號線縫合皮膚;切口內留置1條輸血器引流管，縫合固定后外敷無 菌敷料。
[0169] 8.5、本發(fā)明實施例1制備的口服液1
[0170] 本發(fā)明實施例1制備的口服液1，置于4°C冰箱中保存?zhèn)溆?。服用時先放置于溫水中 復溫至20~25°C。
[0171] 8.6、術后處理
[0172] 所有患者術后予屯、電監(jiān)護、去枕平邸6小時。術后及時復查血常規(guī)、肝腎功及電解 質四項。常規(guī)使用抗生素預防感染，予止痛、能量支持，予一級護理，抬高患肢，切口更換敷 料等。所有受試者再進行W下處理：
[0173] A組:患者術后未給予服用本發(fā)明實施例1制備的口服液1;
[0174] B組:患者術后第一天開始服用本發(fā)明實施例1制備的制劑口服液l，20ml/次，2次/ 日，早、晚飯后半小時服，連續(xù)服用6周。
[0175] 8.7、療效評價指標
[0176] 8.7.1術后第1天、3天、5天、7天、9天及12天切口換藥時觀察創(chuàng)口反應情況，標準如 下：
[0177] (1)優(yōu):局部無滲液，創(chuàng)口周圍無紅腫。
[0178] (2)良：局部少許滲液，周圍輕度紅腫。
[0179] (3)差:局部滲液較多，周圍明顯紅腫。
[0180] 8.7.2術后第1天、3天、5天、7天、9天及12天切口換藥時觀察創(chuàng)口愈合情況，創(chuàng)口愈 合等級如下：
[0181] 甲級:愈合優(yōu)良，即沒有不良反應的初期愈合。
[0182] 乙級:愈合欠佳，即愈合有缺點，但切口未化脈。
[0183] 兩級:切口化脈，即因化脈需要將縫合的切口縫線拆除或切口引流。
[0184] 8.7.3術后患肢疼痛視覺模擬評分(visual analogue scale，VAS)
[0185] A組和B組患者對患肢疼痛情況進行評分的時間均為手術后的第4周、8周、12周，由 同一名主治醫(yī)生進行檢查和評價，并且該醫(yī)生對本研究完全不知情?；贾弁辞闆r采用VAS 評分標準。
[0186] 按患肢的疼痛情況，進行評分(0分~10分）：
[0187] (1)0 分:無痛。
[0188] (2)3分W下:有輕微的疼痛，患者能忍受。
[0189] (3)4分~6分:患者疼痛并影響睡眠，尚能忍受。
[0190] (4) 7分~10分:患者有漸強烈的疼痛，疼痛難忍。
[0191] 8.7.4影像學評分
[0192] 通過拍攝患肢正側位X線片來比較A、B兩組患者骨折端的骨挪生長情況及骨折線 是否消失，隨訪時間均為手術后第4周、8周及12周，拍片均由同一名放射科醫(yī)生完成。評價 骨折端骨挪生長情況采用Lane-san化uX線評分標準。
[0193] 8.8、統(tǒng)計學處理方法
[0194] 所得的數(shù)據(jù)通過SPSS15.0軟件進行分析處理，數(shù)據(jù)結果均用表示，率用百分 比表示，計數(shù)資料采用X2檢驗，計量資料采用兩獨立樣本t檢驗進行分析處理，P<0.05時差 異有統(tǒng)計學意義，P〉〇. 05時差異無統(tǒng)計學意義。
[0195] 9、結果
[0196] 本實驗共有1例研究對象治療期間因失訪導致資料不全，屬剔除脫落病例，脫落病 例實驗過程中及時補充。
[0197] 9.1、術后一般情況：
[019引術后創(chuàng)口反應情況:A組優(yōu)12例，良4例，差4例;B組優(yōu)18例，良2例，差0例。創(chuàng)口愈合 情況:A組優(yōu)11例，良5例，差4例;B組優(yōu)17例，良3例，差ο例。術后患者均出現(xiàn)患肢疼痛，經(jīng)口 服塞來昔布止痛藥或肌肉注射帕瑞昔布注射液后癥狀緩解;術后2~3天內患肢較健側腫脹 0.5cm~1.0cm，指導行患肢股四頭肌等肌肉靜力收縮及膝、踩及足址屈伸活動，并抬高患肢 等處理后腫脹消退，術后10~14天切口愈合良好后拆除縫線；無1例患者出現(xiàn)切口紅腫、化 脈、膚溫升高等感染征象;所有患者髓關節(jié)、膝關節(jié)活動正常，無并發(fā)關節(jié)內腫脹積液。
