>[0170] 在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了在沒有冷凍或凍干的情況下將一種或多種細(xì)胞在 環(huán)境溫度下基本干燥儲(chǔ)存的方法，該方法包括:將所述一種或多種細(xì)胞與包含調(diào)亡抑制劑 的預(yù)脫水制劑一起溫育W產(chǎn)生一種或多種預(yù)處理的細(xì)胞，去除所述預(yù)脫水制劑；W及在脫 水制劑的存在下使該一種或多種預(yù)處理的細(xì)胞脫水，W產(chǎn)生一種或多種基本干燥儲(chǔ)存的細(xì) 胞。在某些實(shí)施方案中，該方法可進(jìn)一步包括采用包含至少一種調(diào)亡抑制劑的再水化緩沖 液將一種或多種基本干燥儲(chǔ)存的細(xì)胞再水化。
[0171] 多種調(diào)亡抑制劑可在高濃度下或長(zhǎng)時(shí)間暴露時(shí)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用。相反，細(xì)胞 暴露于預(yù)脫水制劑或再水化制劑的時(shí)間太短或調(diào)亡抑制劑濃度太低將不會(huì)在脫水期間產(chǎn) 生期望的額外的處理效果。因此，對(duì)于采用預(yù)脫水步驟和再水化步驟將細(xì)胞基本干燥儲(chǔ)存 的方法，需要適當(dāng)?shù)乜刂票┞稌r(shí)間W實(shí)現(xiàn)期望的抑制效果。
[0172] 在某些實(shí)施方案中，所述方法中使用的至少一種調(diào)亡抑制劑選自陽服-eIF2-a抑 制劑、ASK1抑制劑、NRF2-KEAP1抑制劑、JNK抑制劑、P38MAP激酶抑制劑、I RE 1抑制劑、GSK3抑 制劑、MEK抑制劑、PI3K通路抑制劑、巧蛋白酶抑制劑W及脫天蛋白酶-1抑制劑。
[0173] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法中使用的至少一種調(diào)亡抑制劑是陽服-eIF2-a抑制 劑。在某些實(shí)施方案中，該陽服-eIF2-a抑制劑選自salubrinal、Sal-003(3-苯基-N-[2,2， 2-S氯-1-[(4-氯苯基)硫代氨基甲酯氨基]乙基]丙-2-締酷胺）、GSK 2606414(7-甲基-5-(1-{[3-(立氣甲基)苯基化酷基}-2,3-二氨-I-H-嗎隙-5-基)-7-H-化咯并[2,3d]喀晚-4- 胺）、GSK 2656157a-(5-(4-氨基-7-甲基-7H-化咯并[2,3-d]喀晚-5-基)-4-氣嗎|噪嘟-1-基)-2-(6-甲基化晚-2-基）乙酬)和ISRIB(反式-N，N'-(環(huán)己燒-l，4-二基)雙(2-(4-氯苯氧 基）乙酷胺）。在某些其他實(shí)施方案中，該陽服-eIF2-a抑制劑是salubrinal。
[0174] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法中使用的至少一種調(diào)亡抑制劑是ASKl抑制劑，優(yōu) 選NDQI-I或MLS-0315763。
[0175] 在又一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法中使用的至少一種調(diào)亡抑制劑是NRF2-KEAP1抑制 劑。在某些實(shí)施方案中，該NRF2-KEAP1抑制劑選自鼠尾草酸、S祗類化合物、蘿h硫素和叔下 基氨釀。
[0176] 在又一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法中使用的至少一種調(diào)亡抑制劑是GSK3抑制劑。在 某些實(shí)施方案中，該GSK3抑制劑選自CHIR98014(N6-[2-[[4-(2,4-二氯苯基)-5-(lH-咪挫- 2-基)-2-喀晚基]氨基]乙基]-3-硝基-2,6-化晚二胺）、丙戊酸鹽、CT99021和CT20026。
