br>[0070] Ξ、實(shí)驗(yàn)方法
[0071] 1、分組
[0072] 實(shí)驗(yàn)用的新西蘭兔先進(jìn)行編號(hào)1~20號(hào)，按隨機(jī)數(shù)字表法，隨機(jī)分配到A、B兩組，每 組10只，其中A組灌胃給藥生理鹽水，B組灌胃給藥本發(fā)明制劑2g/ml。
[0073] 2、給藥方法
[0074] A、B兩組分別灌胃相應(yīng)試劑6ml/次，3次/日，灌胃時(shí)間間隔4小時(shí)。連續(xù)給藥7d，停 藥觀察3d。
[0075] 3、觀察指標(biāo)
[0076] 3.1 -般情況
[0077] 新西蘭兔的體重、皮毛、進(jìn)食、飲水情況，行為學(xué)表現(xiàn)，如精神狀態(tài)、啤吟、鳴叫等。
[0078] 3.2臟器及病理學(xué)檢測
[0079] 3.2.1理化檢測
[0080] 在給藥前，連續(xù)給藥結(jié)束時(shí)，觀察期結(jié)束時(shí)分別收集家兔尿液、采血收集血液，進(jìn) 行理化檢測，分析相應(yīng)指標(biāo)。
[0081] 3.2.2臟器觀察
[0082] 實(shí)驗(yàn)過程中，觀察有無家兔死亡，如有死亡，立即解剖，觀察各臟器，并摘取各臟器 進(jìn)行病理學(xué)檢查；如無死亡，待觀察3d后，耳緣靜脈注射空氣針處死，解剖探查各臟器，并計(jì) 算臟器指數(shù)，并對(duì)主要臟器進(jìn)行比例學(xué)觀察。
[008；3] 4、結(jié)果
[0084] 4.1 -般情況
[0085] 本發(fā)明制劑給藥組家兔與空白對(duì)照組家兔進(jìn)行比較分析，體重變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差 異，在進(jìn)食、飲水量的比較中，無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，行為學(xué)表現(xiàn)中如精神狀態(tài)等，通過肉眼觀 察記錄，無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
[00化]4.2臟器及病理學(xué)檢測
[0087] 4.2.1理化檢測
[0088] 在給藥前，連續(xù)給藥結(jié)束時(shí)，觀察期結(jié)束時(shí)分別收集家兔尿液、采血收集血液，進(jìn) 行理化檢測，分析相應(yīng)指標(biāo)，組內(nèi)比較，給藥前后及觀察期結(jié)束，無明顯異常，統(tǒng)計(jì)學(xué)無明顯 差異;組間比較，本發(fā)明制劑各給藥組與空白對(duì)照組比較，無明顯差異。
[0089] 4.2.2臟器觀察
[0090] 實(shí)驗(yàn)過程中，無家兔死亡，因此按照實(shí)驗(yàn)要求，待觀察3d后，耳緣靜脈注射空氣針 處死，解剖探查各臟器，并計(jì)算臟器指數(shù)，并對(duì)主要臟器進(jìn)行比例學(xué)觀察。
[0091] 各組家兔在打開胸腔、腹腔后，肉眼觀察，臟器排列整齊、無粘連、無積液、無出血 等，摘取各臟器并稱重，計(jì)算臟器指數(shù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，給藥組與空白對(duì)照組進(jìn)行比較，無明 顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
[OOW]日、結(jié)論
[0093] 本發(fā)明中藥口服液制劑家兔給藥量為18g/kg/d，對(duì)應(yīng)60kg成人的生藥給藥量為 54g/kg/d，然而60kg成人日給藥量為0.5g/kg，新西蘭兔給藥量分別為人的108倍，通過急性 毒理實(shí)驗(yàn)研究觀察，本發(fā)明制劑無明顯急性毒副作用，停藥觀察3d，無遲發(fā)毒性反應(yīng)，現(xiàn)代 藥理學(xué)認(rèn)為，對(duì)于藥物急性毒性實(shí)驗(yàn)，最大耐受量相當(dāng)于人臨床日用劑量100倍W上而動(dòng)物 無死亡，無明顯毒性反應(yīng)情況出現(xiàn)時(shí)，該藥是安全的。本發(fā)明口服液給藥劑量為人的臨床用 藥108倍，且動(dòng)物無毒性反應(yīng)，可W認(rèn)定，本藥品臨床用藥是安全的。
