入10倍量乙醇中，浸泡1-2小時，加 熱提取2次，每次1-2小時，合并提取液，靜置后去上清液，然后放入減壓濃縮罐內(nèi)，減壓回 收乙醇，濃縮至藥液濃度為0. 6g生藥/mL，抽濾至濾液的相對密度為20°C時1. 06的浸膏， 成為組分2。
[0082] 將組分1和組分2合并后置入雙效真空濃縮器中，濃縮至90°C時相對密度為1. 35 的濃縮液，置0~5°C低溫冷藏24小時；將冷藏液加0. 3%的助濾劑硅藻土，過濾，濾液再置 入雙效真空濃縮器中，濃縮至每lml含0.lg生藥量；濃縮后的膏劑加糊精調(diào)和，紫外線消毒 殺菌后裝瓶。
[0083] 具體實施例3 :在秋末莖葉枯萎或次春發(fā)芽前采挖，除去細根，刮去外皮，切瓣或 段，繩穿成串干燥或直接干燥，取切成小塊的生大黃，用黃酒拌勻，放蒸籠內(nèi)蒸制，或置罐內(nèi) 密封，坐水鍋中，隔水蒸透，取出曬干，按上法反復(fù)蒸制2~3次者，干燥成熟大黃4500g后， 然后將干燥后的熟大黃片加水，然后放入提取罐加熱提取2次，每次1-2小時，去上清液，合 并提取液，100-120目濾過，再經(jīng)截流分子量為5000-10000的超濾柱超濾，超濾液減壓濃縮 相對密度為80°C時1. 06的浸膏，作為組分1，將所述其余原料將茵陳1200g，茯苓1100g， 魚腥草ll〇〇g，柴胡1200g，白芍1200g，當(dāng)歸1200g，玉米須1200g，小薊1200g，虎杖1200g， 枸杞1100g，女貞子1200g，柏子仁1100g，冬瓜皮1100g，天花粉1100g，莪術(shù)1200g，墨旱蓮 ll〇〇g，制首烏ll〇〇g，車前子ll〇〇g，雞內(nèi)金ll〇〇g，生地ll〇〇g，板藍根1200g，放入5-10倍 量水中，浸泡1-2小時，加熱提取2次，每次1-2小時，去上清液，合并提取液，100-120目濾 過，將2次提取液合并靜置，減壓回收乙醇，并濃縮至藥液濃度為0. 6g生藥/mL，抽濾后，濾 液的相對密度約為20°C時1. 08 ;減壓至0. 03-0. 08MPa，溫度保持在60-80°C，濃縮至相對密 度為1. 20,溫度至60°C-70°C的浸膏，作為組分2。將組分1組分2混合置入雙效真空濃縮 器中，濃縮至90°C時相對密度為1. 05的濃縮液，置0~5°C低溫冷藏24小時；將冷藏液加 0. 3%的助濾劑硅藻土，過濾，濾液再置入雙效真空濃縮器中，濃縮至每lml含0.lg生藥量； 濃縮后的膏劑加組分1的精油然后加蜂膠調(diào)和，紫外線消毒殺菌后裝瓶。
[0084] 具體實施例4:在秋末莖葉枯萎或次春發(fā)芽前采挖，除去細根，刮去外皮，切瓣或 段，繩穿成串干燥或直接干燥，取切成小塊的生大黃，用黃酒拌勻，放蒸籠內(nèi)蒸制，或置罐內(nèi) 密封，坐水鍋中，隔水蒸透，取出曬干，按上法反復(fù)蒸制2~3次者，干燥成熟大黃4500g后， 泡入10倍量乙醇中，加熱提取2次，每次1-2小時，去上清液，合并提取液，100-120目濾 過，再經(jīng)截流分子量為5000-10000的超濾柱超濾，超濾液減壓濃縮相對密度為80°C時1. 06 的浸膏，加熱濃縮至膏狀，靜置備用，成組分1。將茵陳ll〇〇g，茯苓ll〇〇g，魚腥草ll〇〇g， 柴胡1200g，白芍1200g，當(dāng)歸1100g，玉米須1200g，小薊1200g，虎杖1200g，枸杞1100g，女 貞子1200g，柏子仁1100g，冬瓜皮1100g，天花粉1100g，莪術(shù)1200g，墨旱蓮1100g，制首烏 1l〇〇g，車前子1200g，雞內(nèi)金1100g，生地1200g，板藍根1200g，將所述原料藥放入粉碎機粉 碎后，將顆粒物放入乙醇中加熱回流提取2次，每次1~2小時，將2次提取液合并靜置；將 上述乙醇提取過的藥渣加10倍量水加熱回流提取2次，每次1~2小時，將2次提取液合 并靜置，將上述兩種提取液合并，作為組分2 ;合并組分1組分2減壓濃縮相對密度為80°C 時1. 36的濾液，回收乙醇，調(diào)入蜂膠，紫外線殺菌后裝瓶。