[0199] 表1創(chuàng)口反應情況比較
[0200]
[0204] 9.2、療效評價：
[0205] 9.2.1患肢疼痛評價
[0206] A組和B組患者于手術后第4周、8周、12周采用疼痛視覺模擬評分(VAS評分)方法對 患肢進行評分。兩組患者術后第4周、8周、12周時，與A組相比較，患肢的疼痛視覺模擬評分 結果有統(tǒng)計學上差異(P<〇. 05)。
[0207] 9.2.2影像學評價
[0208] 兩組患者于術后第4周、8周、12周時采用Lane-San化U X線評分標準對患肢骨挪生 長情況進行評分。術后第4周、8周、12周X線片評分結果顯示，A、B兩組患者的骨折端骨挪生 長情況差異有統(tǒng)計學意義(P<〇.05)，而B組患者的評分在各個時間點均大于A組。
[0209] 10、結論
[0210] 10.1、術后觀察創(chuàng)口反應情況及愈合情況顯示:本發(fā)明制劑不會影響植骨術后創(chuàng) 口的正常愈合，也不會發(fā)生排斥反應。
[0211] 10.2、術后疼痛視覺模擬評價結果表明：本發(fā)明制劑可W改善患者術后疼痛癥狀。
[0212] 10.3、術后影像學結果顯示:本發(fā)明制劑能增加植骨區(qū)域的骨挪量，促進異種脫蛋 白骨修復骨缺損。
[0213] 實施例6動物實驗研究
[0214] -、實驗動物
[0215] 實驗動物為60只新西蘭大白兔，月齡9~12月，體重2.5~3.0kg，雌性。由山東中醫(yī) 藥大學附屬醫(yī)院實驗動物中屯、提供。
[0216]二、主要實驗用品
[0217]鹽酸氯胺酬:福建古田藥業(yè)郁良公司，國藥準字:冊5020148
[0218] 鹽酸賽拉嗦注射液(陸眠寧II):吉林省華牧動物保健品有限公司，獸藥字(2013) 070011582
[0219] 鹽酸利多卡因注射液：山東華魯制藥有限公司，國藥準字H3702214
[0220] 本發(fā)明實施例1制備的口服液1:濃縮至含生藥濃度為2mg/ml，放置于4°C冰箱中保 存，備用。
[0221] 立、試驗方法
[0222] 1、異種脫蛋白骨（deproteinized bone,DPB)的制備
[0223] 按照文獻報道的方法選用6月齡的小牛下肢長骨干號端松質骨，剔除軟組織，切割 成細小條狀，采用20%雙氧水在37°C水浴箱中解育，脫蛋白72h，每24h更換雙氧水1次，完成 脫蛋白后，再用乙酸循環(huán)脫脂4她，制成密集微孔的小牛脫蛋白松質骨，環(huán)氧乙燒消毒后備 用。
[0224] 2、動物分組
[0225] 實驗用的新西蘭兔先進行編號1~60號，按隨機數(shù)字表法，隨機分配到A、B、C、D四 組，A、B、C組每組15只，D組5只。
[0226] 3、動物造模
[0227] 實驗動物術前禁食12h，將手術器械、無菌布單及異種脫蛋白骨等相關實驗用品打 包好，送至本院供應室進行高壓蒸汽消毒，備齊藥品及其它用具。稱重后，取耳緣靜脈注射 3 %戊己比妥鋼溶液進行全身麻醉，劑量W體重大小而定，1血/kg。2~3inin麻醉起效后，俯 邸位固定于手術臺上，配合局部肌肉注射2%利多卡因（ImL/kg)浸潤麻醉，即可達到滿意的 麻醉效果。用直尺測量新西蘭兔榜骨長度或者測量榜骨周徑，所測得榜骨全長的10 %或者 周徑的3~4倍，即為制作骨缺損所需的長度。接著用8%硫化鋼與日用洗衣粉按4:1配比成 溶液，W大棉棒薩取涂抹左尺榜骨，脫毛后W清水洗凈。用4層消毒紗布包裹兔左前肢末端 毛未除凈處，并貼上保護膜，2%艦町、75%酒精消毒Ξ遍，鋪無菌布單，W左前肢前內側為 手術切口，長度約6cm，切口貼無菌手術保護膜。切開皮膚、皮下組織，將肌肉拉向兩側，暴露 榜骨中下段，將擋板放置于尺榜骨之間保護尺骨，直尺測量出榜骨中下段長度約1.5cm(相 同年齡和體重的兔子，其榜骨長度的10%)確定上下截骨點，用彎刀環(huán)形切除上下兩截骨點 的骨膜，采用線銀銀除1.5cm長的格骨(包括骨膜），造成臨界性骨缺損。
[0。引 A、B兩組于骨缺損處植入異種脫蛋白骨，C、D兩組骨缺損處未作植骨處理，四組動 物左尺燒骨處均不做固定，依次縫合筋膜、皮膚，無菌敷料包扎切口。
