在催化層上涂覆pH值為5. 5、濃度為lOOmmol/L的緩沖溶液，制得緩沖層，在緩沖層上涂覆 親水膜；在37°C的溫度下存放至干燥后，切割成若干份，得到用于測(cè)定草酸濃度的光反射 試紙。
[0068] 實(shí)施例6
[0069] 本實(shí)施例中，用于測(cè)定草酸濃度的試劑包括濃度為2000U/L、最適pH值為7. 5的草 酸氧化酶、濃度為1500U/L的辣根過氧化物酶和濃度為150mmol/L的3-甲基-2-苯并噻唑 啉酮腙鹽酸鹽。
[0070] 采用厚型定量濾紙制備基片，在基片上涂覆粘合劑，得到粘合層，在粘合層上涂 覆濃度為800mg/L的4-氨基安替比林涂覆在基片上，制成助色層；在助色層上涂覆濃度 為150mmol/L的3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽，制成顯色層；在顯色層上涂覆濃度為 2000U/L、最適pH值為7. 5的草酸氧化酶和濃度為1500U/L的辣根過氧化物酶，制成催化 層；在催化層上涂覆PH值為5. 5、濃度為lOOmmol/L的緩沖溶液，制得緩沖層，在緩沖層上 涂覆親水膜；在37°C的溫度下存放至干燥后，切割成若干份，得到用于測(cè)定草酸濃度的光 反射試紙。
[0071] 下面，通過3個(gè)實(shí)驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明
[0072] 實(shí)驗(yàn)例1 :
[0073] Sl :配制濃度為50mmol/L的K2HPO4溶液、濃度為50mmol/L的KH 2P04溶液，按照體 積份，將1即04溶液加入KH 2P04溶液中，并混合均勻，調(diào)節(jié)混合液的pH至6. 0,得到濃度為 50mmol/L、pH為6. 0的磷酸鹽緩沖液。
[0074] 將磷酸鹽緩沖液均分為11份，向11份磷酸鹽緩沖液中依次加入濃度為IOOmmol/ L、體積不同的草酸溶液，得到草酸終濃度依次為0mmol/L、0. 2mmol/L、0. 4mmol/L、0. 6mmol/ L、0. 8mmol/L、l. 0mmol/L、l. 2mmol/L、l. 4mmol/L、l. 6mmol/L、l. 8mmol/L、2. Ommol/L 的草酸 鉀-磷酸鹽溶液，使用KOH溶液調(diào)節(jié)所有草酸鉀-磷酸鹽溶液的pH至6. 0,得到梯度草酸標(biāo) 準(zhǔn)溶液。
[0075] S2 :依次將濃度為 0mmol/L、0. 2mmol/L、0. 4mmol/L、0. 6mmol/L、0. 8mmol/L、 1.0 mmol/L、I. 2mmol/L、l. 4mmol/L、l. 6mmol/L、l. 8mmol/L、2. Ommol/L 的梯度草酸標(biāo)準(zhǔn)溶液 分別滴加在不同的電化學(xué)試紙上，室溫下反應(yīng)5min后，采用測(cè)試儀器測(cè)試每個(gè)試紙的電流 值。
[0076] 表1梯度草酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的電流測(cè)試結(jié)果
[0077]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于測(cè)定草酸濃度的試劑，其特征在于：該試劑包括濃度為10~2000U/L、最適 pH值為4. 0~7. 5的草酸氧化酶、濃度為100~2000U/L的辣根過氧化物酶和濃度為10~ 200mmol/L的反應(yīng)劑，反應(yīng)劑為氧化劑或者顯色劑，所述氧化劑為苯醌或鐵氰化鉀，所述顯 色劑為3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽或3, 5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉。
2. 如權(quán)利要求1所述的用于測(cè)定草酸濃度的試劑，其特征在于：所述草酸氧化酶的濃 度為50~800U/L，辣根過氧化物酶的濃度為500~1500U/L，所述反應(yīng)劑的濃度為20~ 150mmol/L〇
3. 如權(quán)利要求2所述的用于測(cè)定草酸濃度的試劑，其特征在于：所述草酸氧化酶的濃 度為500U/L，辣根過氧化物酶的濃度為1000U/L，所述反應(yīng)劑的濃度為40mmol/L。
4. 一種用于測(cè)定草酸濃度的電化學(xué)試紙，包括基片，基片上印制有參考電極和工作電 極，其特征在于：所述參考電極和工作電極上自下而上依次涂覆有粘合層、氧化劑層、反應(yīng) 層和親水膜；所述粘合層采用濃度為30~100g/L的明膠或聚乙烯醇制成，所述氧化劑層采 用權(quán)利要求1中所述試劑中的濃度為10~200mmol/L的苯醌或鐵氰化鉀制成，反應(yīng)層采用 權(quán)利要求1中所述試劑中的濃度為10~2000U/L、最適pH值為4. 0~7. 5的草酸氧化酶和 濃度為100~2000U/L的辣根過氧化物酶制成。
