用于生產(chǎn)誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法和組合物的制作方法
【專利說明】用于生產(chǎn)誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法和組合物
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)
[0002] 本申請(qǐng)要求于2013年3月12日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)第61/777, 973號(hào)和2012年 9月7日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)第61/698, 359號(hào)的權(quán)益，其二者均整體地并入本文以作參考。
[0003] 序列表
[0004] 本申請(qǐng)含有以ASCII格式經(jīng)由EFS-Web提交的序列表，其整體地并入本文以作參 考。所述ASCII拷貝創(chuàng)建于2013年8月15日，命名為P4968Rl-W0_SL.txt，大小為48, 692 子T。 發(fā)明領(lǐng)域
[0005] 本發(fā)明涉及用于通過重編程非肝細(xì)胞而產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法和組合物。
[0006] 發(fā)明背景
[0007] Takahashi和Yamanaka于2006年報(bào)道了將編碼四種蛋白質(zhì)因子（0ct3/4、Sox2、 c-Myc和Klf4)的基因?qū)氲椒只男∈蟪审w成纖維細(xì)胞中誘導(dǎo)這些細(xì)胞成為多能干細(xì)胞 (誘導(dǎo)多能干細(xì)胞）（參見Takahashi和Yamanaka(2006) Cell 126:663-676)。在這篇原始 報(bào)道之后，還通過用編碼類似的人類蛋白質(zhì)因子（0CT4、S0X2、KLF4和c-MYC)的基因轉(zhuǎn)化人 類體細(xì)胞，或通過用編碼人類0CT4和S0X2因子的基因加上編碼兩個(gè)其它人類因子（NAN0G 和LIN28)的基因轉(zhuǎn)化人類體細(xì)胞，在人細(xì)胞中誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（分別參見Takahashi等 人，（2007)Cell 131:861-872和Yu等人，（2007)Science 318:1917-1920;參見Huangfu等 人，（2008)Nature Biotechnology 26:1269-1275)。報(bào)道的這些方法使用反轉(zhuǎn)錄病毒或慢 病毒使得編碼重編程因子的基因整合到轉(zhuǎn)化的細(xì)胞的基因組中。然而，產(chǎn)生的重編程細(xì)胞 的基因組含有病毒DNA，其可能引起有害的遺傳后果。許多后續(xù)研宄通過使用非整合型腺病 毒和慢病毒（Sommer 2009Stem Cells 27:543-549);瞬時(shí)表達(dá)載體（Okita 2008Science 322 ;949-953);和載體序列的靶向整合和切除（Kaji 2009Nature 458:771-775 ;Woltjen 2009Nature 458:766-770)，來解決這一問題。然而，這些途徑仍然涉及病毒、基因整合或 DNA質(zhì)粒載體的使用，因此對(duì)于臨床應(yīng)用而言呈現(xiàn)出多種生物學(xué)和管理上的障礙。若干研 宄通過描述無病毒且無DNA的多能重編程方法已經(jīng)解決了該問題。已將多能重編程因子 作為重組蛋白質(zhì)、合成mRNA和合成miRNA引入（參見，例如Zhou等人，（2009)Cell Stem Cell4:381-384;Warren等人，（2010)Cell Stem Cell 7:618-630;和Miyoshi 等人，（2011) Cell Stem Cell 8:633-638)。
[0008] 兩則最近的報(bào)道描述了通過將編碼定義的轉(zhuǎn)錄因子的多種基因的組合導(dǎo)入到小 鼠成纖維細(xì)胞中使小鼠成纖維細(xì)胞直接轉(zhuǎn)化成肝細(xì)胞樣細(xì)胞，而不需首先經(jīng)過多能的中間 態(tài)（參見 Huang 等人，（2011)Nature 475:386-389;以及 Sekiya 和 Suzuki (2011)Nature 475:390-393)。在這些報(bào)道中，Huang鑒定了 Gata4、Hnfl a和Foxa3的組合（連同pl9Art 的失活）足以誘導(dǎo)鼠肝轉(zhuǎn)化；Sekiya和Suzuki鑒定了誘導(dǎo)鼠肝轉(zhuǎn)化的三種特定的雙轉(zhuǎn)錄 因子組合，包括Hnf4 a加Foxal、Foxa2或Foxa3。如在以上提到的非常早期的重編程研宄 中，Huang等人以及Sekiya和Suzuki都使用慢病毒或反轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)導(dǎo)以在小鼠成 纖維細(xì)胞中表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子。然而，盡管已經(jīng)使用多種非整合型和非基于DNA的方法證實(shí)了 重編程至多能性（如在以上引用的研宄中所描述），但從未描述過既不使用小鼠細(xì)胞也不 使用人細(xì)胞、不使用重編程因子的整合型慢病毒或反轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的遞送的一種體細(xì)胞向 另一類型的直接轉(zhuǎn)化。