[01W]在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述方法中使用的至少一種調(diào)亡抑制劑是肥1(抑制劑。在 某些實(shí)施方案中，該MEK抑制劑選自PD0325901，N-[(2R)-2,3-二?基丙氧基]-3,4-二氣-2-[(2-氣-4-艦苯基)氨基]-苯甲酯胺;MEKl 62 (5- [(4-漠-2-氣苯基)氨基]-4-氣-N- (2-徑基 乙氧基)-1-甲基-IH-苯并咪挫-6-甲酯胺）、PD184352(2-(2-氯-4-艦苯基氨基)-N-(環(huán)丙基 甲氧基)-3,4-二氣苯甲酯胺）、pimaseパ化（（S)-N-(2,3-二?基丙基)-3-(2-氣-4-艦苯基 氨基）異煙酷胺）、司美替尼（6-(4-漠-2-氯苯基氨基）-7-氣-N-(2-^基乙氧基）-3-甲基-3H-苯并[d]咪挫-5-甲酯胺）、曲美替尼(N-(3-(3-環(huán)丙基-5-(2-氣-4-艦苯基氨基)-6，8-二 甲基-2,4,7-S氧代-3,4,6,7-四氨化晚并[4,3-d]喀晚-U2H)-基)苯基）乙酷胺KPD98059 (2-(2-氨基-3-甲氧基苯基）-4H-苯并化喃-4-酬）W及U0126-化細(xì)（（22,32)-2,3-雙（氨基 (2-氨基苯硫基)亞甲基)班巧臘，乙醇）。
[0178] 在又一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法中使用的至少一種調(diào)亡抑制劑是JNK抑制劑。在某 些實(shí)施方案中，該JNK抑制劑選自SP600125(蔥并[l-9-cd]化挫-6(2H)-酬）、JNK-IN-8(3-[[4-(二甲基氨基)-1-氧代-2-下締-1-基]氨基]-N-[3-甲基-4-[ [4-(3-化晚基)-2-喀晚 基]氨基]苯基]-苯甲酯胺）；JNK-抑制劑IX(N-(3-氯基-4,5,6,7-四氨苯并[b]嚷吩-2-基)- 1-糞甲酯胺）。
[0179] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法中使用的至少一種調(diào)亡抑制劑是JNK抑制劑和 P38MAP激酶抑制劑。在某些實(shí)施方案中，該P(yáng)38MAP激酶抑制劑選自SB203580(4-(4-(4-氣苯 基)-2-(4-(甲基亞橫酷基)苯基)-lH-咪挫-5-基川比晚）、LY2228820(5-(2-叔下基-4-(4-氣 苯基)-lH-咪挫-5-基)-3-新戊基-3H-咪挫并[4,5-b]化晚-2-胺二甲橫酸鹽）、PD169316(4-(4-氣苯基)-2-(4-硝基苯基)-5-(4-化晚基)-lH-咪挫）、PH-797804(3-(4-(2,4-二氣節(jié)氧 基)-3-漠-6-甲基-2-氧代化晚基)-N，4-二甲基苯甲酯胺）、SB202190(4-(4-(4-氣 苯基)-5-(化晚-4-基)-lH-咪挫-2-基)苯酪）、BIRB 796(達(dá)馬莫德；1-(3-叔下基-1-對(duì)甲苯 基-IH-化挫-5-基）-3-(4-(2-嗎嘟基乙氧基）糞-1-基）脈）、VX-702( 1-(5-氨基甲酯基-6-(2,4-二氣苯基川比晚-2-基）-1-(2,6-二氣苯基)脈）W及TAK-715(N-[4-[2-乙基-4-(3-甲 基苯基)-5-嚷挫基]-2-化晚基]-苯甲酯胺。
