為4. 0~7. 5草酸氧化酶和濃度為100~1000U/L的辣根過氧化物酶，制成反 應層；在反應層的上表面涂覆一層親水膜，在37°C的溫度下放置至干燥后，根據(jù)實際需要 將基片切割成若干份，得到用于測定草酸的電化學試紙。
[0043] 檢測上述方法制成的電化學試紙是否合格的方法如下：
[0044] 制備濃度不同的草酸標準樣品后，將草酸標準樣品分別滴加在不同的電化學試紙 上，依次將電化學試紙放入測試儀器中，在電化學試紙的工作電極、參考電極的兩端均施加 300mV的電壓；測定不同電化學試紙上草酸標準樣品的濃度，根據(jù)草酸標準樣品的濃度與 電流信號的關系，判斷電化學試紙的穩(wěn)定性及準確性是否合格。
[0045] 本發(fā)明實施例提供一種用于測定草酸濃度的光反射試紙，包括基片，基片的上表 面自下而上依次涂覆有助色層、顯色層、催化層、緩沖層和濾膜。助色層采用濃度為SOOmg/ L的助色劑制成，助色劑為3-二甲基氨基苯甲酸（3_(dimethylamino)benzoic acid，DMAB) 或4-氨基安替比林（4-Aminoantipyrine，4_AA);顯色層采用上述試劑中濃度為10~ 200mmol/L(最優(yōu)為40mmol/L)的3-甲基-2-苯并噻挫啉酮腙鹽酸鹽或3, 5-二氯-2-輕 基苯磺酸鈉制成，催化層采用上述試劑中10~2000U/L、最適pH值為4. 0~7. 5的草酸 氧化酶和濃度為100~2000U/L的辣根過氧化物酶制成；緩沖層采用pH值為5. 5、濃度為 lOOmmol/L的緩沖溶液制成，緩沖溶液采用檸檬酸鹽或磷酸鹽制成。
[0046] 該光反射試紙的使用原理如下：將待測樣品制成溶液并滴加到光反射試紙上，溶 液中的草酸經(jīng)過緩沖層調整pH值后，進入催化層與草酸氧化酶反應生產過氧化氫，過氧化 氫與辣根過氧化物酶后進入顯色層，與顯色劑進行第一次顯色并進入助色層，在助色劑作 用進行第二次顯色，將光反射試紙顯色的一面放置在波長為492nm的光電轉換儀器下照 射，記錄光反射試紙的反射光強度，根據(jù)光電轉換原理，計算檢測得到的反射光強度對應的 草酸強度。
[0047] 本發(fā)明實施例還提供上述用于測定草酸的光反射試紙的制備方法，該制備方法的 步驟如下：
[0048] 采用厚型定量濾紙制備基片，在基片上涂覆粘合劑，得到粘合層，在粘合層上涂覆 濃度為800mg/L的3-二甲基氨基苯甲酸或4-氨基安替比林涂覆在基片上，制成助色層； 在助色層上涂覆濃度為10~200mmol/L的3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽或3, 5-二 氯-2-羥基苯磺酸鈉，制成顯色層；在顯色層上涂覆濃度為10~2000U/L、最適pH值為 4. 0~7. 5的草酸氧化酶和濃度為100~2000U/L的辣根過氧化物酶，制成催化層；在催化 層上涂覆pH值為5. 5、濃度為lOOmmol/L的緩沖溶液，制得緩沖層，在緩沖層上涂覆親水膜； 在37°C的溫度下存放至干燥后，切割成若干份，得到用于測定草酸濃度的光反射試紙。
[0049] 檢測上述方法制成的光反射試紙是否合格的方法如下：
[0050] 制備濃度不同的草酸標準樣品，將草酸待測溶液分別滴加在不同的光反射試紙 上，待所有的光反射試紙顯色后，將光反射試紙顯色的一面放置在波長為492nm的光電轉 換器下照射，記錄所有光反射試紙的反射光強度，根據(jù)光電轉換原理，計算檢測得到的反射 光強度對應的草酸強度。繪制草酸濃度與電流信號的關系曲線，判斷曲線的R 2是否大于 0. 95,若是，制得的光反射試紙合格；若否，制得的光反射試紙不合格，需要重新制備。
[0051] 本發(fā)明實施例還提供上述一種用于測定草酸濃度的試劑盒，該試劑盒內放置有上 述電化學試紙或光反射試紙。
[0052] 下面，通過6個實施例和3個實驗例對本發(fā)明進行詳細說明。
[0053] 實施例1
[0054] 本實施例中，用于測定草酸濃度的試劑包括濃度為10U/L、最適pH值為5. 7的草酸 氧化酶、濃度為500U/L的辣根過氧化物酶和濃度為200mmol/L的苯醌。