[0009] 盡管成纖維細(xì)胞的直接轉(zhuǎn)化已經(jīng)在小鼠細(xì)胞包括神經(jīng)元、造血細(xì)胞、心肌細(xì)胞和 肝細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)，但僅有少數(shù)成功地應(yīng)用于人細(xì)胞（參見Vierbuchen等人，（2010)Nature 463:1035-1041 ;Szabo 等人，（2010)Nature468:521-526 ;Ieda 等人，（2010) 142:375-386 ; Huang 等人，（2011) Nature475:386-389 ;Sekiya&Suzuk (2011) Nature 475:390-393 ;Pang 等人，（2011)Nature 476:220-223;以及 Ieda 等人，（2010)Cell 142:375-386)。盡管 近來的報(bào)道描述了成功鑒定了對(duì)將小鼠成纖維細(xì)胞重編程為小鼠肝細(xì)胞樣細(xì)胞必需且充 分的因子和過程，該相同的方法學(xué)在應(yīng)用于人細(xì)胞時(shí)不一定成功?？茖W(xué)文獻(xiàn)已表明，改 變小鼠細(xì)胞的分化狀態(tài)所必需且充分的因子和過程可能不同于改變?nèi)思?xì)胞的分化狀態(tài) 所必需且充分的因子和過程（參見，例如Yi等人，（2012)Cell Research 22:616-619; Gonzalez 等人，（2011)Nature Reviews Genetics 12:231-242 ;Pang 等人，（2011)Nature 476:220-223 ；Vierbuchen&ffernig(2011)Nature Biotechnology 29:892-907)〇
[0010] 從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生人類誘導(dǎo)肝細(xì)胞而沒有任何基因組改變的風(fēng)險(xiǎn)作為通過 細(xì)胞移植治療疾病的途徑提供巨大前景。從得自個(gè)體患者的人類非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生的人 類誘導(dǎo)肝細(xì)胞可以使不具有免疫排斥的患者特異性療法的開發(fā)成為可能，由此消除免疫抑 制程序的需求。另外，從疾病特異性的非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生人類誘導(dǎo)肝細(xì)胞能夠提供用于 建模和研宄特定疾病狀態(tài)并開發(fā)可用于治療這些疾病的治療劑的工具。
[0011] 因此，本領(lǐng)域?qū)τ阼b定將人類非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為人類誘導(dǎo)肝細(xì)胞所必需且 充分的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子存在需求。本發(fā)明通過提供可用于從人類非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生人類誘 導(dǎo)肝細(xì)胞的方法和組合物而滿足該需求。
[0012] 發(fā)明概述
[0013] 本發(fā)明部分地提供用于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞、誘導(dǎo)肝細(xì)胞群體 的方法和組合物、包含誘導(dǎo)肝細(xì)胞的組合物以及其用途。在一些實(shí)施方案中，非肝細(xì)胞的細(xì) 胞是非肝細(xì)胞的體細(xì)胞。在其它實(shí)施方案中，本文提供的組合物和方法可用于通過重編程 人類非肝細(xì)胞的細(xì)胞來產(chǎn)生人類誘導(dǎo)肝細(xì)胞。
[0014] 本文提供的方法和組合物可用于高效率地將起始細(xì)胞或起始細(xì)胞群體（例如，非 肝細(xì)胞的細(xì)胞或非肝細(xì)胞的細(xì)胞群體）重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞或誘導(dǎo)肝細(xì)胞群體。在一些 實(shí)施方案中，起始細(xì)胞或起始細(xì)胞群體是人類非肝細(xì)胞的細(xì)胞或人類非肝細(xì)胞的細(xì)胞群體 (例如，人源的非肝細(xì)胞的細(xì)胞），且產(chǎn)生的誘導(dǎo)肝細(xì)胞是人類誘導(dǎo)肝細(xì)胞或人類誘導(dǎo)肝細(xì) 胞群體。
[0015] 本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)鑒定？(^八1、？(《42、？(《43、11即認(rèn)、11即44和64了44(以及其多 種組合）是能夠?qū)⑷祟惙歉渭?xì)胞的細(xì)胞重編程為人類誘導(dǎo)肝細(xì)胞的關(guān)鍵重編程因子。本發(fā) 明的發(fā)明人還已鑒定 CEBPA、GATA6、HHEX、HNF1B、HNF6A、F0XA1、F0XA2、F0XA3、GATA4、HNF1A 和HNF4A是能夠?qū)⑷祟惙歉渭?xì)胞的細(xì)胞重編程為人類誘導(dǎo)肝細(xì)胞的關(guān)鍵重編程因子。
