r>[0141]
[0142] 將（5-異丙基-2, 4-二甲氧苯基）（2_(嗎啉代甲基）-4,6-二氫-5H-噻吩并 [2,3-c]吡咯-5-基）甲酮（30mg，70umol)溶于少量的無(wú)水二氯甲烷中，冰水冷卻下滴加 5mL的三溴化硼的二氯甲烷溶液（1M)，室溫下攪拌過(guò)夜，冰水冷卻，加少量的水淬滅反應(yīng)， 并用飽和的碳酸氫鈉水溶液將體系調(diào)至堿性，用二氯甲烷萃取，無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，減 壓濃縮得粗產(chǎn)品，經(jīng)制備薄層層析分離得純產(chǎn)品llmg，收率39. 2%。
[0143]LCMS:t=1. 88min, 403. 1 [M+H+]〇
[0144] 4匪尺（4001取，]\^00)3 7.15(8，1!1)，6.93(8，1!1)，6.38(8，1!1)，4.84(8,2!〇,4· 69 (s, 2H), 3. 82 - 3. 63 (m, 6H), 3. 21 (dt,J= 13. 8, 6. 9Hz, 1H), 2. 52 (s, 4H), 1. 23 (t,J= 6. 4Hz, 6H).
[0145] 實(shí)施例三
[0146] (2, 4-二羥基-5-異丙基苯基）（2-((4-(2-羥基乙基）哌嗪-1-基）甲基）-4,6-二 氫-5H-噻吩并[2, 3-c]吡咯-5-基）甲酮
[0147]
[0148] 步驟一 ：4_ ((5- (5-異丙基-2, 4-二甲氧基苯甲酰）-5, 6-二氫-4H-噻吩并 [2, 3-c]吡咯-2-基）甲基）哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制備
[0149]
[0150]將（2-溴-4, 6-二氫-5H-噻吩并[2, 3-c]吡咯-5-基）[2, 4-二甲氧基-5-(丙 烷-2-基）苯基]甲酮（85mg，207umol)和{[4-(叔丁氧基羰基）哌嗪-1-基]甲基}(三 氟）硼酸鉀（127mg, 414umol)溶于4mL二氧六環(huán)/水（v/v, 5:1)的混合溶劑中，并向其中加 入碳酸銫（135mg, 414umol),醋酸把（4mg, 20umol)和配體Xphos(19mg, 41umol)，氮?dú)庵脫Q， 密閉反應(yīng)管，微波條件下加熱至130°C反應(yīng)1小時(shí)，冷卻至室溫，加乙酸乙酯稀釋反應(yīng)液，經(jīng) 水洗，食鹽水洗，并用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓蒸去溶劑得粗產(chǎn)品，經(jīng)制備薄層層析分離 得純產(chǎn)品 45mg，收率 41 %。LCMS:t= 2. 58min, 530. 2 [M+H+]。
[0151] 步驟二：（5-異丙基-2, 4-二甲氧苯基）（2-(哌嗪-1-基甲基）-4, 6-二氫-5H-噻 吩并[2, 3-c]吡咯-5-基）甲酮鹽酸鹽的制備
[0152]
[0153] 將4-((5-(5-異丙基-2, 4-二甲氧基苯甲酰）-5,6-二氫-4H-噻吩并[2, 3-c]吡 P各-2-基）甲基）哌嗪-1-羧酸叔丁酯（45mg，85umol)溶于5mL鹽酸二氧六環(huán)（2.0M)中， 室溫下攪拌2小時(shí)，減壓濃縮干燥得產(chǎn)品40mg，收率100%。無(wú)須純化直接用于下步反應(yīng)。LCMS:t= 2. 19min, 430. 1 [M+H+] 〇
[0154] 步驟三：（2-((4-(2-羥基乙基）哌嗪-1-基）甲基）-4, 6-二氫-5H-噻吩并 [2, 3-c]吡咯-5-基）（5-異丙基-2, 4-二甲氧苯基）甲酮的制備
[0155]
[0156] 將（2, 4-二羥基-5-異丙基苯基）（2_(哌嗪-1-基甲基）-4,6-二氫-5H-噻吩 并[2,3-c]吡咯-5-基）甲酮鹽酸鹽（40mg，86umol)溶于5mL干燥的二氯甲烷中，并向其 中加入三乙胺（34mg，343umol)，室溫下攪拌10分鐘，滴加溴乙醇（32mg，257umol，加熱至 40°C，攪拌16小時(shí)。將反應(yīng)液冷卻至室溫，并用二氯甲烷稀釋，經(jīng)水洗，食鹽水洗，無(wú)水硫酸 鈉干燥，過(guò)濾，減壓濃縮得粗產(chǎn)品，經(jīng)制備薄層層析分離得產(chǎn)品28mg，收率68. 8%。LCMS:t =2. 21min, 474. 3[M+H+] 〇
