的濃度為20~150mmol/L。
[0020] 在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，所述草酸氧化酶的濃度為500U/L，辣根過氧化物酶的 濃度為1000U/L，所述反應(yīng)劑的濃度為40mmol/L。
[0021] 一種用于測定草酸濃度的電化學(xué)試紙，包括基片，基片上印制有參考電極和工作 電極，所述參考電極和工作電極上自下而上依次涂覆有粘合層、氧化劑層、反應(yīng)層和親水 膜；所述粘合層采用濃度為30~100g/L的明膠或聚乙烯醇制成，所述氧化劑層采用權(quán)利 要求1中所述試劑中的濃度為10~200mmol/L的苯醌或鐵氰化鉀制成，反應(yīng)層采用權(quán)利要 求1中所述試劑中的濃度為10~2000U/L、最適pH值為4. 0~7. 5的草酸氧化酶和濃度為 100~2000U/L的辣根過氧化物酶制成。
[0022] 用于測定草酸濃度的電化學(xué)試紙的制備方法，包括以下步驟：
[0023] 在基片上印刷工作電極導(dǎo)線、參照電極導(dǎo)線、測試儀器連接導(dǎo)線；將濃度為30~ l〇〇g/L的明膠或聚乙烯醇粘合劑涂覆在參考電極和工作電極上，制成粘合層；將濃度為 10~200mmol/L的苯醌或鐵氰化鉀涂覆在粘合層上，制成氧化劑層；將濃度為10~2000U/ L、最適pH值為4. 0~7. 5草酸氧化酶和濃度為100~2000U/L的辣根過氧化物酶涂覆在 氧化劑層上，制成反應(yīng)層；在反應(yīng)層的上表面涂覆一層親水膜；在37°C的溫度下放置至干 燥后，根據(jù)實際需要將基片切割成若干份，得到用于測定草酸的電化學(xué)試紙。
[0024] 一種用于測定草酸濃度的光反射試紙，包括基片，所述基片的上表面自下而上依 次涂覆有助色層、顯色層、催化層、緩沖層和濾膜；所述助色層采用濃度為800mg/L的助色 劑制成；顯色層采用權(quán)利要求1所述試劑中的濃度為10~200mmol/L的3-甲基-2-苯并 噻唑啉酮腙鹽酸鹽或3, 5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉制成；催化層采用權(quán)利要求1所述試劑中 的10~2000U/L、最適pH值為4. 0~7. 5的草酸氧化酶和濃度為100~2000U/L的辣根過 氧化物酶制成；緩沖層采用pH值為4. 5~7. 0、濃度為lOOmmol/L的緩沖溶液制成。
[0025] 在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，所述助色劑為3-二甲基氨基苯甲酸或4-氨基安替比 林。
[0026] 在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，所述緩沖溶液采用檸檬酸鹽或磷酸鹽制成。
[0027] 用于測定草酸濃度的光反射試紙的制備方法，包括以下步驟：采用厚型定量濾紙 制備基片，在基片上涂覆粘合劑，得到粘合層，在粘合層上涂覆濃度為800mg/L的3-二甲基 氨基苯甲酸或4-氨基安替比林涂覆在基片上，制成助色層；在助色層上涂覆濃度為10~ 200mmol/L的3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽或3, 5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉，制成顯色 層；在顯色層上涂覆濃度為10~2000U/L、最適pH值為4. O~7. 5的草酸氧化酶和濃度為 100~2000U/L的辣根過氧化物酶，制成催化層；在催化層上涂覆pH值為4. 5~7. 0、濃度 為lOOmmol/L的緩沖溶液，制得緩沖層，在緩沖層上涂覆親水膜；在37°C的溫度下存放至干 燥后，切割成若干份，得到用于測定草酸濃度的光反射試紙。
[0028] 一種用于測定草酸濃度的試劑盒，該試劑盒中放置有權(quán)利要求4所述的電化學(xué)試 紙或權(quán)利要求6所述的光反射試紙。
[0029] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：
[0030] (1)本發(fā)明中的電化學(xué)試紙、光反射試紙和試劑盒的使用方法為：先將待測樣品 制成液體樣品，再將液體樣品滴加在電化學(xué)試紙或光反射試紙上，在室溫下放置反應(yīng)5min 后，就能夠得到待測樣品中的草酸濃度，與現(xiàn)有技術(shù)中通過離子色譜法、HRP (辣根過氧化物 酶）顯色法或ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay，酶聯(lián)免疫吸附測定法）法檢 測，操作復(fù)雜且耗時長，保存條件苛刻且時間短，難以在診所或家庭中使用相比，本發(fā)明中 的電化學(xué)試紙、光反射試紙和試劑盒操作比較簡單，測試時間短，能夠快速獲得結(jié)果，適合 在診所和家庭中使用。
