[0051] 底物緩沖液抑為5.0,其中化2冊(cè)〇4的摩爾濃度為0.2M、巧樣酸的摩爾濃度為 0.1M，配制方法示例：取1. 42徑化2冊(cè)〇4、0.96g巧樣酸，然后加入dd&O至50血，即得；
[005引洗脫液的配制方法示例；將木瓜蛋白酶用抑8. 0, 0.Imol/LTris-肥I緩沖液配 制成l-2mg/mL，再加入Immol/L二硫蘇糖醇值TT)37°C解育30min，得洗脫液；
[005引上樣緩沖液可由如下比例的組分配制而成；Tris-HCl;1%漠酪藍(lán)；dd&O;甘氨酸 =15. 5 ;2. 5 ;7 ;25,其中Tris-HCl的抑為6.8、摩爾濃度為1M;
[0054]電泳緩沖液的配制方法如下：取3.OgTris、14. 4g甘氨酸、溶于SOOmLd地2〇中，調(diào) 抑至8. 3后，定容至1L;
[005引捕獲鉛的物質(zhì)為貨號(hào)為"己傲得AP7019"的鼠抗化mAb，W下實(shí)施方式中所述的 與鉛特異性結(jié)合的物質(zhì)、抗化抗體、二抗、抗鉛抗體、化抗均為捕獲得鉛的物質(zhì)；
[0056] 本發(fā)明提供一種鉛-纖維蛋白原馨合物，鉛離子與纖維蛋白原通過琉基或/和半 脫氨酸殘基馨合而成。
[0057] 本發(fā)明還提供鉛-纖維蛋白原馨合物的制備方法，包括W下步驟：
[0058]A)鉛-纖維蛋白原塞合物的合成；在提純?cè)从谌梭w的纖維蛋白原或按照生物學(xué)方 法重組的纖維蛋白原中加入鉛離子進(jìn)行馨合反應(yīng)，得到反應(yīng)溶液；
[0059] B)鉛-纖維蛋白原馨合物純化；采用免疫親和層析法，去除步驟A)反應(yīng)溶液中 未反應(yīng)的纖維蛋白原、特異性抗體和鉛離子，即得鉛-纖維蛋白原馨合物，具體包括W下步 驟：
[0060] (1)溶解樣品；將上述步驟A)的鉛-纖維蛋白原馨合物溶解于生理鹽水中，得 鉛-纖維蛋白原馨合物溶液；
[0061] (2)平衡層析柱；使用稀釋緩沖液沖洗層析柱的管路，在層析柱中裝入能與纖維 蛋白原特異性結(jié)合的填料，裝柱后，繼續(xù)使用稀釋緩沖液平衡層析柱；
[0062] 所述能與纖維蛋白原特異性結(jié)合的填料為吸附有可與纖維蛋白原特異性結(jié)合物 質(zhì)的硅膠或樹脂；
[0063] (3)上樣；待層析柱平衡后，用稀釋緩沖液稀釋步驟（1)所述溶液，然后上柱，使纖 維蛋白原與填料特異性結(jié)合；
[0064] (4)洗脫；使用稀釋緩沖液沖洗層析柱至基線平衡，然后使用0. 05-0.lOmol/L的 化2冊(cè)〇4溶液進(jìn)行洗脫；
[0065] (5)收集；收集步驟（4)的洗脫液，收集完畢后立即使蛋白復(fù)原；
[0066] (6)透析；將步驟巧）中的收集的洗脫液裝透析袋，用d地2〇透析除鹽，換水S次 后，4°C透析過夜，收集樣本；
[0067] (7)平衡層析柱；采用新的層析柱，用稀釋緩沖液沖洗管路，在該層析柱中裝入能 與鉛特異性結(jié)合的填料，裝柱后再用稀釋緩沖液平衡層析柱；
[0068] 所述能與鉛特異性結(jié)合的填料為吸附有可與鉛特異性結(jié)合物質(zhì)的硅膠或樹脂；
[006引做上樣；待層析柱平衡后，用稀釋緩沖液稀釋步驟做中樣本，然后上柱；
[0070] (9)洗脫；使用稀釋緩沖液沖洗層析柱至基線平衡，然后使用0. 5-1.Omol/L的 化2冊(cè)〇4溶液進(jìn)行洗脫；
[0071] (10)收集；收集步驟巧）的洗脫液，收集完畢后立即使蛋白復(fù)原；
[007引（11)透析；將步驟（10)的洗脫液裝透析袋，用(1化0透析除鹽，換水立次后，4°C透 析過夜，收集樣本，即得鉛-纖維蛋白原馨合物。
[0073]C);對(duì)鉛-纖維蛋白原馨合物的鑒定，具體包括W下步驟：
[0074] (1)制備膠床；W瓊脂糖凝膠、聚丙締酷胺凝膠中的一種作為介質(zhì)制備膠床；
[00巧](2)加樣；取步驟B)中提取純化得到的鉛-纖維蛋白原馨合物，加入上樣緩沖液， 并混勻，然后加樣于樣品槽中；
[007引做電泳：連接電泳板，進(jìn)行電泳；