[0094] 本發(fā)明家兔長期毒性試驗(yàn) [00巧]一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0096] 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為40只新西蘭大白兔，月齡9~12月，體重2.5~3.0kg，雌性。山東中醫(yī)藥 大學(xué)附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中屯、提供。
[0097] 二、實(shí)驗(yàn)試劑
[009引本發(fā)明實(shí)施例1制備的口服液1:濃縮至含生藥濃度分別為2g/ml，Ig/ml，0.5g/ml， 放置于4°C冰箱中保存，備用。
[0099] Ξ、實(shí)驗(yàn)方法
[0100] 1、分組
[0101] 實(shí)驗(yàn)用的新西蘭兔先進(jìn)行編號(hào)1~40號(hào)，按隨機(jī)數(shù)字表法，隨機(jī)分配到A、B、C、D四 組，每組10只，其中A組灌胃給藥生理鹽水，B組灌胃給藥本發(fā)明口服液制劑低劑量0.5g/ml、 C組灌胃給藥本發(fā)明口服液制劑中劑量Ig/ml、灌胃給藥本發(fā)明口服液制劑高劑量2g/ml。
[0102] 2、給藥方法
[010引 A、B、C、D四組，灌胃相應(yīng)試劑3ml/次，3次/日，灌胃時(shí)間間隔4小時(shí)。連續(xù)給藥28d， 停藥觀察7d。
[0104] 3、觀察指標(biāo)
[0105] 3.1 -般情況
[0106] 新西蘭兔的體重、皮毛、進(jìn)食、飲水情況，行為學(xué)表現(xiàn)，如精神狀態(tài)、啤吟、鳴叫等。
[0107] 3.2臟器及病理學(xué)檢測 [010引 3.2.1理化檢測
[0109] 在給藥前，連續(xù)給藥結(jié)束時(shí)，觀察期結(jié)束時(shí)分別收集家兔尿液、采血收集血液，進(jìn) 行理化檢測，分析相應(yīng)指標(biāo)。
[0110] 3.2.2臟器觀察
[0111] 實(shí)驗(yàn)過程中，觀察有無家兔死亡，如有死亡，立即解剖，觀察各臟器，并摘取各臟器 進(jìn)行病理學(xué)檢查；如無死亡，待觀察7d后，耳緣靜脈注射空氣針處死，解剖探查各臟器，并計(jì) 算臟器指數(shù)，并對(duì)主要臟器進(jìn)行比例學(xué)觀察。
[Om] 4、結(jié)果
[0113] 4.1 -般情況
[0114] 本發(fā)明制劑給藥的Ξ組家兔與空白對(duì)照組家兔進(jìn)行比較分析，體重變化無統(tǒng)計(jì)學(xué) 差異，在進(jìn)食、飲水量的比較中，無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，行為學(xué)表現(xiàn)中如精神狀態(tài)等，通過肉眼 觀察記錄，無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
[0115] 4.2臟器及病理學(xué)檢測
[0116] 4.2.1理化檢測
[0117] 在給藥前，連續(xù)給藥結(jié)束時(shí)，觀察期結(jié)束時(shí)分別收集家兔尿液、采血收集血液，進(jìn) 行理化檢測，分析相應(yīng)指標(biāo)，組內(nèi)比較，給藥前后及觀察期結(jié)束，無明顯異常，統(tǒng)計(jì)學(xué)無明顯 差異;組間比較，本發(fā)明制劑各給藥組與空白對(duì)照組比較，無明顯差異。
[011引 4.2.2臟器觀察
[0119] 實(shí)驗(yàn)過程中，無家兔死亡，因此按照實(shí)驗(yàn)要求，待觀察7d后，耳緣靜脈注射空氣針 處死，解剖探查各臟器，并計(jì)算臟器指數(shù)，并對(duì)主要臟器進(jìn)行比例學(xué)觀察。