[0157] 步驟四：（2,4-二羥基-5-異丙基苯基）（2-((4-(2-羥基乙基）哌嗪-1-基）甲 基）-4, 6-二氫-5H-噻吩并[2, 3-c]吡咯-5-基）甲酮的制備
[0158]
[0159] 將（2,4_二羥基-5-異丙基苯基）（2-((4-(2-羥基乙基）哌嗪-1-基）甲 基）_4, 6-二氫-5H-噻吩并[2, 3-c]吡咯-5-基）甲酮（28mg，59umol)溶于少量的無(wú)水 二氯甲烷中，冰水冷卻下滴加5mL的三溴化硼的二氯甲烷溶液（1M)，室溫下攪拌過(guò)夜，冰 水冷卻，加少量的水淬滅反應(yīng)，并用飽和的碳酸氫鈉水溶液將體系調(diào)至堿性，用二氯甲烷 萃取，無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，減壓濃縮得粗產(chǎn)品，經(jīng)制備薄層層析分離得純產(chǎn)品6mg，收率 22. 7 %。LCMS:t= 1. 96min，446. 2 [M+H+]。
[0160] 4NMR(400MHz，MeOD)δ7· 15 (s，1H)，6· 82 (s，1H)，6· 38 (s，1H)，4· 84 (s，2H)，4· 69 ( s, 2H), 3. 87 - 3. 68 (m, 4H), 3. 28-3.ll(m, 1H), 2. 79 (dd,J= 39.4,34. 3Hz, 10H), 1.21(t,J =6. 6Hz, 6H).
[0161] 實(shí)施例四
[0162] 1-(4-((5-(2, 4-二羥基-5-異丙基苯甲酰）-5, 6-二氫-4H-噻吩并[2, 3-c]吡 咯-2-基）甲基）哌嗪-1-基）乙烷-1-酮
[0163]
[0164] 步驟一 ：1-(4-((5-(5-異丙基-2, 4-二甲氧基苯甲酰）-5, 6-二氫-4H-噻吩并 [2, 3-c]吡咯-2-基）甲基）哌嗪-1-基）乙烷-1-酮的制備
[0165]
[0166] 將（5-異丙基-2, 4-二甲氧苯基）（2-(哌嗪-1-基甲基）-4,6-二氫-5H-噻吩并 [2,3-c]吡咯-5-基）甲酮鹽酸鹽（20mg，43umol)溶于3mL干燥的二氯甲烷中，并向其中加 入N,N-二異丙基乙胺（28mg, 214umol)，攪拌10分鐘，加入醋酸酐（9mg, 86umol)，室溫下攪 拌過(guò)夜。用二氯甲烷稀釋反應(yīng)液，并用水洗，食鹽水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓蒸去溶 劑得粗產(chǎn)品，經(jīng)柱層析分離得產(chǎn)品20mg，收率100%。LCMS:t= 2.Olmin，472. 1 [M+H+]。
[0167] 步驟二：1- (4-((5- (2, 4-二羥基-5-異丙基苯甲酰）-5, 6-二氫-4H-噻吩并 [2, 3-c]吡咯-2-基）甲基）哌嗪-1-基）乙烷-1-酮的制備
[0168]
[0169] 將1-(4-((5-(5-異丙基-2, 4-二甲氧基苯甲酰）-5,6-二氫-4H-噻吩并[2, 3-c] 吡咯-2-基）甲基）哌嗪-1-基）乙烷-1-酮（20mg，42umol)溶于少量的無(wú)水二氯甲烷中， 冰水冷卻下滴加5mL的三溴化硼的二氯甲烷溶液（1M)，室溫下攪拌過(guò)夜，冰水冷卻，加少量 的水淬滅反應(yīng)，并用飽和的碳酸氫鈉水溶液將體系調(diào)至堿性，用二氯甲烷萃取，無(wú)水硫酸鎂 干燥，過(guò)濾，減壓濃縮得粗產(chǎn)品，經(jīng)制備薄層層析分離得純產(chǎn)品l〇mg，收率53%。LCMS:t= 1. 88min, 444. 1 [M+H+] 〇
[0170]NMR(400MHz,MeOD) 5 7. 16 (s, 1H) , 6. 84 (s, 1H) , 6. 38 (s, 1H) , 4. 85 ( s, 2H), 4. 70 (s, 2H), 3. 76 (s, 2H), 3. 66 - 3. 48 (m, 4H), 3. 17-3. 24 (m, 1H), 2. 59 - 2. 42 (m, 4H), 2. 13 (s, 3H), 1. 22 (d,J= 6. 9Hz, 6H).