[02巧]4、術后處理
[0230] 手術后的新西蘭兔于動物實驗室分籠飼養(yǎng)，配合肌注青霉素鋼注射液160萬單位， 2次/日，連續(xù)3天，預防感染發(fā)生。術后第1天，常規(guī)使用5%艦伏溶液消毒切口，并及時更換 切口敷料，1/日，至術后8~10天切口拆線。手術后24小時，A、C組新西蘭兔給予灌服本發(fā)明 實施例1制備的口服液1，3ml/次，1次/日，晚6:00~7:00，連續(xù)服用6周;B、D組術后未給予中 藥干預。
[0231] 四、觀察指標
[0232] 1、X線片檢查
[0233] 四組新西蘭兔于術后第4周、8周、12周拍攝左尺燒骨正位X線片，投照距離為 100cm，曝光條件為：50KV，10.085，120mA。拍片后著重觀察骨移植區(qū)骨挪陰影，骨挪生長情 況及植入材料與宿主骨融合程度等。按照Lane-SamlhuX線片評分方法(見表3)評價骨愈合 修復骨缺損情況。
[0234] 表3 Lane-San化uX線片評分法
[0235]
[0237] 2、大體標本觀察
[0238] 術后4、8、12周，A、B、C組分別處死6只新西蘭兔，D組處死1只新西蘭兔，取左尺榜骨 植骨區(qū)域標本作大體觀察。
[0239] 3、生物力學測試
[0240] 術后4、8、12周，A、B兩組分別處死6只新西蘭兔，行生物力學測試。取出左榜骨，剔 除表面軟組織后，對標本進行包埋固定。測試溫度為25°C，濕度75%。在美國扣〇111義1， MTX858萬能材料生物力學測量實驗機上進行生物力學測定。首先，標記好各組標本，將標本 固定在測試儀的夾具上。先進行3次預加載試驗，W消除標本的松弛、蠕變等影響因素。①進 行軸向抗載荷試驗:縮載荷最大值預設為350N，加載速度為1mm/min，從零開始加載至350N 止，儀器自動記錄標本的剛度數(shù)值。②進行扭轉試驗:將標本的兩端固定模具內，燒骨近端 加 W載荷使之產(chǎn)生旋轉的扭力，扭轉載荷預設為3N · rn，加載速率為1.5NWS，從零開始加載 至3N止，分級加載，儀器自動記錄測定的剛度數(shù)據(jù)。
[0241] 4、骨密度測量
[0242] 術后4、8、n周，A、B兩組新西蘭兔的燒骨標本做完生物力學測試后，用骨剪取下植 骨區(qū)域包括兩斷端部分自體骨，用生理鹽水紗布包裹后，雙層塑料袋密封，放置于冰箱中備 用。進行骨密度測定時，需先將標本復溫。骨密度測定儀型號是:美國Lunar公司生產(chǎn)的DPX- IQ型。采用手動分析模式測定各組標本的骨密度值(BMD)。采用統(tǒng)計學軟件對結果進行分 析。每個標本所選定的測量區(qū)域的位置、面積均相同。
[0243] 5、組織學觀察
[0244] 術后4、8、12周，A、B兩組新西蘭兔的曉骨標本先予生物力學測試，之后測量植骨區(qū) 域的骨密度值，最后對植骨區(qū)域標本做肥染色及Masson染色，觀察骨挪、新骨及膠原纖維組 織生長情況。
[0245] ①切取燒骨骨缺損處的標本(包括缺損兩側正常骨端0.3cm);
[0246] ②10%中性甲酸固定24h，10%硝酸甲酸溶液中脫韓，每3天更換一次脫韓液，直至 大頭針可刺入骨皮質后，停止脫年丐；
[0247] ③取材，將標本制成約1XI xO. 3 cm大??；
[024引④分別W75%、85%、95%酒精脫水60min兩次，再用無水乙醇脫水3次；
[0249] ⑤用二甲苯透明3次，每次20min;
[0250] ⑥用石錯浸泡組織3次，每次eOinin，浸蠟時保持蠟溫維持在56~58°C ;
[0251 ]⑦用同等硬度的石蠟進行包埋；
[0252] ⑧沿榜骨縱軸連續(xù)石錯切片，厚度約如m;
[0253] ⑨烤片，貼于載玻片上，用烤箱進行烤片30min，溫度為60~62°C;
[0254] ⑩行蘇木精-伊紅染色巧emato巧lin and Eosin，皿)及Masson染色，切片經(jīng)脫水、 二甲苯透明后，W中性樹膠進行封固，最后在光鏡下觀察。
[0巧日]五、統(tǒng)計學處理
[0256] 將W上所獲得的各組數(shù)據(jù)，采用SPSS16.0統(tǒng)計學軟件進行處理