[0085] 試驗例1:本發(fā)明急性毒性試驗
[0086] -、試驗材料：
[0087] 動物：昆明種小鼠，體重21_24g，雌雄各半，山東大學(xué)生物試驗室育種。藥物：本發(fā) 明口服液（按實施方法2制備）。
[0088] 二、方法：
[0089] 1、LD50計算：采用改良寇氏法，將小鼠隨機分成5組，每組10只，雌雄各半，將 栓劑溶解，配成最大濃度，按小鼠最大允許容量給藥，所給劑量按生藥量依次為18,14. 4， 11. 5,9. 2, 7. 4 (g.kg-1)，在動物禁食（不禁水）18小時后，一日內(nèi)分兩次給藥（間隔半小 時），每次〇. 5ml，觀察動物死亡情況。
[0090] 2、最大耐受劑量測定（MTD值）：取小鼠20只，雌雄各10只。將栓劑加蒸餾水溶解， 配成最高濃度，按動物的最大耐受量，以注射灌喂器能抽動為準。在動物禁食（不禁水）18 小時后，一日內(nèi)分兩次給藥（間隔半小時），每次〇. 5ml(每ml含生藥0. 36g)，總藥量為18g 生藥/kg.d，相當(dāng)臨床成人50Kg體重用量的300倍。給藥后連續(xù)觀察7天。
[0091] 三、試驗結(jié)果：
[0092] 在LD50計算中當(dāng)用最大允許濃度和最大允許容量給予小鼠時（18g/Kg.d)，未見 小鼠死亡，即未測出LD50,只可求最大耐受劑量，在7天觀察期中，動物其食欲、活動、毛色、 精神狀態(tài)等皆正常，發(fā)育正常，未見有死亡。即選用相當(dāng)于臨床劑量的300倍藥量，并無不 良反應(yīng)發(fā)生，表明急性毒性極小，MTD> 18g/Kg.d。
[0093] 試驗例2 :本發(fā)明急性皮膚刺激試驗報告
[0094] 1、實驗?zāi)康模簷z測本發(fā)明對實驗動物皮膚的刺激/腐蝕作用和強度
[0095] 2、材料和方法：
[0096] 2. 1?受試物：本發(fā)明口服液（按實施例方法2制得）
[0097] 2. 2.實驗動物：壹級大耳白種家兔，10只，雌性，體重2. 1-2. 3kg;由青島大學(xué)醫(yī)學(xué) 院生物系實驗動物中心提供；
[0098] 2. 3?試驗方法：
[0099] 選用皮膚完好的健康家兔10只，于試驗前24小時將其背部脊柱兩側(cè)被毛剪掉，去 毛面積左、右各約4cmX4cm。試驗時取受試物0. 2ml涂于2. 5cmX2. 5cm的二層紗布上，敷 貼于一側(cè)去毛皮膚表面，油紙覆蓋，膠布固定。另一側(cè)皮膚作為空白對照。封閉4小時后， 去除覆蓋物，并用溫水清洗去殘留受試物，于去除受試物后的1、24和48小時觀察涂抹部位 皮膚反應(yīng)，并評分。
[0100] 3、實驗結(jié)果：實驗動物皮膚未出現(xiàn)任何紅斑，紅腫，發(fā)炎現(xiàn)象。
[0101] 4、小結(jié)：根據(jù)《（消毒技術(shù)規(guī)范》（1999)中皮膚刺激反應(yīng)評分標準判定，本發(fā)明對 動物皮膚刺激強度屬無刺激性。
[0102] 實施例3 :長期毒性實驗資料
[0103] 1、實驗方法
