5] 1)包被；將能夠捕獲纖維蛋白原的物質(zhì)，如抗纖維蛋白原抗體包被于固相載體 上；用稀釋緩沖液稀釋抗纖維蛋白原抗體至1000-8000倍，加入化ISA板微孔中，4°C過夜 16-18小時，或37°C水浴1-3小時，儲存冰箱；
[0106] 2)封閉；移去稀釋緩沖液，并用洗漆緩沖液進(jìn)行洗漆，待洗漆完成后，加入封閉 液，37°C放置1小時，移去封閉液，并用相應(yīng)洗漆緩沖液進(jìn)行洗漆，洗漆完成后，ELISA板于 37 °C放置1小時；
[0107]扣加待測樣本，并且溫育；從循環(huán)系統(tǒng)中取樣，作待測樣本；W已知含量的鉛-纖 維蛋白原馨合物作標(biāo)準(zhǔn)品；用稀釋緩沖液稀釋至20-80倍，加至微孔中，37°C作用1-2小 時；
[0108] 4)洗脫；移去待測樣本，洗漆，加入洗脫液，在37°C下洗脫1-3小時；
[0109] 5)檢測；從ELISA微孔中取樣，于原子吸收光譜儀檢測馨合于纖維蛋白原上的鉛， 讀出相應(yīng)數(shù)值；
[0110] 該實施例利用ELISA原理對纖維蛋白原進(jìn)行捕獲，并結(jié)合原子吸收光譜（AA巧儀 檢測馨合于纖維蛋白原上的鉛；由于溶液中僅含有纖維蛋白原，且所用試劑中不含任何重 金屬（陰性對照組結(jié)果為陰性），不會對結(jié)果造成干擾，因而當(dāng)所讀取的結(jié)果顯示為陽性 時，即可證明檢測出纖維蛋白原上馨合的金屬鉛。
[0111] 立法三^酶聯(lián)免疫與電感禪合等離子體質(zhì)譜結(jié)合法巧LISA法+ICP-MS法）檢測 鉛-纖維蛋白原馨合物按照如下步驟檢測：
[0112] 1)包被；將能夠捕獲纖維蛋白原的物質(zhì)，如抗纖維蛋白原抗體包被于固相載體 上，用稀釋緩沖液稀釋抗纖維蛋白原抗體至1000-8000倍，加入化ISA板微孔中，4°C過夜 16-18小時，或37°C水浴1-3小時，儲存冰箱；
[0113] 2)封閉；移去稀釋緩沖液，并用洗漆緩沖液進(jìn)行洗漆，待洗漆完成后，加入封閉 液，37°C放置1小時，移去封閉液，并用相應(yīng)洗漆緩沖液進(jìn)行洗漆，洗漆完成后，ELISA板于 37 °C放置1小時；
[0114]扣加待測樣本，并且溫育；從循環(huán)系統(tǒng)取樣，作待測樣本；W已知含量的鉛-纖維 蛋白原馨合物作標(biāo)準(zhǔn)品；用稀釋緩沖液稀釋至20-80倍，加至微孔中，37°C作用1-2小時；
[0115] 4)洗脫；移去待測樣本，并用相應(yīng)洗漆緩沖液進(jìn)行洗漆，待洗漆完成后，加入洗脫 液，在37°C下洗脫1-3小時；
[0116] 5)酸化；在步驟4)中的溶液中加入酸化劑對溶液進(jìn)行酸化，封口過夜，徹底酸 化；
[0117] 6)檢測；加入過氧化氨，并且加熱趕酸，并從化ISA試劑板中洗脫的溶液中取 0.5mL液體，于電感禪合等離子體質(zhì)譜儀下檢測馨合于纖維蛋白原的鉛，讀出相應(yīng)數(shù)值。
[011引該方法在利用ELISA原理的基礎(chǔ)上，結(jié)合感禪合等離子體質(zhì)譜（ICP-M巧原理，用 電感禪合等離子體質(zhì)譜儀檢測馨合于纖維蛋白原上的鉛；即先采用化ISA原理將鉛-纖維 蛋白原馨合物提取出來，再采用感禪合等離子體質(zhì)譜儀對馨合于纖維蛋白原上的鉛進(jìn)行定 量檢測；由于溶液中僅含有纖維蛋白原，且所用試劑中不含任何重金屬（陰性對照組結(jié)果 為陰性），不會對結(jié)果造成干擾，因而當(dāng)所讀取的結(jié)果顯示為陽性時，即可證明檢測出纖維 蛋白原上馨合的金屬鉛。