[0120] 各組家兔在打開胸腔、腹腔后，肉眼觀察，臟器排列整齊、無粘連、無積液、無出血 等，摘取各臟器并稱重，計(jì)算臟器指數(shù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各給藥組與空白對(duì)照組進(jìn)行比較，無 明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
[0121] 5、結(jié)論
[0122] 本發(fā)明制劑家兔給藥量分別為9g/kg/d、4.5g/kg/d、2.25g/kg/d，對(duì)應(yīng)60kg成人的 生藥給藥量為27g/kg/d、13.5g/kg/d、6.75g/kg/d，然而60kg成人日給藥量為ο. 5g/kg，新西 蘭兔給藥量分別為人的54倍、27倍、13.5倍，通過長期給藥觀察，本發(fā)明制劑無明顯毒副作 用，無蓄積毒性，因此，臨床給人用藥可W認(rèn)為是安全的。
[0123] 實(shí)施例5臨床研究
[0124] 1、研究對(duì)象來源
[0125] 全部病例均來自骨科2013年2月至2013年11月份的住院病人40例。
[0126] 2、診斷標(biāo)準(zhǔn)
[0127] 2.1西醫(yī)學(xué)上對(duì)股骨干粉碎性骨折的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《骨與關(guān)節(jié)損傷》一書。其中， Winquist和化nsen按粉碎的骨塊多少分成五級(jí)：
[0128] I級(jí):粉碎骨折有小的蝶形骨塊，占骨的寬度小于25%。
[0129] Π 級(jí):蝶形骨塊較大，相當(dāng)于50%或是小于骨的寬度;如骨折遠(yuǎn)離近側(cè)或遠(yuǎn)側(cè)的干 髓端的展開部位，主要的近側(cè)和遠(yuǎn)側(cè)骨折塊之間有很好的接觸，上述兩種類型在長度和旋 轉(zhuǎn)上是相對(duì)穩(wěn)定的。
[0130] 虹級(jí):粉碎的骨折塊有一個(gè)大于50%骨的寬度，近側(cè)和遠(yuǎn)側(cè)骨折塊在骨皮質(zhì)的連 續(xù)性上，僅保留有小的骨尖，此類型骨折常在長度和旋轉(zhuǎn)上是不穩(wěn)定的。
[0131] IV級(jí):節(jié)段性的粉碎骨折，在主要的近側(cè)和遠(yuǎn)側(cè)的骨折塊間沒有骨的接觸，長度和 旋轉(zhuǎn)上均不穩(wěn)定。
[0132] V級(jí)：中間節(jié)段骨折塊呈粉碎性，并常是開放性骨折，很不穩(wěn)定。
[0133] 2.2中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)（參照2005年國家中醫(yī)藥管理局發(fā)布的《中醫(yī)病癥診斷療效標(biāo) 準(zhǔn)》擬定），中醫(yī)學(xué)上對(duì)股骨干粉碎性骨折診斷參照《中醫(yī)骨傷科學(xué)》一書。
[0134] (1)有明顯的外傷史，傷后局部腫脹、疼痛、壓痛、功能喪失，出現(xiàn)短縮、成角或旋轉(zhuǎn) 崎形，有異?；顒?dòng)，可扣及骨擦音。
[0135] (2)嚴(yán)重移位的股骨下骨折，在姻窩部有巨大的血腫，小腿感覺和運(yùn)動(dòng)障礙，足 背、胚后動(dòng)脈搏動(dòng)減弱或消失，末梢血液循環(huán)障礙，應(yīng)考慮有血管、神經(jīng)的損傷。
[0136] (3)損傷嚴(yán)重者，由于劇痛和出血，早期可合并創(chuàng)傷性休克。
[0137] (4)粉碎骨折或多發(fā)性骨折、嚴(yán)重?cái)D壓傷，還可并發(fā)脂肪檢塞或擠壓綜合征。
[0138] (5巧線片可顯示骨折的部位、類型及移位情況。
[0139] 3、納入標(biāo)準(zhǔn)
[0140] (1)凡符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)，閉合性股骨千骨折按Winquist和化nsen分級(jí)屬III級(jí)、 IV級(jí)和V級(jí)骨折，需行手術(shù)復(fù)位內(nèi)固定并植骨術(shù)的患者
[0141] (2)愿意參與整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程，并簽署知情同意書的患者。