[0171] 實(shí)施例五
[0172] 2-(4-((5-(2, 4-二羥基-5-異丙基苯甲酰）-5, 6-二氫-4H-噻吩并[2, 3-c]吡 咯-2-基）甲基）哌嗪-1-基）乙酸乙酯
[0173]
[0174] 步驟一 ：（2,4-二羥基-5-異丙基苯基）（2-(哌嗪-1-基甲基）-4,6-二氫-5H-噻 吩并[2, 3-c]吡咯-5-基）甲酮?dú)滗逅猁}的制備
[0175]
[0176] 將4-((5-(5-異丙基-2, 4-二甲氧基苯甲酰）-5,6-二氫-4H-噻吩并[2, 3-c] 吡咯-2-基）甲基）哌嗪-1-羧酸叔丁酯（33mg，62umol)溶于少量的無(wú)水二氯甲烷中，冰 水冷卻下滴加5mL三溴化硼的二氯甲烷溶液（1M)，室溫下攪拌過(guò)夜，冰水冷卻，加少量的 水淬滅反應(yīng)，并用飽和的碳酸氫鈉水溶液將體系調(diào)至堿性，用二氯甲烷萃取，無(wú)水硫酸鎂干 燥，過(guò)濾，減壓濃縮得粗產(chǎn)品，經(jīng)制備薄層層析分離得純產(chǎn)品25mg，收率100%。LCMS:t= 1. 88min, 402. 1 [M+H+] 〇
[0177] 步驟二：2- (4- ((5- (2, 4-二羥基-5-異丙基苯甲酰）-5, 6-二氫-4H-噻吩并 [2, 3-c]吡咯-2-基）甲基）哌嗪-1-基）乙酸乙酯的制備
[0178]
[0179] 將（2, 4-二羥基-5-異丙基苯基）（2-(哌嗪-1-基甲基）-4,6-二氫-5H-噻吩并 [2, 3-c]批略-5-基）甲酮?dú)滗逅猁}（15mg, 37umol)溶于3mL干燥的二氯甲燒中，向其中加 入溴乙酸乙酯（6. 2mg，37umol)，室溫下攪拌過(guò)夜，用二氯甲烷稀釋反應(yīng)液，經(jīng)水洗，食鹽水 洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓濃縮，得到粗產(chǎn)品，經(jīng)柱層析分離得產(chǎn)品1. 5mg，收率8%。LCMS:t= 2. 04min, 488. 2 [M+H+] 〇
[0180] 蟲NMR(400MHz,MeOD)δ7· 03 (s, 1H)，6· 72 (s, 1H),6· 26 (s, 1H),4· 72 (s, 2H)，4· 58 (s, 2H), 4. 07 (q,J= 7. 1Hz, 2H), 3. 62 (s, 2H), 3. 13 (s, 2H), 3. 05-3. 12 (m, 1H), 2. 51 (d,J= 19. 8Hz, 8H), 1. 16 (t,J= 7. 1Hz, 3H), 1. 10 (d,J= 6. 9Hz, 6H).
