肝細胞的細胞"涵蓋非肝細胞來源的細胞或非肝細胞的分化狀態(tài)或譜系 的細胞。非肝細胞的細胞可包括體細胞。非肝細胞的細胞的非限制性實例包括成纖維細 胞、骨髓細胞、臍血細胞、內皮細胞（例如人臍靜脈內皮細胞）、角質形成細胞、系膜細胞、胚 胎干細胞等。
[0080] 術語"誘導肝細胞"涵蓋通過實驗操作從非肝細胞的細胞產生或獲得的肝細胞 (例如，肝細胞的細胞）。誘導肝細胞表達指示著肝細胞譜系細胞的標志物，諸如，例如白 蛋白、甲胎蛋白、a 1-抗胰蛋白酶等。誘導肝細胞可以具有功能性肝細胞的特征，包括功能 性未成熟肝細胞、肝細胞前體、或成熟肝細胞，例如雙成核、中性脂滴、糖原貯積和例如白蛋 白、甲胎蛋白、a 1-抗胰蛋白酶、細胞角蛋白18、S樣蛋白1(DLK1)、CD133、N-鈣黏著蛋白 (NCAD)等的表達。
[0081] 術語"重編程"是指細胞的分化狀態(tài)改變成不同的分化狀態(tài)的過程。重編程還指 終末分化的細胞（例如，終末分化的體細胞）的分化狀態(tài)改變成不同的分化狀態(tài)的過程。 [0082] 術語"體細胞"涵蓋生物體內不能形成生物體內的所有類型細胞的任何細胞，即， 非多能性的細胞。換言之，體細胞是已經(jīng)充分分化的細胞，其不會自然產生機體的所有三個 胚層（即，外胚層、中胚層和內胚層）的細胞。
[0083] 本文使用的術語"引入"是指將活性劑、蛋白質、多肽或核酸帶入活細胞的過程，包 括但不限于通過本文所述的引入方式。
[0084] 本文使用的術語"接觸"是指將活性劑、蛋白質、多肽或核酸與活細胞接觸的過程， 包括但不限于通過本文所述的接觸方式。
[0085] 本文使用的術語"重編程因子"是指這樣的蛋白質、多肽、多核苷酸、核酸或其它 生物分子，其在單獨使用或與其他因子或條件組合使用時，導致其中引入或表達該重編程 因子的細胞的分化狀態(tài)改變。在本發(fā)明的一些實施方案中，重編程因子是由核酸（例如， mRNA)編碼的蛋白質或多肽，對其而言，編碼該重編程因子的核酸被引入細胞中，從而產生 與未引入編碼重編程因子的核酸的細胞相比表現(xiàn)出改變的分化狀態(tài)的細胞。在某些情況 下，重編程因子是轉錄因子。
[0086] 提及"在適合于將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的條件下"培養(yǎng)非肝細胞 的細胞是指這樣的生長條件，其會支持目標細胞（即誘導肝細胞）和起始細胞類型（例如， 新生兒成纖維細胞、胎兒成纖維細胞、角質形成細胞、間充質干細胞、造血干細胞等）的生 長和健康。
[0087] 術語"藥物制劑"是指這樣的制劑，其處于允許其中所含的活性成分的生物活性有 效的形式，并不含有對該制劑所施用的對象所不能接受的毒性的額外組分。
[0088] 本文使用的"治療"（以及其語法上的變形例如"治療"或"治療"）是指嘗試改變 所治療的個體的自然過程的臨床干預，并且可以就預防而進行或在臨床病理期間進行。合 意的治療效果包括但不限于預防疾病的發(fā)生或復發(fā)、減輕癥狀、減少疾病的任何直接或間 接的病理后果、防止轉移、降低疾病進展速率、改善或減緩疾病狀態(tài)以及緩解或改善預后。 [0089] 本文使用的"有效量"是指有效達到任何本文所述方法的目的（例如，期望目的） 的量。
[0090] 除非另外指明，本文使用的單數(shù)形式的"a"、"an"和"the"包括復數(shù)形式的提及。 [0091] 本文中提及"約"某數(shù)值或參數(shù)是指該技術領域的技術人員容易知曉的對于各值 的通常的誤差范圍。本文中提及"約"某數(shù)值或參數(shù)包括（并描述）涉及該數(shù)值或參數(shù)本 身的方面。例如，提到"約X"的記載包括"X"的記載。
[0092] 產牛誘導肝細朐的方法
[0093] 本發(fā)明提供高效地將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的方法和組合物、通過 本發(fā)明方法產生的誘導肝細胞群、包含通過本發(fā)明方法產生的誘導肝細胞的組合物、以及 其用途。本文描述的方法和組合物可用于高效率地將起始細胞或起始細胞群（例如，非肝 細胞的細胞或非肝細胞的細胞群）重編程為誘導肝細胞或誘導肝細胞群。在一些實施方案 中，該起始細胞或起始細胞群是人類非肝細胞的細胞或人類非肝細胞的細胞群（例如，人 源的非肝細胞的細胞），并且所產生的誘導肝細胞是人類誘導肝細胞或人類誘導肝細胞群。
[0094] 可使用多種類型的非肝細胞的細胞的起始細胞群來實踐本發(fā)明的方法，包括，例 如成纖維細胞、間充質細胞、角質形成細胞、造血細胞等。非肝細胞的細胞可以是成體或非 成體來源，包括新生兒、胎兒和胚胎非肝細胞的細胞。可用于本發(fā)明方法的起始細胞還包括 原代胚胎細胞、胎兒細胞、新生兒細胞、體細胞、血細胞（例如，造血細胞）、非成體細胞、以 及衍生自成體組織、臍帶組織、胎盤組織、骨髓和其它細胞來源的細胞。在某些實施方案中， 非肝細胞的細胞的起始細胞或起始細胞群體來源于人（即，人類非肝細胞的細胞），并且根 據(jù)本發(fā)明方法由其產生的誘導肝細胞是人類誘導肝細胞。