[0142] 4、排除標(biāo)準(zhǔn)
[0143] (1)股骨干骨折按Winquist和化nsen分級(jí)屬I級(jí)、Π 級(jí)骨折。
[0144] (2)開放性骨折的患者。
[0145] (3)骨折波及到踩關(guān)節(jié)、膝關(guān)節(jié)面的患者。
[0146] (4)年齡大于70歲或小于16歲的患者。
[0147] (5)合并有嚴(yán)重的屯、腦血管疾患、精神病，無法耐受手術(shù)治療者。
[014引（6)妊娠及哺乳期的患者。
[0149] (7)凝血功能異常的患者。
[0150] 5、病例剔除和脫落標(biāo)準(zhǔn)
[0151] (1)未按規(guī)定治療，無法判斷療效者。
[0152] (2)治療過程中發(fā)生意外事件而不能堅(jiān)持治療者。
[0153] (3)治療過程中不配合治療者。
[0154] (4)資料不全影響療效或安全性判斷者。
[01對(duì) 6、病例分組
[0156] 取樣本40例，分A組(單純植骨組，η = 20)和B組(植骨+服用本發(fā)明制劑組，η = 20)。
[0157] 所有患者按入院順序編號(hào)1~40號(hào)，應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分配到Α、Β兩組中。
[015引 7、分組資料
[0159] A組20例患者中男14例，女6例，年齡17歲~68歲，平均年齡35.85歲；按Winquist和 化nsen分型，III型8例，IV型10例，V型2例。B組20例患者中，男12例，女8例，年齡16歲~69 歲，平均年齡36.26歲；按Winquist和化nsen分型，III型9例，IV型9例，V型2例。W下是兩組 患者的性別年齡分布、致傷因素及骨折類型情況:兩組患者的性別經(jīng)X2檢驗(yàn)和年齡經(jīng)t檢驗(yàn) 后P〉〇. 05,具有可比性。
[0160] 8、治療方法
[0161] 8.1、簽署知情同意書
[0162] 對(duì)符合上述納入標(biāo)準(zhǔn)患者，告知參與本實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、治療方法及可能出現(xiàn)的并發(fā)癥， 愿意參與此研究者，填寫知情同意書后，列為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。
[0163] 8.2、術(shù)前準(zhǔn)備
[0164] 所有受試者術(shù)前經(jīng)抽血檢查（包括血尿糞Ξ大常規(guī)、肝腎功、凝血因子、術(shù)前免疫 學(xué)及乙肝兩對(duì)半等），拍片，雙下肢深靜脈彩超，肺功能檢查(年齡大于60歲患者），均未見手 術(shù)禁忌癥，簽署手術(shù)志愿書及參與本實(shí)驗(yàn)知情同意書。
[01化]8.3、異種脫蛋白骨
[0166] ①生產(chǎn)公司：天津中津生物發(fā)展有限公司。②結(jié)構(gòu)成分：由牛骨制成的異種骨組織 填充材料保留了一定的成骨誘導(dǎo)活性成分。③生產(chǎn)許可證號(hào)：津（食）藥監(jiān)械生產(chǎn)證 20130518號(hào)。④產(chǎn)品注冊(cè)號(hào)：國食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2004第3460617號(hào)。
[0167] 8.4、手術(shù)方法
[0168] 麻醉起效后，患者取仰邸位，常規(guī)行雙下肢消毒，鋪巾及貼皮膚保護(hù)膜；W骨折線 為中屯、，取大腿遠(yuǎn)近兩端處切口分別長約6cm，縱形切開皮膚、皮下組織及闊筋膜，顯露股外 側(cè)肌，縱向純性分離股外側(cè)肌，拉鉤牽開上下軟組織，顯露骨折處遠(yuǎn)近兩端，可觸及股骨骨 折斷端，較大的骨折塊先用螺絲釘固定，選擇合適的鋼板，鉆孔、絲攻，先分別于骨折遠(yuǎn)、近 端的鋼板螺孔上鉆孔、絲攻，再依次旋入各5枚鎖定螺釘。術(shù)中C臂機(jī)透視見鋼板螺絲釘固定 在位可靠，再用大量生理鹽水沖洗術(shù)區(qū)，取異種脫蛋白骨植入骨折斷端;用可吸收線縫合闊 筋膜張肌、筋膜層、皮下；1