[0031] (2)本發(fā)明中的試劑、電化學(xué)試紙、光反射試紙和試劑盒的檢測濃度的有效范圍均 為0~2. 0mmol/L，檢出限為50 μ mol/L，能夠準確測定食物及人體尿液中草酸的濃度，與現(xiàn) 有技術(shù)中操作復(fù)雜且需專業(yè)儀器相比，本發(fā)明中的電化學(xué)試紙、光反射試紙和試劑盒靈敏 度較高，誤差較小，能夠應(yīng)用于食物及人體尿液中草酸的測定，普通人通過閱讀說明書后即 可操作，適合非專業(yè)人士使用。
[0032] (3)本發(fā)明中的電化學(xué)試紙、光反射試紙和試劑盒均包括濃度為10~2000U/L、最 適pH值為4. 0~7. 5的草酸氧化酶、濃度為100~2000U/L的過氧化物酶和濃度為10~ 200mmol/L的反應(yīng)劑，反應(yīng)劑為氧化劑或者顯色劑。在實際制作過程中，將電化學(xué)試紙、光反 射試紙的相應(yīng)涂層基片浸有相對應(yīng)的檢測試劑，組裝后再進行批量切割成試紙條即可，電 化學(xué)試紙、光反射試紙的制備工藝簡單，成本低廉。
【附圖說明】
[0033] 圖1為本發(fā)明實施例中電化學(xué)試紙的標準曲線圖；
[0034] 圖2為本發(fā)明實施例中光反射試紙的標準曲線圖。
【具體實施方式】
[0035] 以下結(jié)合附圖及實施例對本發(fā)明作進一步詳細說明。
[0036] 本發(fā)明實施例提供一種用于測定草酸濃度的試劑，該試劑包括濃度為10~ 2000U/L (單位每升）、最適pH值為4. 0~7. 5的草酸氧化酶、濃度為100~2000U/L的辣 根過氧化物酶和濃度為10~200mmol/L的反應(yīng)劑，反應(yīng)劑為氧化劑或者顯色劑。
[0037] 氧化劑為苯醌或鐵氰化鉀，顯色劑為濃度為3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸 鹽（3_Methyl-2-benzothiazolinonehydrazone Hydrochlide Hydrate，MBTH)或 3, 5-二 氯-2-羥基苯橫酸鈉(3, 5-dichlor〇-2-hydroxybenzenesulfonic acid sodium salt, DHBS)。
[0038] 在實際使用中草酸氧化酶和辣根過氧化物酶的濃度根據(jù)實際情況設(shè)定，本實施例 中，草酸氧化酶的濃度為50~800U/L (最優(yōu)為200U/L)，辣根過氧化物酶的濃度為500~ 1500U/L(最優(yōu)為1000U/L)，反應(yīng)劑的濃度為20~150mmol/L。
[0039] 本發(fā)明實施例還提供一種用于測定草酸濃度的電化學(xué)試紙，包括基片，基片上印 制有參考電極和工作電極，工作電極和工作電極上自下而上依次涂覆有粘合層、氧化劑層、 反應(yīng)層和親水膜。粘合層采用濃度為30~100g/L的明膠或聚乙烯醇制成，氧化劑層采用 上述試劑中濃度為10~200mmol/L的苯醌或鐵氰化鉀制成，反應(yīng)層采用上述試劑中濃度為 10~2000U/L、最適pH值為4. 0~7. 5的草酸氧化酶和濃度為100~2000U/L的辣根過氧 化物酶制成。
[0040] 電化學(xué)試紙的工作原理如下：將待測樣品制成液態(tài)后，滴在電化學(xué)試紙的親水膜 上，親水膜吸收待測樣品，待測樣品與草酸氧化酶層接觸后，與草酸氧化酶反應(yīng)生產(chǎn)過氧化 氫，過氧化氫在辣根過氧化物酶的作用下，與氧化劑產(chǎn)生氧化還原反應(yīng)，在電場下發(fā)生電子 流動，將電化學(xué)試紙放入現(xiàn)有的測試儀器，該測試儀器對流動的電子進行計數(shù)，并根據(jù)電子 流動信息計算得到草酸濃度，進而確定待測樣品中的草酸濃度。
[0041] 本發(fā)明實施例還提供上述用于測定草酸濃度的電化學(xué)試紙的制備方法，包括以下 步驟：
[0042] 在基片上印刷工作電極導(dǎo)線、參照電極導(dǎo)線、測試儀器連接導(dǎo)線；將濃度為30~ l〇〇g/L的明膠或聚乙烯醇涂覆在參考電極和工作電極上，制成粘合層；在粘合層上涂覆濃 度為10~200mmol/L的苯醌或鐵氰化鉀，制成氧化劑層；在氧化劑層上涂覆10~2000U/ L、最適pH值