]9+，977. 2 [M+8]8+，1116. 7 [M+7]7+。
[0091] 實(shí)施例2
[0092]
[0093] 將（吡啶-2-基）甲基胺（2. 7mg，25. 0ymol)溶于40. 0yL甲醇，然后加 入20. 0yL咪唑磺酰疊氮水溶液（3. 8mg，15. 0ymol)，10. 0yL硫酸銅水溶液（2. 4mg， 15. 0ymol)和40yL三乙胺（2. 5mg，25ymol)的甲醇溶液，在60°C反應(yīng)1小時(shí)得反應(yīng)液。
[0094] 取上述反應(yīng)液10yL(其中含有2. 3ymol的（吡啶-2-基）甲基疊氮），加入硫酸 銅（0?lmg，0? 63ymol)，2. 0yL的 0? 01M的三[(1-芐基-1-氫-1，2, 3-三氮唑-4-基）甲 基]胺的二甲亞砜溶液和10yL抗壞血酸鈉水溶液（0. 2mg，1. 0ymol)和30yL炔基修飾的 寡聚脫氧核苷酸產(chǎn)物2的水溶液（5.Onmol)。在25°C反應(yīng)12小時(shí)后，加入25. 0yL三羥甲 基氨基甲烷-鹽酸緩沖液（pH= 9. 0, 0. 1M)，10. 0yL0. 1M的乙二胺四乙酸水溶液，100yL 的醋酸鈉-醋酸緩沖液（pH= 4. 7,0. 5M)和400yL的無(wú)水乙醇。放置在-20°C冷凍兩小時(shí) 靜置沉降。在4°C、14000g下離心15分鐘沉降分離，生物大分子沉淀再用85%的乙醇洗滌 一次，在4°C、14000g離心15分鐘沉降分離，所得沉淀加100yL水凍干，得到目標(biāo)產(chǎn)物3。
[0095] HPLC:保留時(shí)間=10. 2mins;
[0096] MS(ESI)m/z883. 1 [M+9]9+，993. 6 [M+8]8+，1135. 7 [M+7]7+。
[0097] 實(shí)施例3
[0098]
[0099] 將2-(噻吩-2-基）乙基胺（3.2mg，25.0ymol)溶于40.0yL甲醇，然后向其中 加入20. 0yL咪唑磺酰疊氮水溶液（3. 8mg，15. 0ymol)，10. 0yL硫酸銅水溶液（2. 4mg， 15.Oymol)和40.OyL三乙胺（2. 5mg，25.Oymol)的甲醇溶液，在60°C反應(yīng)1小時(shí)得反應(yīng) 液。
[0100] 取上述反應(yīng)液10.OiiL(其中含有2.3ymol的2-(噻吩-2-基）乙基疊氮），加入 硫酸銅（〇?lmg，0? 63ymol)，2. 0yL、0. 01M的三[(1-芐基-1-氫-1，2, 3-三氮唑-4-基） 甲基]胺的二甲亞砜溶液和10. 〇yL抗壞血酸鈉水溶液（0. 2mg，1. 0ymol)和30yL炔基修 飾的寡聚脫氧核苷酸產(chǎn)物2的水溶液（5.Onmol)，25°C下反應(yīng)過(guò)夜后，加入25. 0yL三羥甲 基氨基甲烷-鹽酸緩沖液（pH= 9. 0, 0. 1M)，10. 0yL、0. 1M的乙二胺四乙酸水溶液，100yL 的醋酸鈉-醋酸緩沖液（pH= 4. 7,0. 5M)和400yL的無(wú)水乙醇，放置在-20°C冷凍兩小時(shí) 靜置沉降，在4°C下14000g離心15分鐘沉降分離，沉淀再用85 %的乙醇洗滌一次，在4°C下 14000g離心15分鐘沉降分離，所得沉淀加100iiL水凍干，得到目標(biāo)產(chǎn)物4。
[0101] HPLC:保留時(shí)間=11. 2mins;
[0102] MS(ESI)m/z885. 2 [M+9]9+, 996. 0 [M+8]8+, 1138. 4 [M+7] 7+〇
[0103] 實(shí)施例4
[0104]
[0105] 將（2-苯基-惡唑-4-基）甲基胺（4. 4mg，25. 0ymol)溶于40. 0yL甲醇， 然后加入20. 0yL咪唑磺酰疊氮水溶液（3. 8mg，15. 0ymol)，10. 0yL硫酸銅水溶液 (2. 4mg, 15.Oymol)和 40.OyL三乙胺（2. 5mg，25.Oymol)的甲醇溶液，在 60°C反應(yīng) 1 小 時(shí)得反應(yīng)液。