[0095] 本發(fā)明的發(fā)明人已鑒定了足以將人類非肝細胞的細胞重編程為人類誘導肝細 胞的關鍵重編程因子。所鑒定的可用于將人類非肝細胞的細胞重編程為人類誘導肝細 胞的重編程因子包括叉頭框蛋白Al(FOXAl)，亦稱為肝細胞核因子3 a (HNF3A);叉頭框 蛋白A2(F0XA2)，亦稱為肝細胞核因子3f3 (HNF3B)或轉錄因子3B(TCF3B);叉頭框蛋白 A3 (F0XA3)，亦稱為肝細胞核因子3 Y (HNF3G)或轉錄因子3G(TCF3G);肝細胞核因子1同源 框A(HNFIA);肝細胞核因子4a (HNF4A)，亦稱為核受體亞家族2,組A，成員1(NR2A1);以及 轉錄因子GATA結合蛋白4(GATA4)。鑒定的其它可用于將人類非肝細胞的細胞重編程為人 類誘導肝細胞的重編程因子包括CEBPA、GATA6、HHEX、HNF1B和HNF6A。本發(fā)明公開了重編 程因子的多種組合對于將人類非肝細胞的細胞重編程為人類誘導肝細胞而言是重要的。
[0096] 在一些實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞的方法（例 如，將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的方法），所述方法包含：提供非肝細胞的細 胞，向所述非肝細胞的細胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼一種或多種重編 程因子的核酸分子，以及在適合于將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的條件下培養(yǎng)所 述非肝細胞的細胞，由此從所述非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞。在一些實施方案中，所述 核酸制劑是編碼一種或多種重編程分子的核酸的混合物（例如，包含核酸分子的混合物的 核酸制劑）。在特定的實施方案中，所述非肝細胞的細胞是人類非肝細胞的細胞，并且所產 生的誘導肝細胞是人類誘導肝細胞。
[0097] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞的方法（例 如，將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的方法），所述方法包含：提供非肝細胞的細 胞，向所述非肝細胞的細胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼F0XA1、F0XA2、 F0XA3、HNF1A、HNF4A和GATA的核酸分子，以及在適合于將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝 細胞的條件下培養(yǎng)所述非肝細胞的細胞，由此從所述非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞。在 特定的實施方案中，所述非肝細胞的細胞是人類非肝細胞的細胞，并且所產生的誘導肝細 胞是人類誘導肝細胞。
[0098] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞的方法（例 如，將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的方法），所述方法包含：提供非肝細胞的細 胞，向所述非肝細胞的細胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含這樣的核酸分子，其包 含含有SEQ ID N0:33的核酸序列、含有SEQ ID N0:35的核酸序列、含有SEQ ID N0:37的 核酸序列、含有SEQ ID N0:39的核酸序列、含有SEQ ID N0:41的核酸序列、和含有SEQ ID N0:43的核酸序列，以及在適合于重編程的條件下培養(yǎng)非肝細胞的細胞，由此從所述非肝細 胞的細胞產生誘導肝細胞。在特定的實施方案中，所述非肝細胞的細胞是人類非肝細胞的 細胞，并且所產生的誘導肝細胞是人類誘導肝細胞。
[0099] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞的方法（例 如，將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的方法），所述方法包含：提供非肝細胞的細 胞，向所述非肝細胞的細胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼多肽的核酸分子， 其編碼包含SEQ ID N0:34的氨基酸序列、包含SEQ ID N0:36的氨基酸序列、包含SEG ID NO: 38的氨基酸序列、包含SEQ ID NO: 40的氨基酸序列、包含SEQ ID NO: 42的氨基酸序列、 和包含SEQ ID N0:44的氨基酸序列，以及在適合于將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞 的條件下培養(yǎng)所述非肝細胞的細胞，由此從所述非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞。在特定 的實施方案中，所述非肝細胞的細胞是人類非肝細胞的細胞，并且所產生的誘導肝細胞是 人類誘導肝細胞。