[0180] 在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述方法中使用的至少一種調(diào)亡抑制劑是PI3K抑制劑。 在某些實(shí)施方案中，該P(yáng)I3K抑制劑選自dactolisib(2-甲基-2-[4-(3-甲基-2-氧代-8-哇 嘟-3-基咪挫并[4,5-c]哇嘟-1-基)苯基]丙臘）、60(：-0941(2-(1護(hù)嗎|挫-4-基)-6-[[4-(甲 基橫酷基）-1-贓嗦基]甲基]-4-(4-嗎嘟基）嚷吩并[3,2-d]喀晚）、LY294002(2-(4-嗎嘟 基)-8-苯基-4H-1-苯并化喃-4-酬）、idealalisib(5-氣-3-苯基-2-[aS)-1-(7H-嚷嶺-6-基氨基）丙基]-4(3H)-哇挫嘟酬）、bu巧arlisib(5-(2,6-二嗎嘟基喀晚-4-基）-4-(S氣甲 基川比晚-2-胺）、GDC-0032(4-[5,6-二氨-2-[3-甲基-1-a-甲基乙基)-lH-l，2,4-S挫-5-基]咪挫并[l，2-d][l，4]苯并氧氮雜草-9-基]-a，a-二甲基-lH-化挫-1-乙酷胺）、PI-103 (3-(4-(4-嗎嘟基川比晚并[3' ,2' :4,5]巧喃并[3,2-d]喀晚-2-基)苯酪）、NU7441(8-(4-二 苯并嚷吩基）-2-(4-嗎嘟基苯并化喃-4-酬）、GSK2636771(2-甲基甲基-3-(二氣甲基）苯基]甲基]-6-(4-嗎嘟基)-lH-苯并咪挫-4-甲酸）、IPI-145(8-氯-2-苯基-3-[(1S)-1-(9H-嚷嶺-6-基氨基）乙基]異哇嘟酬）、)(L147(N-(3-(苯并[c][l，2,5]嚷 二挫-5-基氨基）哇喔嘟-2-基)-4-甲基苯橫酷胺）、TGX-221(7-甲基-2-(4-嗎嘟基)-9-[1-(苯基氨基）乙基]-4H-化晚并[l，2-a]喀晚-4-酬）、PIK-90(N-(7,8-二甲氧基-2,3-二氨-咪 挫并[1，2-C]哇挫嘟-5-基）-煙酷胺）、渥曼青霉素（11-(乙酷氧基)-1，化，7，8，9a，10，11， Ub-八氨-1-(甲氧基甲基）-9a，l化-二甲基-，（15,66尺，9曰5，11尺，1化1〇-3護(hù)氣[4,3,2-(16] 巧并[4,5-h]-2-苯并化喃-3,6,9-S酬）、VS-5584(5-[8-甲基-9-(1-甲基乙基)-2-(4-嗎嘟 基)-9H-嚷嶺-6-基]-2-喀晚胺)和TG-100703(3-( 2，4-二氨基-6-蝶晚基)-苯酪）。
[0181] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法中使用的至少一種調(diào)亡抑制劑是IRE-I抑制劑。在某 些實(shí)施方案中，該IRE-I抑制劑選自IRE1抑制劑I (N-[(2-徑基糞-1-基)亞甲基]嚷吩-2-橫 酷胺KIREl抑制劑11(3/-甲酯基-少-徑基-5/-甲氧基聯(lián)苯基-3-甲酯胺）W及IREl抑制劑 III(8-甲酯基-7-徑基-4-甲基香豆素，7-徑基-4-甲基-2-氧代-2H-色締-8-甲醒）。
[0182] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法中使用的至少一種調(diào)亡抑制劑是巧蛋白酶抑制劑。 在某些實(shí)施方案中，該巧蛋白酶抑制劑選自巧蛋白酶抑制劑KN-乙酷基-Leu-Leu-正亮氨 酸-CHO)、巧蛋白酶抑制劑IKN-乙酷基-Leu-Leu-Met)、巧蛋白酶抑制劑III (Z-Val-I^e-C冊(cè)）、巧蛋白酶抑制劑IV(Z-Leu-Leu-Tyr-C此F)、巧蛋白酶抑制劑V(嗎嘟基酷脈基;-Val-高苯丙氨酸-C出F)、巧蛋白酶抑制劑VK4-氣苯基橫酷基-化I-Leu-CHO)、巧蛋白酶抑制劑X (Z-Leu-a-氨基下酸-CON肥抽日）、巧蛋白酶抑制劑XKZA-Q-氨基下酸-C0NH(C出）3-嗎嘟）和 巧蛋白酶抑制劑XII(2寸-正鄉(xiāng)氨酸-CONH-C出-2-化晚基）。