[0106]取上述反應(yīng)液10.OyL(其中含有2.3ymol的（2-苯基-惡唑-4-基）甲基疊 氮），加入硫酸銅（〇?lmg，0? 63ymol)，2. 0yL、0. 01M的三[(1-芐基-1-氫-1，2, 3-三氮 唑-4-基）甲基]胺的二甲亞砜溶液和10. 0yL抗壞血酸鈉水溶液（0? 2mg, 1. 0ymol)和 30yL炔基修飾的寡聚脫氧核苷酸產(chǎn)物2的水溶液（5.Onmol)，25 °C下反應(yīng)過(guò)夜后，加入 25. 0yL三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液（pH= 9. 0, 0. 1M)，10. 0yL的0. 1M的乙二胺四 乙酸水溶液，100yL的醋酸鈉-醋酸緩沖液（pH= 4. 7,0. 5M)和400yL的無(wú)水乙醇，放置 在-20°C冷凍兩小時(shí)靜置沉降，在4°C下14000g離心15分鐘沉降分離，沉淀再用85%的乙 醇洗滌一次，在4°C下14000g離心15分鐘沉降分離，所得寡聚脫氧核苷酸沉淀加100yL水 凍干，得到目標(biāo)產(chǎn)物5。
[0107] HPLC:保留時(shí)間=11. 6mins;
[0108] MS(ESI)m/z890. 9 [M+9]9+, 1002. 3 [M+8]8+, 1145. 6 [M+7] 7+〇
[0109] 實(shí)施例5
[0110]
[0111] 將2-(4-羥基苯-1-基）乙基胺（3.4mg，25.0ymol)溶于40.0yL甲醇，然后 加入20. 0yL咪唑磺酰疊氮水溶液（3. 8mg，15. 0ymol)，10. 0yL硫酸銅水溶液（2. 4mg， 15.Oymol)和40.OyL三乙胺（2. 5mg，25.Oymol)的甲醇溶液，在60°C反應(yīng)1小時(shí)得反應(yīng) 液。
[0112] 取上述反應(yīng)液10.0yL(其中含有2.3ymol的2-(4-羥基苯-1-基）乙基疊 氮），加入硫酸銅（〇? 2mg，1. 26ymol)，2. 0yL的 0? 01M的三[(1-芐基-1-氫-1，2, 3-三 氮唑-4-基）甲基]胺的二甲亞砜溶液和10. 0yL抗壞血酸鈉水溶液（0? 2mg, 1. 0ymol) 和30yL炔基修飾的寡聚脫氧核苷酸產(chǎn)物2水溶液（5.Onmol)，25°C下反應(yīng)過(guò)夜后，加入 25. 0yL三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液（pH= 9. 0, 0. 1M)，10. 0yL的0. 1M的乙二胺四 乙酸水溶液，100yL的醋酸鈉-醋酸緩沖液（pH= 4. 7,0. 5M)和400yL的無(wú)水乙醇，放置 在-20°C冷凍兩小時(shí)靜置沉降，在4°C下14000g離心15分鐘沉降分離，沉淀再用85%的乙 醇洗滌一次，在4°C下14000g離心15分鐘沉降分離，所得寡聚脫氧核苷酸沉淀加100yL水 凍干，得到目標(biāo)產(chǎn)物6。
[0113] HPLC:保留時(shí)間=11.Omins;
[0114] MS(ESI)m/z886. 7 [M+9]9+, 997. 7 [M+8]8+, 1140. 2 [M+7] 7+〇
[0115] 實(shí)施例6
[0116]
[0117] 將4-溴苯胺（10.Omg，60. 0ymol)溶于170yL乙腈，向其中加入10yL亞硝酸叔 丁酯（60.0ymol)和10yL三甲基硅基疊氮（40ymol)，在60°C反應(yīng)1小時(shí)得反應(yīng)液。