[0100] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞的方法（例 如，將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的方法），所述方法包含：提供非肝細胞的細 胞，向所述非肝細胞的細胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼F0XA1、F0XA2、 F0XA3、HNF1A和HNF4A的核酸分子，以及在適合于將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞 的條件下培養(yǎng)所述非肝細胞的細胞，由此從所述非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞。在特定 的實施方案中，所述非肝細胞的細胞是人類非肝細胞的細胞，并且所產生的誘導肝細胞是 人類誘導肝細胞。
[0101] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞的方法（例 如，將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的方法），所述方法包含：提供非肝細胞的細 胞，向所述非肝細胞的細胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含這樣的核酸分子，其包 含含有SEQ ID N0:33的核酸序列、含有SEQ ID N0:35的核酸序列、含有SEQ ID N0:37的 核酸序列、含有SEQ ID N0:39的核酸序列、和含有SEQ ID N0:41的核酸序列，以及在適合 于將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的條件下培養(yǎng)所述非肝細胞的細胞，由此從所述 非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞。在特定的實施方案中，所述非肝細胞的細胞是人類非肝 細胞的細胞，并且所產生的誘導肝細胞是人類誘導肝細胞。
[0102] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞的方法（例 如，將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的方法），所述方法包含：提供非肝細胞的細 胞，向所述非肝細胞的細胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼多肽的核酸分子， 其編碼含有SEQ ID N0:34的氨基酸序列、含有SEQ ID N0:36的氨基酸序列、含有SEG ID NO:38的氨基酸序列、含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列、和含有SEQ ID NO:42的氨基酸序 列，以及在適合于將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的條件下培養(yǎng)所述非肝細胞的細 胞，由此從所述非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞。在特定的實施方案中，所述非肝細胞的細 胞是人類非肝細胞的細胞，并且所產生的誘導肝細胞是人類誘導肝細胞。
[0103] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞的方法（例 如，將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的方法），所述方法包含：提供非肝細胞的細 胞，向所述非肝細胞的細胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼F0XA1、F0XA3、 HNF1A、和HNF4A的核酸分子，以及在適合于將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的條件 下培養(yǎng)所述非肝細胞的細胞，由此從所述非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞。在特定的實施 方案中，所述非肝細胞的細胞是人類非肝細胞的細胞，并且所產生的誘導肝細胞是人類誘 導肝細胞。
[0104] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞的方法（例 如，將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的方法），所述方法包含：提供非肝細胞的細 胞，向所述非肝細胞的細胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼多肽的核酸分子， 其編碼含有SEQ ID N0:34的氨基酸序列、含有SEG ID N0:38的氨基酸序列、含有SEQ ID N0:40的氨基酸序列、和含有SEQ ID N0:42的氨基酸序列，以及在適合于將非肝細胞的細胞 重編程為誘導肝細胞的條件下培養(yǎng)所述非肝細胞的細胞，由此從所述非肝細胞的細胞產生 誘導肝細胞。在特定的實施方案中，所述非肝細胞的細胞是人類非肝細胞的細胞，并且所產 生的誘導肝細胞是人類誘導肝細胞。