5. 權(quán)利要求4所述的用于測(cè)定草酸濃度的電化學(xué)試紙的制備方法，其特征在于，包括 以下步驟： 在基片上印刷工作電極導(dǎo)線、參照電極導(dǎo)線、測(cè)試儀器連接導(dǎo)線；將濃度為30~100g/ L的明膠或聚乙烯醇粘合劑涂覆在參考電極和工作電極上，制成粘合層；將濃度為10~ 200mmol/L的苯醌或鐵氰化鉀涂覆在粘合層上，制成氧化劑層；將濃度為10~2000U/L、最 適pH值為4. 0~7. 5草酸氧化酶和濃度為100~2000U/L的辣根過氧化物酶涂覆在氧化 劑層上，制成反應(yīng)層；在反應(yīng)層的上表面涂覆一層親水膜；在37°C的溫度下放置至干燥后， 根據(jù)實(shí)際需要將基片切割成若干份，得到用于測(cè)定草酸的電化學(xué)試紙。
6. -種用于測(cè)定草酸濃度的光反射試紙，包括基片，其特征在于：所述基片的上表 面自下而上依次涂覆有助色層、顯色層、催化層、緩沖層和濾膜；所述助色層采用濃度為 800mg/L的助色劑制成；顯色層采用權(quán)利要求1所述試劑中的濃度為10~200mmol/L的 3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽或3, 5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉制成；催化層采用權(quán)利 要求1所述試劑中的10~2000U/L、最適pH值為4. 0~7. 5的草酸氧化酶和濃度為100~ 2000U/L的辣根過氧化物酶制成；緩沖層采用pH值為4. 5~7. 0、濃度為100mmol/L的緩沖 溶液制成。
7. 如權(quán)利要求6所述的用于測(cè)定草酸濃度的光反射試紙，其特征在于：所述助色劑為 3_二甲基氨基苯甲酸或4-氨基安替比林。
8. 如權(quán)利要求6所述的用于測(cè)定草酸濃度的光反射試紙，其特征在于：所述緩沖溶液 采用檸檬酸鹽或磷酸鹽制成。
9. 權(quán)利要求6所述的用于測(cè)定草酸濃度的光反射試紙的制備方法，其特征在于，包括 以下步驟：采用厚型定量濾紙制備基片，在基片上涂覆粘合劑，得到粘合層，在粘合層上涂 覆濃度為800mg/L的3-二甲基氨基苯甲酸或4-氨基安替比林涂覆在基片上，制成助色層； 在助色層上涂覆濃度為10~200mmol/L的3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽或3, 5-二 氯-2-羥基苯磺酸鈉，制成顯色層；在顯色層上涂覆濃度為10~2000U/L、最適pH值為 4. 0~7. 5的草酸氧化酶和濃度為100~2000U/L的辣根過氧化物酶，制成催化層；在催化 層上涂覆pH值為4. 5~7. 0、濃度為100mm〇l/L的緩沖溶液，制得緩沖層，在緩沖層上涂覆 親水膜；在37°C的溫度下存放至干燥后，切割成若干份，得到用于測(cè)定草酸濃度的光反射 試紙。
10. -種用于測(cè)定草酸濃度的試劑盒，其特征在于：該試劑盒中放置有權(quán)利要求4所述 的電化學(xué)試紙或權(quán)利要求6所述的光反射試紙。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于測(cè)定草酸濃度的試劑、試劑盒、試紙及其制備方法，涉及腎結(jié)石早期診斷與預(yù)防領(lǐng)域，該試劑包括濃度為10～2000U/L、最適pH值為4.0～7.5的草酸氧化酶、濃度為100～2000U/L的辣根過氧化物酶和濃度為10～200mmol/L的反應(yīng)劑，反應(yīng)劑為氧化劑或者顯色劑，所述氧化劑為苯醌或鐵氰化鉀，所述顯色劑為3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽或3,5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉。本發(fā)明的電化學(xué)試紙和光反射試紙使用方便，操作簡(jiǎn)易，測(cè)定時(shí)間短，準(zhǔn)確度較高，抗干擾能力強(qiáng)，成本低廉，儲(chǔ)存時(shí)間長(zhǎng)，能夠在醫(yī)院、診所及家庭中使用。
【IPC分類】G01N21-78, G01N27-26
【公開號(hào)】CN104677959
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510116138
【發(fā)明人】劉海峰
【申請(qǐng)人】武漢康復(fù)得生物科技股份有限公司
【公開日】2015年6月3日
【申請(qǐng)日】2015年3月17日