[0183] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法中使用的至少一種調(diào)亡抑制劑是脫天蛋白酶-1抑制 劑。在某些實(shí)施方案中，該脫天蛋白酶-1抑制劑選自脫天蛋白酶-1抑制劑IKAc-YVAD-氯甲 基甲酬）、N-(2-哇嘟基)鄉(xiāng)氨酷-天冬氨酷-(2,6-二氣苯氧基）甲基甲酬(其中天冬氨酷殘基 是曰-甲基化或非曰-甲基化的）、\0(-765((5)-1-((5)-2-(4-氨基-3-氯苯甲酯氨基)-3,3-二 甲基下酷基)-N-((2R，3S)-2-乙氧基-5-氧代-四氨巧喃-3-基川比咯燒-2-甲酯胺)和ZVAD-氣甲基甲酬。
[0184] 在另一個(gè)方面，所述方法中使用的再水化制劑包含至少一種調(diào)亡抑制劑和至少一 種ER蛋白伴侶誘導(dǎo)劑。在某些實(shí)施方案中，該ER蛋白伴侶誘導(dǎo)劑選自BIX、丙戊酸鹽和裡。
[0185] 在另一個(gè)方面，所述方法中使用的再水化制劑包含至少一種調(diào)亡抑制劑和至少一 種自隧誘導(dǎo)劑。在某些實(shí)施方案中，該自隧誘導(dǎo)劑選自氣司必林、=氣拉嗦、匹莫齊特、尼卡 地平、尼古地平、洛贓下胺、胺艦酬、雷帕霉素、白襲蘆醇和SMER。
[0186] 在另一個(gè)方面，所述方法中使用的再水化制劑包含至少一種調(diào)亡抑制劑和至少一 種存活蛋白。在一個(gè)實(shí)施方案中，該存活蛋白為Bd-xL。
[0187] 在某些實(shí)施方案中，所述至少一種調(diào)亡抑制劑是可逆調(diào)亡抑制劑。在所述方法中， 可使用可逆調(diào)亡抑制劑在預(yù)脫水和/或再水化階段中處理細(xì)胞W使細(xì)胞載有保護(hù)量的調(diào)亡 抑制劑，例如，W阻斷一種或多種ER應(yīng)激通路激活，W使得在預(yù)脫水制劑和/或再水化制劑 去除和細(xì)胞重懸時(shí)可逆抑制劑最終從細(xì)胞中稀釋W(xué)避免延長(zhǎng)的暴露時(shí)間。 試劑盒
[0188] 在某些其他方面，提供了試劑盒，其包含含有干燥儲(chǔ)存穩(wěn)定劑的液體脫水制劑，用 于放置一種或多種細(xì)胞W進(jìn)行基本干燥儲(chǔ)存的樣品容器，W及包含關(guān)于使用所述液體脫水 制劑將一種或多種細(xì)胞基本干燥儲(chǔ)存的使用說明的包裝插頁。在某些實(shí)施方案中，該脫水 制劑進(jìn)一步包含至少一種調(diào)亡抑制劑，并且仍可進(jìn)一步包含含有至少一種調(diào)亡抑制劑的再 水化緩沖液。
[0189] 在某些其他實(shí)施方案中，所述試劑盒進(jìn)一步包含用于在脫水前固定一種或多種細(xì) 胞的固體支持體，包含至少一種調(diào)亡抑制劑的預(yù)脫水制劑，包含至少一種干燥儲(chǔ)存穩(wěn)定劑 的、用于所述一種或多種細(xì)胞的基本干燥儲(chǔ)存的脫水制劑，W及包含關(guān)于將所述一種或多 種細(xì)胞固定至所述固體支持體W及關(guān)于采用所述預(yù)脫水制劑和脫水制劑將一種或多種細(xì) 胞基本干燥儲(chǔ)存的說明的包裝插頁。在又一個(gè)實(shí)施方案中，所述試劑盒可進(jìn)一步包含再水 化緩沖液，該再水化緩沖液包含至少一種調(diào)亡抑制劑。 用于篩選制劑的通用方案