[0077] (4)檢測(cè)；在膠床上找出含有鉛的蛋白條帶，將該蛋白條帶取出，將蛋白條帶溶 解，然后再采用ICP-MS或AAS檢測(cè)是否含有鉛W及檢測(cè)鉛的含量。
[0078] 本發(fā)明還提供一種至少包括如上述的鉛-纖維蛋白原馨合物作為標(biāo)準(zhǔn)品的試劑 盒。
[0079] 在本發(fā)明中，能實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的試劑盒可W列出W下幾種，但并不限于此。
[0080] -種檢測(cè)血樣中鉛-纖維蛋白原馨合物的試劑盒，包括：含有可用于捕獲纖維蛋 白原的物質(zhì)的包被液、封閉液、洗漆緩沖液、可捕獲鉛的物質(zhì)作為二抗、酶標(biāo)抗體、底物、終 止液、稀釋緩沖液、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照等。
[0081] 一種檢測(cè)血樣中鉛-纖維蛋白原馨合物的試劑盒，包括：含有可用于捕獲纖維蛋 白原的物質(zhì)的包被液、封閉液、洗漆緩沖液、洗脫液、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照等。
[0082] -種檢測(cè)血樣中鉛-纖維蛋白原馨合物的試劑盒，包括：含有可用于捕獲纖維蛋 白原的物質(zhì)的包被液、封閉液、洗漆緩沖液、洗脫液、酸化劑、過氧化氨、標(biāo)準(zhǔn)品、陰性對(duì)照 等。
[0083] -種檢測(cè)血樣中鉛-纖維蛋白原馨合物的試劑盒，包括用于提取纖維蛋白原所需 提取試劑、復(fù)溶液、包括含有可用于捕獲鉛的物質(zhì)的包被液、封閉液、洗漆緩沖液、酶標(biāo)抗 體、底物、終止液、稀釋緩沖液、標(biāo)準(zhǔn)品、陰性對(duì)照等。
[0084] -種檢測(cè)血樣中鉛-纖維蛋白原馨合物的試劑盒，包括用于提取纖維蛋白原所需 提取試劑、復(fù)溶液、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照等。
[0085] -種檢測(cè)血樣中鉛-纖維蛋白原馨合物的試劑盒，包括用于提取纖維蛋白原所需 提取試劑、復(fù)溶液、酸化劑、過氧化氨、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照等。
[0086] -種檢測(cè)血樣中鉛-纖維蛋白原馨合物的試劑盒，包括用于提取纖維蛋白原所需 提取試劑、膠床介質(zhì)、復(fù)溶液、加樣緩沖液、溶解膠床上含有鉛的蛋白條帶所需液體、含有可 用于捕獲鉛的物質(zhì)的包被液、封閉液、洗漆緩沖液、酶標(biāo)抗體、底物、終止液、陽性對(duì)照、陰性 對(duì)照等。
[0087] -種檢測(cè)血樣中鉛-纖維蛋白原馨合物的試劑盒，包括用于提取纖維蛋白原所需 提取試劑、膠床介質(zhì)、復(fù)溶液、加樣緩沖液、溶解膠床上含有鉛的蛋白條帶所需液體、陽性對(duì) 照、陰性對(duì)照等。
[0088] -種檢測(cè)血樣中鉛-纖維蛋白原馨合物的試劑盒，包括用于提取纖維蛋白原所需 提取試劑、膠床介質(zhì)、復(fù)溶液、加樣緩沖液、溶解膠床上含有鉛的蛋白條帶所需液體、硝酸、 過氧化氨、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照等。
[0089] 上述幾種試劑盒中，所述陽性對(duì)照為標(biāo)準(zhǔn)品，即馨合有重金屬鉛的纖維蛋白原馨 合物或馨合有重金屬鉛的BSA馨合物（如BSA-ITC邸-Pb復(fù)合物）；所述陰性對(duì)照為稀釋緩 沖液。
[0090] 上述試劑盒用于檢測(cè)鉛-纖維蛋白原馨合物，W提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，并 使之在臨床中得到推廣。