[0105] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞的方法（例 如，將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的方法），所述方法包含：提供非肝細胞的細 胞，向所述非肝細胞的細胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含這樣的核酸分子，其包 含含有SEQ ID N0:33的核酸序列、含有SEQ ID N0:37的核酸序列、含有SEQ ID N0:39的核 酸序列、和含有SEQ ID N0:41的核酸序列，以及在適合于將非肝細胞的細胞重編程為誘導 肝細胞的條件下培養(yǎng)所述非肝細胞的細胞，由此從所述非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞。 在特定的實施方案中，所述非肝細胞的細胞是人類非肝細胞的細胞，并且所產生的誘導肝 細胞是人類誘導肝細胞。
[0106] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞的方法（例 如，將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的方法），所述方法包含：提供非肝細胞的細 胞，向所述非肝細胞的細胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼F0XA1、F0XA2、 HNF1A、和HNF4A的核酸分子，以及在適合于將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的條件 下培養(yǎng)所述非肝細胞的細胞，由此從所述非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞。在特定的實施 方案中，所述非肝細胞的細胞是人類非肝細胞的細胞，并且所產生的誘導肝細胞是人類誘 導肝細胞。
[0107] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞的方法（例 如，將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的方法），所述方法包含：提供非肝細胞的細 胞，向所述非肝細胞的細胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼多肽的核酸分子， 其編碼含有SEQ ID N0:34的氨基酸序列、含有SEG ID N0:36的氨基酸序列、含有SEQ ID N0:40的氨基酸序列、和含有SEQ ID N0:42的氨基酸序列，以及在適合于將非肝細胞的細胞 重編程為誘導肝細胞的條件下培養(yǎng)所述非肝細胞的細胞，由此從所述非肝細胞的細胞產生 誘導肝細胞。在特定的實施方案中，所述非肝細胞的細胞是人類非肝細胞的細胞，并且所產 生的誘導肝細胞是人類誘導肝細胞。
[0108] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞的方法（例 如，將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的方法），所述方法包含：提供非肝細胞的細 胞，向所述非肝細胞的細胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含這樣的核酸分子，其包 含含有SEQ ID N0:33的核酸序列、含有SEQ ID N0:35的核酸序列、含有SEQ ID N0:39的核 酸序列、和含有SEQ ID N0:41的核酸序列，以及在適合于將非肝細胞的細胞重編程為誘導 肝細胞的條件下培養(yǎng)所述非肝細胞的細胞，由此從所述非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞。 在特定的實施方案中，所述非肝細胞的細胞是人類非肝細胞的細胞，并且所產生的誘導肝 細胞是人類誘導肝細胞。
[0109] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞的方法（例 如，將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的方法），所述方法包含：提供非肝細胞的細 胞，向所述非肝細胞的細胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼F0XA2、F0XA3、 HNF1A、和HNF4A的核酸分子，以及在適合于將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的條件 下培養(yǎng)所述非肝細胞的細胞，由此從所述非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞。在特定的實施 方案中，所述非肝細胞的細胞是人類非肝細胞的細胞，并且所產生的誘導肝細胞是人類誘 導肝細胞。
[0110] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞的方法（例 如，將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的方法），所述方法包含：提供非肝細胞的細 胞，向所述非肝細胞的細胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼多肽的核酸分子， 其編碼含有SEQ ID N0:36的氨基酸序列、含有SEG ID N0:38的氨基酸序列、含有SEQ ID N0:40的氨基酸序列、和含有SEQ ID N0:42的氨基酸序列，以及在適合于將非肝細胞的細胞 重編程為誘導肝細胞的條件下培養(yǎng)所述非肝細胞的細胞，由此從所述非肝細胞的細胞產生 誘導肝細胞。在特定的實施方案中，所述非肝細胞的細胞是人類非肝細胞的細胞，并且所產 生的誘導肝細胞是人類誘導肝細胞。