[0190] 可采用W下方案來分析和選擇用于細(xì)胞的基本干燥儲(chǔ)存的預(yù)脫水制劑、脫水制劑 和/或再水化制劑及其組合，該細(xì)胞在再水化后至少一小時(shí)保持至少一種功能性質(zhì)。簡(jiǎn)而言 之，將細(xì)胞接種到96孔板(20，000個(gè)細(xì)胞/孔）中的DMBl培養(yǎng)基或預(yù)脫水制劑(例如，DMBl培 養(yǎng)基+至少一種調(diào)亡抑制劑）中，并于37°C下溫育1小時(shí)至最多24小時(shí)。溫育后，將培養(yǎng)基從 細(xì)胞中吸出并丟棄，并且向每個(gè)孔中添加 IOyl脫水制劑。將開放的96孔板在37°C下溫育，如 果干燥半滿的96孔板則溫育75分鐘，或者如果干燥全滿的96孔板則溫育95分鐘。將干燥的 細(xì)胞在室溫下儲(chǔ)存1小時(shí)并采用可變量的包含至少一種調(diào)亡抑制劑的再水化制劑或在完全 DMEM培養(yǎng)基中再水化。將再水化的細(xì)胞在37°C的C〇2調(diào)節(jié)的培養(yǎng)箱中溫育1小時(shí)或24小時(shí)的 時(shí)間段。在指定的時(shí)間點(diǎn)，向再水化的細(xì)胞添加臺(tái)吩藍(lán)，并采用細(xì)胞計(jì)數(shù)器對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì) 數(shù)。通過臺(tái)吩藍(lán)染色的細(xì)胞的數(shù)目除W細(xì)胞總數(shù)來確定細(xì)胞存活百分比，從而確定非存活 細(xì)胞的分?jǐn)?shù)，并隨后計(jì)算存活細(xì)胞的百分比。 用于測(cè)定細(xì)胞的功能性質(zhì)的試驗(yàn)
[0191] 本發(fā)明的基本干燥儲(chǔ)存的細(xì)胞在再水化時(shí)保持至少一種該細(xì)胞在經(jīng)歷脫水前的 功能性質(zhì)。所述一種功能性質(zhì)可選自：代謝活性，細(xì)胞活力，增殖、分化、響應(yīng)于信號(hào)刺激(如 生長(zhǎng)因子引起的）W及表達(dá)預(yù)期細(xì)胞生物標(biāo)志物（如RNA合成、蛋白質(zhì)）的能力，和或分泌功 能。運(yùn)些功能性質(zhì)可采用任何方法來檢測(cè)或分析，該方法包括本文公開的方法W及本領(lǐng)域 技術(shù)人員已知的其他方法。下文描述了用于檢測(cè)再水化的干燥儲(chǔ)存細(xì)胞的至少一種功能性 質(zhì)的示例性方法。 1.細(xì)胞活力測(cè)定
[0192] 可采用臺(tái)吩藍(lán)染色程序來測(cè)量細(xì)胞活力。臺(tái)吩藍(lán)是一種具有帶負(fù)電荷的生色團(tuán)的 染料，除非細(xì)胞膜受損，否則其不與細(xì)胞相互作用，因此活細(xì)胞排斥該染料，而在顯微鏡下 檢查時(shí)受損的細(xì)胞呈藍(lán)色。在Leitz Fluoved顯微鏡下一式S份在帶有格室（Gr id 化ambersKHycor)的9mm KOVA載玻片上進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。報(bào)告了相對(duì)于未處理的對(duì)照細(xì)胞的 細(xì)胞存活百分比。 2. ATP含量測(cè)定
[0193]可根據(jù)制造商的說明采用Cell Titer-Glo發(fā)光法細(xì)胞活力測(cè)定(Cell Titer-Glo Luminiscent Cell viability AssayKPromega)來測(cè)定ATP含量。將Cell Titer-Glo Luminiscent試劑添加至細(xì)胞產(chǎn)生了與細(xì)胞內(nèi)ATP的量成比例的發(fā)光信號(hào)。ATP的量與培養(yǎng) 物中存在的細(xì)胞的數(shù)目成正比，因此它是一種在再水化的細(xì)胞制備物中測(cè)定活(代謝活性） 細(xì)胞數(shù)目的均相法。 3. 脫天蛋白酶測(cè)定