[0118] 取上述反應(yīng)液8yL(其中含有2. 5ymol的4-溴苯基疊氮），加入10. 0yL硫酸 銅水溶液（〇.3mg，1.89ymol)，4.0yL的0? 1M的三[(1-芐基氫-1，2,3-三唑-4基）甲 基]胺的二甲亞砜溶液和10. 〇yL抗壞血酸鈉水溶液（0. 4mg，2. 0ymol)和30yL炔基修 飾的寡聚脫氧核苷酸2水溶液（5.Onmol)，25°C下反應(yīng)過(guò)夜后，加入25. 0yL三羥甲基氨基 甲烷-鹽酸緩沖液（pH= 9. 0, 0. 1M)，10. 0yL的0. 1M的乙二胺四乙酸水溶液，100yL的 醋酸鈉-醋酸緩沖液（pH= 4. 7, 0. 5M)和400yL的無(wú)水乙醇，放置在-20°C冷凍兩小時(shí)靜 置沉降，在4°(：下1400(^離心15分鐘沉降分離，沉淀再用85%的乙醇洗滌一次，在4°(：下 14000g離心15分鐘沉降分離，所得寡聚脫氧核苷酸沉淀加100yL水凍干，得到目標(biāo)產(chǎn)物 1。
[0119] MS(ESI)m/z890. 3 [M+9]9+, 1001. 8 [M+8]8+, 1145. 0[M+7]7+〇
[0120] 實(shí)施例7 [01211
[0122] 將2-甲基苯胺（6. 2mg，60. 0ymol)溶于170yL乙腈，向其中加入10yL亞硝酸 叔丁酯（60.0ymol)和10yL三甲基硅基疊氮（40ymol)，在60°C反應(yīng)1小時(shí)得反應(yīng)液。
[0123] 取上述反應(yīng)液8yL(其中含有2. 5ymol的2-甲基苯基疊氮），加入10. 0yL硫 酸銅水溶液（0.311^，1.8911111〇1)，41^的0.邡的三[(1-芐基氫-1，2,3-三唑-4基）甲 基]胺的二甲亞砜溶液和10. 〇yL抗壞血酸鈉水溶液（0. 4mg，2. 0ymol)和30yL炔基修 飾的寡聚脫氧核苷酸2水溶液（5.Onmol)，25°C下反應(yīng)過(guò)夜后，加入25. 0yL三羥甲基氨基 甲烷-鹽酸緩沖液（pH= 9. 0, 0. 1M)，10. 0yL的0. 1M的乙二胺四乙酸水溶液，100yL的 醋酸鈉-醋酸緩沖液（pH= 4. 7,0. 5M)和400yL的無(wú)水乙醇，放置在-20°C冷凍兩小時(shí)靜 置沉降，在4°(：下1400(^離心15分鐘沉降分離，沉淀再用85%的乙醇洗滌一次，在4°(：下 14000g離心15分鐘沉降分離，所得寡聚脫氧核苷酸沉淀加100yL水凍干，得到目標(biāo)產(chǎn)物 8〇
[0124] MS(ESI)m/z883. 2 [M+9]9+，993. 6 [M+8]8+，1135. 8 [M+7]7+。
[0125] 實(shí)施例8
[0126]
[0127] 將4-羥基苯胺（60. 0ymol，6. 6mg)溶于170yL乙腈，向其中加入10yL亞硝酸 叔丁酯（60.0ymol)和10yL三甲基硅基疊氮（40ymol)，在60°C反應(yīng)1小時(shí)得反應(yīng)液。
[0128] 取上述反應(yīng)液8yL(其中含有2.5ymol的4-羥基苯基疊氮），加入10.0yL硫 酸銅水溶液（0.311^，1.8911111〇1)，41^的0.邡的三[(1-芐基氫-1，2,3-三唑-4基）甲 基]胺的二甲亞砜溶液和10. 〇yL抗壞血酸鈉水溶液（0. 4mg，2. 0ymol)和30yL炔基修 飾的寡聚脫氧核苷酸2水溶液（5.Onmol)，25°C下反應(yīng)過(guò)夜后，加入25. 0yL三羥甲基氨基 甲烷-鹽酸緩沖液（pH= 9. 0, 0. 1M)，10. 0yL的0. 1M的乙二胺四乙酸水溶液，100yL的 醋酸鈉-醋酸緩沖液（pH= 4. 7,0. 5M)和400yL的無(wú)水乙醇，放置在-20°C冷凍兩小時(shí)靜 置沉降。在4°C下14000g離心15分鐘沉降分離，沉淀再用85%的乙醇洗滌一次，在4°C下 14000g離心15分鐘沉降分離，所得寡聚脫氧核苷酸沉淀加100yL水凍干，得到目標(biāo)產(chǎn)物 9〇
[0129] MS(ESI)m/z883. 4 [M+9]9+，993. 9 [M+8]8+，1136. 0 [M+7]7+。
[0130] 實(shí)施例9