lián)結(jié)構(gòu) 巰基，脂質(zhì)體在加入乙二硫醇并通氧氣條件下以共價鍵的形式形成二硫鍵交聯(lián)結(jié)構(gòu)，使得 脂質(zhì)體進入人體后在血液循環(huán)中具有良好的穩(wěn)定性，不容易解體，有利于脂質(zhì)體跨越血管 屏障遞送藥物。同時由于腫瘤血管壁上皮細(xì)胞間隙比正常血管壁的上皮細(xì)胞間隙大，穩(wěn)定 的載藥脂質(zhì)體在體內(nèi)的循環(huán)時間長有利于載藥脂質(zhì)體從腫瘤血管滲出，通過增強滲透與滯 留效應(yīng)（EPR效應(yīng)）使更多的載藥脂質(zhì)體進入腫瘤組織，因此具有更好的腫瘤組織靶向性， 有利于提高耐藥腫瘤治療效果。
[0025] 3、本發(fā)明所述交聯(lián)線粒體靶向阿霉素脂質(zhì)體進入腫瘤組織間隙后，由于該載藥脂 質(zhì)體zeta電位為正，更容易通過靜電作用吸引顯負(fù)電荷的腫瘤細(xì)胞攝取，加之載藥脂質(zhì)體 具有交聯(lián)結(jié)構(gòu)，穩(wěn)定性高，能避免脂質(zhì)體解體，避免藥物提前釋放，順利穿透腫瘤細(xì)胞外基 質(zhì)和腫瘤細(xì)胞膜的質(zhì)膜屏障，將藥物遞送至腫瘤細(xì)胞內(nèi)，因此細(xì)胞攝取量大（見實施例7)， 有利于提高耐藥腫瘤治療效果。
[0026] 4、本發(fā)明所述交聯(lián)線粒體靶向阿霉素脂質(zhì)體進入腫瘤細(xì)胞后，因腫瘤細(xì)胞內(nèi)的谷 胱甘肽濃度高于血液和組織間隙，脂質(zhì)體因二硫鍵形成的交聯(lián)結(jié)構(gòu)在谷胱甘肽還原作用下 斷裂，有利于脂質(zhì)體進入線粒體后藥物釋放，有更多的藥物釋放到線粒體中，因此線粒體攝 取量大，線粒體靶向性好，從而促使線粒體啟動凋亡通路，更有效的抑制多藥耐藥腫瘤的生 長（實施例8)，有利于提高耐藥腫瘤治療效果。
[0027] 5、本發(fā)明所述交聯(lián)線粒體靶向阿霉素脂質(zhì)體以無毒副作用的多肽 D- (KLAKLAK) 2-C5為線粒體靶向分子，同時穩(wěn)定性高，不容易解體，在血液循環(huán)中藥物釋放緩 慢，因此對正常組織的毒副作用小很小，從而保證了脂質(zhì)體的使用安全性。