[0194] 可根據(jù)制造商的說明采用脫天蛋白酶-Glo 3/7測(cè)定（Caspase-Glo3/7 Assay) (Promega)來測(cè)量細(xì)胞調(diào)亡的程度。簡(jiǎn)而言之，該測(cè)定提供含有四膚序列DEVD的促發(fā)光 (pro-luminescent)脫天蛋白酶-3/7底物。該底物被裂解W釋放氨基蛋光素(一種用于產(chǎn)生 光的蛋光素酶底物）。單一脫天蛋白酶-Glo 3/7試劑的添加導(dǎo)致細(xì)胞裂解，隨后導(dǎo)致底物的 脫天蛋白酶裂解W及發(fā)光信號(hào)的產(chǎn)生。脫天蛋白酶活化的倍數(shù)計(jì)算為在標(biāo)準(zhǔn)組織培養(yǎng)條件 下培養(yǎng)的測(cè)試樣品中的活性與未處理的細(xì)胞的活性之比。
[0195] W說明而非限制的方式提供W下的實(shí)施例。 實(shí)施例1 在再水化后五天，示例性制劑保持活細(xì)胞并防止基本干燥儲(chǔ)存的細(xì)胞的細(xì)胞調(diào)亡
[0196] 該實(shí)施例表明，在環(huán)境溫度下基本干燥儲(chǔ)存5小時(shí)后再水化后多達(dá)5天，本文所述 的示例性預(yù)脫水制劑、脫水制劑和再水化制劑保持細(xì)胞活力并防止細(xì)胞被誘導(dǎo)調(diào)亡。
[0197] 采用預(yù)定的預(yù)脫水制劑(5(：1(3曰1油'111曰1)和5〔3(]\11^5-0315763))將化1^曰細(xì)胞基本 干燥儲(chǔ)存，然后用表1所示的制劑亞組處理，并在96孔板中脫水且在環(huán)境溫度下儲(chǔ)存5小時(shí)。 采用再水化制劑(RCl(salubrinal)和RC3(MLS-0315763))將細(xì)胞再水化，并且通過向96孔 板中添加 CellTiter-glo來測(cè)量ATP含量。在細(xì)胞裂解后，將50iil樣品轉(zhuǎn)移至白色384孔板中 進(jìn)行定量。通過測(cè)量ATP發(fā)光來測(cè)定基本干燥儲(chǔ)存的細(xì)胞的細(xì)胞活力。
[0198] 此外，在再水化后5天測(cè)定那些顯示陽性ATP活性的基本干燥儲(chǔ)存的細(xì)胞的ATP含 量。如表2所示，所有的無制劑對(duì)照細(xì)胞在第5天均是不存活的，而大部分的采用本文所述的 制劑和方法基本干燥儲(chǔ)存的細(xì)胞仍保持存活(高達(dá)90%的細(xì)胞活力），顯示了完整的、代謝 活性細(xì)胞的穩(wěn)定化。
[0199] 還通過測(cè)量脫天蛋白酶活性對(duì)再水化的細(xì)胞進(jìn)行分析，W確定基本干燥儲(chǔ)存5天 隨后再水化5天是否導(dǎo)致細(xì)胞調(diào)亡的誘導(dǎo)。將再水化5天的細(xì)胞暴露于脫天蛋白酶-glo (Promega) W檢測(cè)脫天蛋白酶3/7的活性。脫天蛋白酶活化計(jì)算為在標(biāo)準(zhǔn)組織培養(yǎng)條件下培 養(yǎng)的測(cè)試樣品中的活性與未處理的細(xì)胞的活性之比（表2)。一或低于一的結(jié)果被認(rèn)為是表 明不存在升高的脫天蛋白酶活性且表明沒有觀察到調(diào)亡的結(jié)果。 表2 在再水化后五天，示例性制劑保持活細(xì)胞并防止基本干燥儲(chǔ)存的細(xì)胞的細(xì)胞調(diào)亡