[0119]方法四：提純鉛-纖維蛋白原莖合物與酶聯(lián)免疫結(jié)合法(提純法+ELISA法）檢測 鉛-纖維蛋白原馨合物，按照如下步驟檢測：
[0120] 1)從全血中提取非特異性纖維蛋白原；采用超速離屯、法、高壓液相層析法、凝膠 過濾層析法、凝膠電泳法等方法，從全血中提取纖維蛋白原，并將提取出的纖維蛋白原復(fù) 溶，得纖維蛋白原的溶液；
[0121] 2)包被；將抗鉛抗體包被于固相載體上，用稀釋緩沖液稀釋抗鉛抗體至 50000-400000倍，加入化ISA板微孔中，4°C過夜16-18小時，或37°C水浴1-3小時，儲存冰 箱；
[0122] 3)封閉；移去稀釋緩沖液，并用洗漆緩沖液進(jìn)行洗漆，待洗漆完成后，加入封閉 液，37°C放置1小時，移去封閉液，并用相應(yīng)洗漆緩沖液進(jìn)行洗漆，洗漆完成后，ELISA板于 37 °C放置1小時；
[012引 4)加待測樣本，并且溫育；從步驟1)的溶液中取樣，作待測樣本；W已知含量的 鉛-纖維蛋白原馨合物作標(biāo)準(zhǔn)品；用稀釋緩沖液稀釋至20-80倍，加至微孔中，37°C作用 1-2小時；
[0124] 5)酶結(jié)合物溫育；移去待測樣本，并用洗漆緩沖液進(jìn)行洗漆，待洗漆完成后，加入 用稀釋緩沖液稀釋的酶標(biāo)抗體，37°C作用1-2小時，使其與酶標(biāo)抗體反應(yīng)；
[0125] 6)底物溫育；移去酶標(biāo)抗體，并用相應(yīng)洗漆緩沖液進(jìn)行洗漆，待洗漆完成后，加入 底物，37°C避光作用30分鐘；
[0126] 7)終止反應(yīng)；加入終止液至每一微孔；
[0127] 8)取波長450nm，加完終止液后，在酶標(biāo)儀上分別讀取待測樣本和標(biāo)準(zhǔn)品的0D值， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得待測樣本的含量。
[012引本方法中，也可不使用酶標(biāo)儀，直接通過顯色情況進(jìn)行定性檢測。
[0129]方法五；提純鉛-纖維蛋白原馨合物與原子吸收光譜結(jié)合法（提純法+AAS法）檢 測血樣中鉛-纖維蛋白原馨合物，按照如下步驟檢測：
[0130] 1)從全血中提取非特異性纖維蛋白原；采用超速離屯、法、高壓液相層析法、凝膠 過濾層析法、凝膠電泳法等方法，從全血中提取纖維蛋白原，并將提取出的纖維蛋白原復(fù) 溶，得到纖維蛋白原溶液；
[0131] 2)檢測；從步驟1)的溶液中取樣，于原子吸收光譜儀檢測馨合于纖維蛋白原上的 鉛，讀出相應(yīng)數(shù)值。
[0132]方法六：提純鉛-纖維蛋白原莖合物與電感禪合等離子體質(zhì)譜結(jié)合法（提純法 +ICP-MS法）檢測鉛-纖維蛋白原馨合物，按照如下步驟檢測：
[0133] 1)從全血中提取非特異性纖維蛋白原；采用超速離屯、法、高壓液相層析法、凝膠 過濾層析法、凝膠電泳法等方法，從全血中提取纖維蛋白原，并將提取出的纖維蛋白原復(fù) 溶，得纖維蛋白原的溶液；
[0134] 2)酸化；從步驟1)的溶液中取樣，在溶液中加入硝酸對溶液進(jìn)行酸化，封口過夜， 徹底酸化；
[013引如檢測；加入過氧化氨，并且加熱趕酸后取0. 5血溶液，于電感禪合等離子體質(zhì)譜 儀下檢測馨合于纖維蛋白原上的鉛，讀出相應(yīng)數(shù)值。
[0136] 方法四、方法五和方法六均是通過全血提取法分離出纖維蛋白原，再采用特異性 檢測方法，測定纖維蛋白原中鉛-纖維蛋白原馨合物上鉛的含量；即先采用物理分離手段， 如超速離屯、法、高壓液相層析法、凝膠過濾層析法等，將纖維蛋白原從待測血漿樣本中分離 出來并復(fù)溶于生理鹽水中，再利用ELISA原理、原子吸收光譜檢測或進(jìn)行檢測電感禪合等 離子體質(zhì)譜法檢測鉛-纖維蛋白原馨合物上的鉛含量。