[0091] 本發(fā)明還提供一種定量檢測(cè)鉛-纖維蛋白原馨合物的方法，W已知含量的上述的 鉛-纖維蛋白原馨合物作為標(biāo)準(zhǔn)品，采用W下方法之一對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)：酶聯(lián)免疫法、酶聯(lián) 免疫與原子吸收光譜結(jié)合法、酶聯(lián)免疫與電感禪合等離子體質(zhì)譜結(jié)合法、提純鉛-纖維蛋 白原馨合物與酶聯(lián)免疫結(jié)合法、提純鉛-纖維蛋白原馨合物與原子吸收光譜結(jié)合法、提純 鉛-纖維蛋白原馨合物與電感禪合等離子體質(zhì)譜結(jié)合法、電泳與酶聯(lián)免疫或原子吸收光譜 或電感禪合等離子體質(zhì)譜結(jié)合法。在本發(fā)明中，用檢測(cè)鉛-纖維蛋白原馨合物的方法可W 列出的有W下幾種，但并不限于W下幾種。
[0092]W下所述稀釋倍比為重量體積比。
[0093]方法一：酶聯(lián)免疫法巧LISA法）檢測(cè)鉛-纖維蛋白原馨合物，按照如下步驟檢測(cè)：
[0094] 1)包被；用稀釋緩沖液稀釋可W捕獲纖維蛋白原的物質(zhì)至1000-8000倍，加入 ELISA板微孔中，4°C過夜16-18小時(shí)，或37°C水浴1-3小時(shí)，儲(chǔ)存冰箱；
[0095] 2)封閉；移去稀釋緩沖液，并用洗漆緩沖液進(jìn)行洗漆，待洗漆完成后，加入封閉 液，37°C放置1小時(shí)，移去封閉液，并用洗漆緩沖液進(jìn)行洗漆，洗漆完成后，ELISA板于37°C 放置1小時(shí)；
[009引扣加待測(cè)樣本，并且溫育；從循環(huán)系統(tǒng)取樣，作待測(cè)樣本；W已知含量的鉛-纖維 蛋白原馨合物作標(biāo)準(zhǔn)品；用稀釋緩沖液將待測(cè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品均稀釋至20-80倍，加至微孔 中，37°C作用1-2小時(shí)；
[0097] 4)加入可W捕獲鉛的物質(zhì)，并且溫育；移去待測(cè)樣本，并用洗漆緩沖液進(jìn)行洗漆， 待洗漆完成后，加入用稀釋緩沖液稀釋50000-400000倍的抗鉛抗體，37°C作用1-2小時(shí)，使 抗鉛抗體與纖維蛋白原上的金屬鉛反應(yīng)；
[0098] 5)酶結(jié)合物溫育；移去抗鉛抗體，洗漆，加入用稀釋緩沖液稀釋的HRP酶標(biāo)抗體， 37°C作用1-2小時(shí)，使其與HRP酶標(biāo)抗體反應(yīng)；
[0099] 6)底物溫育；移去酶標(biāo)抗體，并用洗漆緩沖液進(jìn)行洗漆，待洗漆完成后，加入底 物，37°C避光作用30分鐘；
[0100] 7)終止反應(yīng)；加入終止液至每一微孔；
[010。 8)取波長(zhǎng)450皿，加完終止液后，將化ISA板置于酶標(biāo)儀上分別讀取待測(cè)樣本和標(biāo) 準(zhǔn)品的OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得待測(cè)樣本的含量。
[0102] 本方法中，步驟8)也可不使用酶標(biāo)儀，直接通過顯色情況進(jìn)行定性檢測(cè)。
[0103] 該方法利用ELISA原理，可W將全血中的特異性纖維蛋白原提取出來，提取出來 的纖維蛋白原上部分馨合有重金屬鉛，而該部分纖維蛋白原上的鉛可W被抗鉛的特異性抗 體所捕獲，之后可W再被辣根過氧化物酶、堿性磯酸酶等酶標(biāo)記的抗體所捕獲（該抗體不 識(shí)別包被蛋白），捕獲上的抗體在顯色劑及終止液的作用下，可W在儀器下讀出0D值，而不 含有馨合金屬鉛的纖維蛋白原，則不會(huì)被抗鉛的特異性抗體所捕獲，也不會(huì)與辣根過氧化 物酶、堿性磯酸酶等酶標(biāo)記的抗體所捕獲，而所用試劑中也不含有金屬鉛（陰性對(duì)照組結(jié) 果為陰性），因而當(dāng)所讀取的0D值結(jié)果顯示為陽性時(shí)，即可證明檢測(cè)出纖維蛋白原上馨合 的金屬鉛。
[0104]方法二：酶巧免疫與原子吸收光譜結(jié)合法巧LISA法+AAS法）檢測(cè)鉛-纖維蛋白 原馨合物按照如下步驟檢測(cè)：
[010