[0055] 在PVC制成的（Polyvinyl chloride，聚氯乙?。┗嫌∷⒐ぷ麟姌O導線、參照 電極導線、測試儀器連接導線；將濃度為30g/L的明膠或聚乙烯醇涂覆在參考電極和工作 電極上，制成粘合層；在粘合層上涂覆濃度為200mmol/L的苯醌，制成氧化劑層；在氧化劑 層上涂覆10U/L、最適pH值為5. 7草酸氧化酶和濃度為500U/L的辣根過氧化物酶，制成反 應層；在反應層的上表面涂覆一層親水膜，在37°C的溫度下放置至干燥后，根據(jù)實際需要 將基片切割成若干份，得到用于測定草酸的電化學試紙。
[0056] 實施例2
[0057] 本實施例中，用于測定草酸濃度的試劑包括濃度為800U/L、最適pH值為6. 0的草 酸氧化酶、濃度為2000U/L的辣根過氧化物酶和濃度為lOmmol/L的苯醌。
[0058] 在基片上印刷工作電極導線、參照電極導線、測試儀器連接導線；將濃度為70g/ L的明膠或聚乙烯醇涂覆在參考電極和工作電極上，制成粘合層；在粘合層上涂覆濃度為 lOmmol/L的苯醌，制成氧化劑層；在氧化劑層上涂覆800U/L、最適pH值為6. 0草酸氧化酶 和濃度為2000U/L的辣根過氧化物酶，制成反應層；在反應層的上表面涂覆一層親水膜，在 37°C的溫度下放置至干燥后，根據(jù)實際需要將基片切割成若干份，得到用于測定草酸的電 化學試紙。
[0059] 實施例3
[0060] 本實施例中，用于測定草酸濃度的試劑包括濃度為300U/L、最適pH值為5. 0的草 酸氧化酶、濃度為900U/L的辣根過氧化物酶和濃度為80mmol/L的鐵氰化鉀。
[0061] 在基片上印刷工作電極導線、參照電極導線、測試儀器連接導線；將濃度為80g/ L的明膠或聚乙烯醇涂覆在參考電極和工作電極上，制成粘合層；在粘合層上涂覆濃度為 80mmol/L的鐵氰化鉀，制成氧化劑層；在氧化劑層上涂覆300U/L、最適pH值為5. 0草酸氧 化酶和濃度為900U/L的辣根過氧化物酶，制成反應層；在反應層的上表面涂覆一層親水 膜，在37°C的溫度下放置至干燥后，根據(jù)實際需要將基片切割成若干份，得到用于測定草酸 的電化學試紙。
[0062] 實施例4
[0063] 本實施例中，用于測定草酸濃度的試劑包括濃度為50U/L、最適pH值為4. 0的草酸 氧化酶、濃度為100U/L的辣根過氧化物酶和濃度為20mmol/L的3, 5-二氯-2-羥基苯磺酸 鈉。
[0064] 采用厚型定量濾紙制備基片，在基片上涂覆粘合劑，得到粘合層，在粘合層上涂覆 濃度為800mg/L的3-二甲基氨基苯甲酸在基片上，制成助色層；在助色層上涂覆濃度為 20mmol/L的3, 5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉，制成顯色層；在顯色層上涂覆濃度為50U/L、最 適pH值為4. 0的草酸氧化酶和濃度為100U/L的辣根過氧化物酶，制成催化層；在催化層上 涂覆pH值為5. 5、濃度為lOOmmol/L的緩沖溶液，制得緩沖層，在緩沖層上涂覆親水膜；在 37°C的溫度下存放至干燥后，切割成若干份，得到用于測定草酸濃度的光反射試紙，緩沖溶 液采用檸檬酸制成。
[0065] 實施例5
[0066] 本實施例中，用于測定草酸濃度的試劑包括濃度為500U/L、最適pH值為5. 5的草 酸氧化酶、濃度為1000U/L的辣根過氧化物酶和濃度為40mmol/L的3-甲基-2-苯并噻唑 啉酮腙鹽酸鹽。
[0067] 采用厚型定量濾紙制備基片，在基片上涂覆粘合劑，得到粘合層，在粘合層上涂 覆濃度為800mg/L的4-氨基安替比林涂覆在基片上，制成助色層；在助色層上涂覆濃度 為40mmol/L的3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽，制成顯色層；在顯色層上涂覆濃度為 500U/L、最適pH值為5. 5的草酸氧化酶和濃度為1000U/L的辣根過氧化物酶，制成催化層；