[0104] 將豚鼠隨機份成4組，每組15只。在豚鼠背部脊柱兩側(cè)將脫毛劑均勻涂上，使其 脫毛范圍約40平方厘米。洗凈脫毛劑，觀察24小時后每組豚鼠分別涂本發(fā)明口服液溶液 0. 2、0. 4和0. 8ml，分別含生藥92、184和368mg，另一組涂溶媒0. 8ml每日二次，連續(xù)30天， 觀察豚鼠的一般情況，實驗結(jié)束后處死動物進行血液學(xué)、血液生化及病理學(xué)檢查。
[0105] 2、結(jié)果
[0106] 上述三組用藥豚鼠軀干去毛區(qū)，未見局部皮膚有水腫、充血、紅斑、出血點及潰瘍。 用藥組與對照組動物毛發(fā)色澤、攝食、四肢活動等對照組無明顯差異，血液生化檢查，用藥 組與對照組均在正常范圍。病理組織學(xué)檢查，實驗各組心、肝、腎及局部皮膚均未見明顯病 變。提示，本發(fā)明中藥口服液長期用藥對局部皮膚及全身重要臟器均未見明顯的毒性作用。
[0107] 試驗結(jié)果表明：本發(fā)明口服液實驗安全。該藥對乙型鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大 腸桿菌的最小抑制濃度為1 : 150,淋球菌為1 : 150,白色念珠菌為1 : 300,對1 : 20稀 釋度時的殺滅時間為5分鐘，1 : 50時為10分鐘，1 : 100時為20分鐘，1 : 200時為40 分鐘，1 : 400時為8小時。
[0108] 藥理學(xué)實驗：
[0109] 大黃對正常小鼠由四氯化碳引起的肝損傷有明顯保護作用，表現(xiàn)為SG0T顯著降 低，使肝體比降低（大劑量）。對正常大鼠有顯著的利膽作用，膽汁流量增加持續(xù)2h。熊去 氧膽酸流量增加持續(xù)1小時。膽汁中膽固醇、膽紅素給藥前和給藥后組間比較未見顯著差 異性。為此我們進行了實驗研究。
[0110] 1、材料與方法
[0111] 藥物：本發(fā)明提醇沉液的制備：取一定量本發(fā)明原料藥，水煎兩次，水浴上濃縮至 一定體積后加95乙醇沉淀雜質(zhì)，過液，濾液回收乙醇。配成100%濃度。
[0112] 對照組為白云山消炎利膽片，國藥準字Z44022243。熊去氧膽酸為日本三菱化成生 產(chǎn)。
[0113] 動物ICR小鼠，SD大鼠均由本院動物研究室提供。
[0114] 1. 1對四氯化碳引起的小鼠肝損傷的保護作用：雄性小鼠78只，體重18-23g，按體 重隨機分層分成六組，每組13只。本發(fā)明3個劑量組2. 5g/kg、5.Og/kg、10.Og/kg，陽性對 照藥白云山消炎利膽片l〇g/kg，模型組，水對照組每天灌胃給藥一次，連續(xù)6d，于第六天給 藥后lh除水對照組外其余各組均皮下注射0. 15的四氯化碳菜油5ml/kg。16h后摘眼球取 血用北京化工廠產(chǎn)的試劑盒測定血清SGPT、SG0T。解剖出肝臟稱重，根據(jù)處死時體重計算 每只小鼠的肝體比、數(shù)據(jù)以均值士標準差表示，組間進行t檢驗。
[0115] 1. 2對正常大鼠膽汁流量的影響1. 2. 1
[0116] 膽汁流量的測定：取大鼠60只，雄性，體重250~350g，稱重隨機分成五組，每組 12只，實驗前禁食12h，不禁水。實驗以10 %烏拉坦1.Og/kg腹腔注射麻醉，仰位固定于手術(shù) 臺，沿腹正中線切開腹壁，找出十二指腸，在降部腸系膜中找到白色有韌性的膽管，在其下 穿二根絲線，結(jié)扎乳頭部，向肝臟方向作"V"形切口，插入硬質(zhì)塑料管，結(jié)扎固定，即可見有 淡黃綠色膽汗流出，試管收集膽汁，術(shù)后以鹽水紗布覆蓋腹腔，待穩(wěn)定lh后，先收集30min 的膽汁，作為給藥前的基礎(chǔ)值，然后分組給藥（經(jīng)十二指腸）。本發(fā)明3個劑量組2. 5g/kg、 5.Og/kg、10.Og/kg，水對照組，陽性藥熊去氧膽酸