[0016] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法（例 如，將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法），該方法包含，提供非肝細(xì)胞的細(xì)胞，將 該非肝細(xì)胞與提高或誘導(dǎo)一種或多種重編程因子的表達(dá)或活性的活性劑接觸，以及在適合 于重編程非肝細(xì)胞的細(xì)胞的條件下培養(yǎng)該非肝細(xì)胞的細(xì)胞，由此從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘 導(dǎo)肝細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述活性劑提高或誘導(dǎo)以下因子中的一種或多種的表達(dá)或 活性$(?41、？(《424(?43、11即認(rèn)、11即44和64144。在其它實(shí)施方案中，所述活性劑是編碼 以下因子中的一種或多種的核酸：F0XA1、F0XA2、F0XA3、HNF1A、HNF4A和GATA4。在其它實(shí) 施方案中，所述活性劑是以下因子中的一種或多種：F0XA1、F0XA2、F0XA3、HNF1A、HNF4A和 GATA4。在另外的其它實(shí)施方式中，所述活性劑提高或誘導(dǎo)以下因子中的一種或多種的表達(dá) 或活性：CEBPA、GATA6、HHEX、HNF1B、HNF6A、F0XA1、F0XA2、F0XA3、GATA4、HNF1A 和 HNF4A。 在另外的其它實(shí)施方式中，所述活性劑是編碼以下因子中的一種或多種的核酸：CEBPA、 GATA6、HHEX、HNF1B、HNF6A、F0XA1、F0XA2、F0XA3、GATA4、HNF1A 和 HNF4A。在另外的實(shí)施方 案中，所述活性劑是以下因子中的一種或多種：CEBPA、GATA6、HHEX、HNF1B、HNF6A、F0XA1、 F0XA2、F0XA3、GATA4、HNF1A和HNF4A。在一些實(shí)施方案中，所述核酸是能夠表達(dá)重編程因 子的核酸。在一些實(shí)施方案中，所述核酸是RNA或mRNA。
[0017] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法（例 如，將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法），所述方法包含：提供非肝細(xì)胞的細(xì) 胞，向所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼一種或多種重編 程因子的核酸分子，以及在適合于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的條件下培養(yǎng)所 述非肝細(xì)胞的細(xì)胞，由此從所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述 核酸制劑是編碼一種或多種重編程分子的核酸的混合物（例如，包含不同核酸分子的混合 物的核酸制劑）。
[0018] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法（例 如，將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法），所述方法包含：提供非肝細(xì)胞的細(xì) 胞，向所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含能夠表達(dá)一種或多種 重編程因子的核酸分子，以及在適合于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的條件下培 養(yǎng)所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞，由此從所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中， 所述核酸制劑是編碼一種或多種重編程分子并且能夠表達(dá)所述一種或多種重編程因子的 核酸的混合物（例如，包含不同核酸分子的混合物的核酸制劑）。
[0019] 在一些實(shí)施方案中，可用于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的核酸制劑包 含編碼F0XA1、F0XA2、F0XA3、HNF1A、HNF4A和GATA4的核酸分子。在一些實(shí)施方案中，可用 于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的核酸制劑包含編碼CEBPA、GATA6、HHEX、HNF1B、 HNF6A、F0XA1、F0XA2、F0XA3、GATA4、HNF1A和HNF4A的核酸分子。在一些實(shí)施方案中，可用 于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的核酸制劑包含編碼F0XA1、F0XA2、F0XA3、HNF1A 和HNF4A的核酸分子。在一些實(shí)施方案中，可用于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞 的核酸制劑包含編碼F0XA1、F0XA3、HNF1A和HNF4A的核酸分子，編碼F0XA1、F0XA2、HNF1A 和HNF4A的核酸分子，或編碼F0XA2、F0XA3、HNF1A和HNF4A的核酸分子。在一些實(shí)施方 案中，可用于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的核酸制劑包含編碼F0XA1、HNF1A和 HNF4A的核酸分子。在一些實(shí)施方案中，可用于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的核 酸制劑包含編碼F0XA3、HNF1A和HNF4A的核酸分子。在一些實(shí)施方案中，可用于將非肝細(xì)胞 的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的核酸制劑包含編碼F0XA2、HNF1A和HNF4A的核酸分子。在一 些實(shí)施方案中，可用于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的核酸制劑包含編碼F0XA1、 F0XA3和HNF1A的核酸分子，編碼F0XA1、F0XA2和HNF1A的核酸分子，或編碼F0XA2、F0XA3 和HNF1A的核酸分子。在某些實(shí)施方案中，編碼重編程因子的核酸分子是RNA分子或mRNA 分子。