[0200] 如表2所示，相對(duì)于背景值沒有或幾乎沒有觀察到可檢測(cè)的脫天蛋白酶活性，表明 在干燥儲(chǔ)存5天并隨后再水化至少5天后沒有誘導(dǎo)調(diào)亡。 實(shí)施例2 在基本干燥儲(chǔ)存后再水化后屯天，示例性制劑保持活細(xì)胞
[0201] 該實(shí)施例表明，本文所述的示例性制劑能夠使活化La細(xì)胞在再水化后保持至少屯 小時(shí)。
[0202] 簡(jiǎn)而言之，采用預(yù)定的預(yù)脫水制劑(SCl(salubrinal)和SC3(MLS-0315763))和表1 所示的脫水制劑亞組將化La細(xì)胞基本干燥儲(chǔ)存屯小時(shí)，隨后采用W下列出的再水化制劑 (RCl(salubrinal)和RC3(MLS-0315763))再水化。采用臺(tái)吩藍(lán)法，在再水化后屯天對(duì)細(xì)胞活 力進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果在表3和圖4中示出。 表3 在基本干燥儲(chǔ)存后再水化后屯天，示例性制劑保持活細(xì)胞
[0203] 如表3所示，在再水化屯小時(shí)后，未受到保護(hù)的對(duì)照和海藻糖穩(wěn)定化的細(xì)胞沒有產(chǎn) 生任何活細(xì)胞，而本發(fā)明的示例性制劑W不同程度保持化La細(xì)胞活力多達(dá)屯小時(shí)，從而導(dǎo) 致相對(duì)于金標(biāo)準(zhǔn)海藻糖干燥的細(xì)胞的顯著的改善。 實(shí)施例3 在基本干燥儲(chǔ)存至少120小時(shí)期間，包含祀向ER應(yīng)激通路的示例性調(diào)亡抑制劑的制劑 保持細(xì)胞活力
[0204] 該實(shí)施例表明，當(dāng)在本文所述的制劑、組合物和方法中使用時(shí)，祀向邸應(yīng)激通路的 不同步驟的多種調(diào)亡抑制劑能夠?qū)⒓?xì)胞在環(huán)境溫度下基本干燥儲(chǔ)存至少24小時(shí)。
[020引簡(jiǎn)而言之，將人新生兒成纖維細(xì)胞懸浮于化scade培養(yǎng)基（Cascade Media) 106中， 并W每個(gè)試驗(yàn)100-5000個(gè)細(xì)胞的密度將10化1培養(yǎng)物接種在96孔板中，并且在環(huán)境氣氛的 環(huán)境下溫育，同時(shí)保持升高的C02水平（5 %-10% )和37°C的溫度W及85-95%的相對(duì)濕度。 將培養(yǎng)物調(diào)整為預(yù)脫水制劑的特定組成和每種調(diào)亡抑制劑的培養(yǎng)基特定濃度。將細(xì)胞在37 °C下溫育至少一小時(shí)但不超過3小時(shí)的一段時(shí)間。徹底去除預(yù)脫水制劑，并且向每個(gè)孔中添 加 IO-ISiil的MCS脫水制劑41(表1)。將細(xì)胞在37°(3、5%0)2、20%相對(duì)濕度下基本風(fēng)干90分 鐘，在環(huán)境溫度下儲(chǔ)存24、48或120小時(shí)。在合適的時(shí)間，通過用再水化制劑處理將基本干燥 儲(chǔ)存的細(xì)胞再水化，該再水化制劑包含與100-20化1預(yù)脫水制劑中相同濃度的調(diào)亡抑制劑。 通過如本文所述測(cè)量ATP含量來確定細(xì)胞活力。
[0206]結(jié)果在表4中示出： 表4 在基本干燥儲(chǔ)存至少120小時(shí)期間，包含祀向ER應(yīng)激通路的示例性調(diào)亡抑制劑的制劑 保持細(xì)胞活力

[0207] 如表4所示，在干燥儲(chǔ)存后120小時(shí)，祀向ER應(yīng)激通路中的不同步驟的示例性調(diào)亡 抑制劑保持了大量活細(xì)胞，該活細(xì)胞保