[0181] 實(shí)施例六
[0182] 4-((5- (2, 4-二羥基-5-異丙基苯甲酰）-5, 6-二氫-4H-噻吩并[2, 3-c]吡 咯-2-基）甲基）哌嗪-2-酮
[0183]
[0184] 步驟一 ：4_((5- (5-異丙基-2, 4-二甲氧基苯甲酰）-5, 6-二氫-4H-噻吩并 [2, 3-c]吡咯-2-基）甲基）哌嗪-2-酮的制備
[0185]
[0186]將（2-溴-4, 6-二氫-5H-噻吩并[2, 3-c]吡咯-5-基）[2, 4-二甲氧基-5-(丙 烷-2-基）苯基]甲酮（100mg，244umol)和三氟[(3-羰基哌嗪-1-基）甲基]硼酸鉀 (330mg，975umol)溶于4mL二氧六環(huán)/水（v/v，5:l)的混合溶劑中，并向其中加入碳酸銫 (158mg, 487umol),醋酸把（4. 7mg, 24umol)和配體Xphos(23mg, 49umol),氮?dú)庵脫Q,密閉反 應(yīng)管，微波條件下加熱至130°C反應(yīng)1小時(shí)，冷卻至室溫，加乙酸乙酯稀釋反應(yīng)液，經(jīng)水洗， 食鹽水洗，并用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓蒸去溶劑得粗產(chǎn)品，經(jīng)制備薄層層析分離得純 產(chǎn)品 33mg，收率 30. 5 %。LCMS:t= 2. 27min, 444. 1 [M+H+]。
[0187] 步驟二：4-((5-(2, 4-二羥基-5-異丙基苯甲酰）-5, 6-二氫-4H-噻吩并[2, 3-c] 吡咯-2-基）甲基）哌嗪-2-酮的制備
[0188]
[0189] 將4-((5-(5-異丙基-2, 4-二甲氧基苯甲酰）-5,6-二氫-4H-噻吩并[2, 3-c]吡 咯-2-基）甲基）哌嗪-2-酮（33mg，74umol)溶于少量的無(wú)水二氯甲烷中，冰水冷卻下滴 加5mL三溴化硼的二氯甲烷溶液（1M)，室溫下攪拌過(guò)夜，冰水冷卻，加少量的水淬滅反應(yīng)， 并用飽和的碳酸氫鈉水溶液將體系調(diào)至堿性，用二氯甲烷萃取，無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，減 壓濃縮得粗產(chǎn)品，經(jīng)制備薄層層析分離得純產(chǎn)品15mg，收率48. 5 %。
[0190]LCMS:t= 1. 96min，416. 2 [M+H+]。
[0191]NMR(400MHz,MeOD)δ7. 04 (s, 1H) , 6. 73 (s, 1H) , 6. 26 (s, 1H) , 4. 73 ( s, 2H), 4. 59 (s, 2H) ,3.71 (s, 2H), 3. 02-3. 22 (m, 1H), 3. 05 (s, 2H), 2. 62 (dd,J= 11.3,6. 0Hz, 2H),Ll〇 (d,J= 6. 9Hz, 6H).
[0192] 生物學(xué)評(píng)價(jià)
[0193]1、HSP90抑制化合物的酶學(xué)活性檢測(cè)
[0194]HSP90抑制化合物的酶學(xué)活性是用突光偏振（FluorescencePolarization)競(jìng)爭(zhēng) 性結(jié)合方法檢測(cè)的。在384孔板中，加入反應(yīng)液，HSP90蛋白，F(xiàn)ITC標(biāo)記的格爾德霉素，然 后在不同孔中加上不同濃度的HSP90抑制化合物，在室溫下反應(yīng)3小時(shí)后用BioTek酶標(biāo)儀 測(cè)量平行光和垂直光讀值，以及各自的背景吸光度。mP(milli-polarization)的計(jì)算方法 為：
[0195]mP= 1000*[(Is-IsB)-(Ip-IpB)]/[(Is-IsB) + (Ip-IpB)]。
[0196] 根據(jù)各濃度抑制率，采用4參數(shù)非線性回歸方法計(jì)算半數(shù)抑制濃度IC5。。
[0197] 本發(fā)明化合物的生化學(xué)活性通過(guò)以上的試驗(yàn)進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得的IC5。值見下表。
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