[0020] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法（例 如，將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法），所述方法包含：提供非肝細(xì)胞的細(xì) 胞，向所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含這樣的核酸分子，其包 含含有SEQ ID N0:33的核酸序列、含有SEQ ID N0:35的核酸序列、含有SEQ ID N0:37的 核酸序列、含有SEQ ID N0:39的核酸序列、含有SEQ ID N0:41的核酸序列和含有SEQ ID N0:43的核酸序列，以及在適合于重編程的條件下培養(yǎng)所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞，由此從所述非 肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述核酸制劑包含這樣的核酸分子，其 包含含有SEQ ID N0:33的核酸序列、含有SEQ ID N0:35的核酸序列、含有SEQ ID N0:37的 核酸序列、含有SEQ ID N0:39的核酸序列、和含有SEQ ID N0:41核酸序列。在一些實(shí)施方 案中，所述核酸制劑包含這樣的核酸分子，其包含含有SEQ ID N0:33的核酸序列、含有SEQ ID N0:37的核酸序列、含有SEQ ID N0:39的核酸序列、和含有SEQ ID N0:41的核酸序列。 在一些實(shí)施方案中，所述核酸制劑包含這樣的核酸分子，其包含含有SEQ ID N0:33的核酸 序列、含有SEQ ID N0:35的核酸序列、含有SEQ ID N0:39的核酸序列、和含有SEQ ID N0:41 的核酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述核酸制劑包含這樣的核酸分子，其包含含有SEQ ID NO: 35的核酸序列、含有SEQ ID NO: 37的核酸序列、含有SEQ ID NO: 39的核酸序列、和含有 SEQ ID N0:41的核酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述核酸制劑包含這樣的核酸分子，其包含 含有SEQ ID N0:33的核酸序列、含有SEQ ID N0:39的核酸序列、和含有SEQ ID N0:41的核 酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述核酸制劑包含這樣的核酸分子，其包含含有SEQ ID NO:37 的核酸序列、含有SEQ ID N0:39的核酸序列、和含有SEQ ID N0:41的核酸序列。在一些實(shí) 施方案中，所述核酸制劑包含這樣的核酸分子，其包含含有SEQ ID N0:35的核酸序列、含有 SEQ ID N0:39的核酸序列、和含有SEQ ID N0:41的核酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述核 酸制劑包含這樣的核酸分子，其包含含有SEQ ID N0:33的核酸序列、含有SEQ ID N0:37的 核酸序列、和含有SEQ ID N0:39的核酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述核酸制劑包含這樣 的核酸分子，其包含含有SEQ ID N0:33的核酸序列，含有SEQ ID N0:35的核酸序列、和含 有SEQ ID N0:39的核酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述核酸制劑包含這樣的核酸分子，其 包含含有SEQ ID N0:35的核酸序列、含有SEQ ID N0:37的核酸序列、和含有SEQ ID N0:39 的核酸序列。
[0021] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法（例 如，將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法），所述方法包含：提供非肝細(xì)胞的細(xì) 胞，向所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼多肽的核酸分子， 其編碼包含SEQ ID N0:34的氨基酸序列、包含SEQ ID N0:36的氨基酸序列、包含SEG ID NO: 38的氨基酸序列、包含SEQ ID NO: 40的氨基酸序列、包含SEQ ID NO: 42的氨基酸序列、 和包含SEQ ID N0:44的氨基酸序列，以及在適合于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞 的條件下培養(yǎng)所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞，由此從所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞。在特定 的實(shí)施方案中，所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞是人類非肝細(xì)胞的細(xì)胞，并且得到的誘導(dǎo)肝細(xì)胞是人 類誘導(dǎo)肝細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述核酸制劑包含編碼多肽的核酸分子，其編碼包含 SEQ ID N0:34的氨基酸序列、包含SEQ ID N0:36的氨基酸序列、包含SEG ID N0:38的氨 基酸序列、包含SEQ ID N0:40的氨基酸序列、和包含SEQ ID N0:42的氨基酸序列。在一些 實(shí)施方案中，所述核酸制劑包含編碼多肽的核酸分子，其編碼包含SEQ ID N0:34的氨基酸 序列、包含SEG ID N0:38的氨基酸序列、包含SEQ ID N0:40的氨基酸序列、和包含SEQ ID N0:42的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述核酸制劑包含編碼多肽的核酸分子，其編碼 包含SEQ ID N0:34的氨基酸序列、包含SEG ID N0:36的氨基酸序列、包含SEQ ID N0:40 的氨基酸序列、和包含SEQ ID N0:42的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述核酸制劑包 含編碼多肽的核酸分子，其編碼包含SEQ ID NO: 36的氨基酸序列、包含SEG ID NO: 38的氨 基酸序列、包含SEQ ID N0:40的氨基酸序列、和包含SEQ ID N0:42的氨基酸序列。在一些 實(shí)施方案中，所述核酸制劑包含編碼多肽的核酸分子，其編碼包含SEQ ID N0:34的氨基酸 序列、包含SEQ ID N0:40的氨基酸序列、和包含SEQ ID N0:42的氨基酸序列。在一些實(shí) 施方案中，所述核酸制劑包含編碼多肽的核酸分子，其編碼的氨基酸序列包含含有SEG ID NO:38的氨基酸序列、包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列、和包含SEQ ID NO:42的氨基酸序 列。在一些實(shí)施方案中，所述核酸制劑包含編碼多肽的核酸分子，其編碼的氨基酸序列包含 含有SEG ID NO:36的氨基酸序列、包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列、和包含SEQ ID NO:42 的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述核酸制劑包含編碼多肽的核酸分子，其編碼包含 SEQ ID NO: 34的氨基酸序列、包含SEG ID NO: 38的氨基酸序列、和包含SEQ ID NO: 40的氨 基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述核酸制劑包含編碼多肽的核酸分子，其編碼的氨基酸序 列包含含有SEG ID NO: 34的氨基酸序列、包含SEQ ID NO: 36的氨基酸序列、和包含SEQ ID N0:40的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，所述核酸制劑包含編碼多肽的核酸分子，其編碼 的氨基酸序列包含含有SEG ID NO: 36的氨基酸序列、包含SEQ ID NO: 38的氨基酸序列、和 包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列。
[0022] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法（例 如，將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法），所述方法包含：提供非肝細(xì)胞的細(xì) 胞，向所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞中引入包含一種或多種重編程因子的蛋白質(zhì)制劑，在適合于將 非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的條件下培養(yǎng)所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞，由此從所述非肝 細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述蛋白質(zhì)制劑是一種或多種重編程因 子蛋白質(zhì)或多肽的混合物。在一些實(shí)施方案中，用于從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞 (例如，用于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞）的蛋白質(zhì)制劑包含F(xiàn)0XA1、F0XA2、 F0XA3、HNF1A、HNF4A、和GATA4。在一些實(shí)施方案中，用于從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì) 胞（例如，用于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞）的蛋白質(zhì)制劑包含CEBPA、GATA6、 HHEX、HNF1B、HNF6A、F0XA1、F0XA2、F0XA3、GATA4、HNF1A、和 HNF4A。在其它實(shí)施方案中，所 述蛋白質(zhì)制劑包含？(^八1、？(《42、？(《43、顯?14、和顯?44。在其它實(shí)施方案中，所述蛋白質(zhì) 制劑包含？(^八1、？(《43、顯?認(rèn)、和顯?44。在其它實(shí)施方案中，所述蛋白質(zhì)制劑包含？(《八1、 F0XA2、HNF1A、和HNF4A。在其它實(shí)施方案中，所述蛋白質(zhì)