[0111] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞的方法（例 如，將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的方法），所述方法包含：提供非肝細胞的細 胞，向所述非肝細胞的細胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含這樣的核酸分子，其包 含含有SEQ ID N0:35的核酸序列、含有SEQ ID N0:37的核酸序列、含有SEQ ID N0:39的核 酸序列、和含有SEQ ID N0:41的核酸序列，以及在適合于將非肝細胞的細胞重編程為誘導 肝細胞的條件下培養(yǎng)所述非肝細胞的細胞，由此從所述非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞。 在特定的實施方案中，所述非肝細胞的細胞是人類非肝細胞的細胞，并且所產生的誘導肝 細胞是人類誘導肝細胞。
[0112] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞的方法（例 如，將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的方法），所述方法包含：提供非肝細胞的細 胞，向所述非肝細胞的細胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼F0XA1、HNF1A、和 HNF4A的核酸分子，以及在適合于將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的條件下培養(yǎng)所 述非肝細胞的細胞，由此從所述非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞。在特定的實施方案中，所 述非肝細胞的細胞是人類非肝細胞的細胞，并且所產生的誘導肝細胞是人類誘導肝細胞。
[0113] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞的方法（例 如，將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的方法），所述方法包含：提供非肝細胞的細 胞，向所述非肝細胞的細胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼多肽的核酸分子， 其編碼含有SEQ ID N0:34的氨基酸序列、含有SEQ ID N0:40的氨基酸序列、和含有SEQ ID N0:42的氨基酸序列，以及在適合于將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的條件下培 養(yǎng)所述非肝細胞的細胞，由此從所述非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞。在特定的實施方案 中，所述非肝細胞的細胞是人類非肝細胞的細胞，并且所產生的誘導肝細胞是人類誘導肝 細胞。
[0114] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞的方法（例 如，將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的方法），所述方法包含：提供非肝細胞的細 胞，向所述非肝細胞的細胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含這樣的核酸分子，其包 含含有SEQ ID N0:33的核酸序列、含有SEQ ID N0:39的核酸序列、和含有SEQ ID N0:41 的核酸序列，以及在適合于將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的條件下培養(yǎng)所述非肝 細胞的細胞，由此從所述非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞。在特定的實施方案中，所述非肝 細胞的細胞是人類非肝細胞的細胞，并且所產生的誘導肝細胞是人類誘導肝細胞。
[0115] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞的方法（例 如，將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的方法），所述方法包含：提供非肝細胞的細 胞，向所述非肝細胞的細胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼F0XA3、HNF1A、和 HNF4A的核酸分子，以及在適合于將非肝細胞的細胞重編程為誘導肝細胞的條件下培養(yǎng)所 述非肝細胞的細胞，由此從所述非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞。在特定的實施方案中，所 述非肝細胞的細胞是人類非肝細胞的細胞，并且所產生的誘導肝細胞是人類誘導肝細胞。
[0116] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細胞的細胞產生誘導肝細胞的方法（例 如，將非肝細胞的細胞重編程為誘