[0137] 方法^;：;電泳法+ELISA/AAS^CP-MS法檢測鉛-纖維蛋白原馨合物，具體如下；
[0138] 1)從全血中提取非特異性纖維蛋白原；采用超速離屯、法、高壓液相層析法、凝膠 過濾層析法、凝膠電泳法等方法，從全血中提取纖維蛋白原，將提取出來的纖維蛋白原復(fù)溶 于生理鹽水中，得纖維蛋白原的溶液；
[0139] 2)制備膠床；根據(jù)需要選擇合適的介質(zhì)（如瓊脂糖凝膠、聚丙締酷胺凝膠等），按 照相應(yīng)要求制備好相應(yīng)膠床；
[0140]扣加樣；從步驟1)的溶液中取8化溶液，W已知含量的鉛-纖維蛋白原馨合物 作標(biāo)準(zhǔn)品，加入2UL上樣緩沖液，并混勻，然后加樣于樣品槽中；
[0141] 4)電泳；連接電泳板，加電泳緩沖液，進(jìn)行電泳，并根據(jù)需求將蛋白按照分子量、 等電點等參數(shù)的不同進(jìn)行分離；
[0142] 5)檢測；在膠床上找出含有鉛的蛋白條帶，將該條帶取出，將該蛋白條帶溶解，然 后再分別利用化ISA或ICP-MS或AAS等原理檢測的鉛含量。
[0143] 此外，還可W利用此方法檢測鉛-纖維蛋白原馨合物的等電點、分子量及含量等。
[0144] 在方法走中，將纖維蛋白原從全血中提取出來，再采用凝膠電泳法對所提取的纖 維蛋白原進(jìn)行分離，再找出富含鉛的相應(yīng)條帶，再檢測相關(guān)纖維蛋白原的含量；即纖維蛋白 原可W用多種方法提純出來（例如超速離屯、法、高壓液相層析法、凝膠過濾層析法、凝膠電 泳法，ELISA方法等），將提純出來的纖維蛋白原復(fù)溶于溶液中，取一定量的纖維蛋白原，利 用電荷移動原理，進(jìn)行電泳（electro地oresis，E巧，在凝膠板（可根據(jù)需要采用不同介質(zhì)） 上可根據(jù)分子量、等電點等不同跑出不同的條帶，尋找出富含鉛的相應(yīng)條帶，將凝膠中的蛋 白質(zhì)復(fù)溶于溶液中，即可W在特定波長下檢測相關(guān)纖維蛋白原的含量，也可W利用ELISA、 AAS、ICP-MS等原理檢測出馨合于纖維蛋白原上的鉛含量，由于溶液中僅含有纖維蛋白原， 且所用試劑中不含任何重金屬（陰性對照組結(jié)果為陰性），不會對結(jié)果造成干擾，因而當(dāng)所 讀取的結(jié)果顯示為陽性時，即可證明檢測出纖維蛋白原上馨合的金屬鉛。
[0145]連施例1;合成法合成鉛-纖維軍白原馨合物，巧巧W下巧驟:
[0146] 本實施例所制備的鉛-纖維蛋白原塞合物，通過凝膠電泳進(jìn)一步分離，并通過電 感禪合等離子體質(zhì)譜或原子吸收光譜進(jìn)行檢測定性鑒定。
[0147] 本實施例使用的試劑的配制方法示例如下：
[014引1)棚酸鹽緩沖液，其摩爾濃度為0.01M，其制備方法示例如下：稱取0.31g棚酸溶 于400血d地20中，用0.Imol/L的化0H調(diào)節(jié)抑至9. 0,定容至500血。
[0149] 2化DTA-NaHC〇3溶液，其制備方法如下；取 1. 86g邸TA? 2H2〇 和 16. 8gNaHC〇3,溶 于900血d地2〇中，用1. 0M化OH調(diào)整抑至8. 0定容至1000血，高壓滅菌，室溫保存；
[0150] 3HTCBE購買自日本同仁化學(xué)研究所，貨號M030;
[015。 4)纖維蛋白原溶液；稱取4.Omg纖維蛋白原溶于4. 0血0. 01MpH9. 0棚酸鹽緩沖 液中，充分振蕩溶解，配制成1.Omg/mL的纖維蛋白原溶液；
[0152] 5)透析袋的截留分子量14000,購買自Biosho