導(dǎo)肝細(xì)胞的方法），所述方法包含：提供非肝細(xì)胞的細(xì) 胞，向所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼多肽的核酸分子， 其編碼的氨基酸序列包含含有SEG ID N0:38的氨基酸序列、含有SEQ ID N0:40的氨基酸 序列、和含有SEQ ID N0:42的氨基酸序列，在適合于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì) 胞的條件下培養(yǎng)所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞，由此從所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞。在特 定的實施方案中，所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞是人類非肝細(xì)胞的細(xì)胞，并且所產(chǎn)生的誘導(dǎo)肝細(xì)胞 是人類誘導(dǎo)肝細(xì)胞。
[0117] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法（例 如，將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法），所述方法包含：提供非肝細(xì)胞的細(xì) 胞，向所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含這樣的核酸分子，其包 含含有SEQ ID N0:37的核酸序列、含有SEQ ID N0:39的核酸序列、和含有SEQ ID N0:41 的核酸序列，以及在適合于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的條件下培養(yǎng)所述非肝 細(xì)胞的細(xì)胞，由此從所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞。在特定的實施方案中，所述非肝 細(xì)胞的細(xì)胞是人類非肝細(xì)胞的細(xì)胞，并且所產(chǎn)生的誘導(dǎo)肝細(xì)胞是人類誘導(dǎo)肝細(xì)胞。
[0118] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法（例 如，將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法），所述方法包含：提供非肝細(xì)胞的細(xì) 胞，向所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼F0XA2、HNF1A、和 HNF4A的核酸分子，以及在適合于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的條件下培養(yǎng)所 述非肝細(xì)胞的細(xì)胞，由此從所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞。在特定的實施方案中，所 述非肝細(xì)胞的細(xì)胞是人類非肝細(xì)胞的細(xì)胞，并且所產(chǎn)生的誘導(dǎo)肝細(xì)胞是人類誘導(dǎo)肝細(xì)胞。
[0119] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法（例 如，將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法），所述方法包含：提供非肝細(xì)胞的細(xì) 胞，向所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼多肽的核酸分子， 其編碼含有SEQ ID N0:36的氨基酸序列、含有SEQ ID N0:40的氨基酸序列、和含有SEQ ID N0:42的氨基酸序列，以及在適合于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的條件下培 養(yǎng)所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞，由此從所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞。在特定的實施方案 中，所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞是人類非肝細(xì)胞的細(xì)胞，并且所產(chǎn)生的誘導(dǎo)肝細(xì)胞是人類誘導(dǎo)肝 細(xì)胞。
[0120] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法（例 如，將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法），所述方法包含：提供非肝細(xì)胞的細(xì) 胞，向所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含這樣的核酸分子，其包 含含有SEQ ID N0:35的核酸序列、含有SEQ ID N0:39的核酸序列、和含有SEQ ID N0:41 的核酸序列，以及在適合于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的條件下培養(yǎng)所述非肝 細(xì)胞的細(xì)胞，由此從所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞。在特定的實施方案中，所述非肝 細(xì)胞的細(xì)胞是人類非肝細(xì)胞的細(xì)胞，并且所產(chǎn)生的誘導(dǎo)肝細(xì)胞是人類誘導(dǎo)肝細(xì)胞。
[0121] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法（例 如，將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法），所述方法包含：提供非肝細(xì)胞的細(xì) 胞，向所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼F0XA1、F0XA3、和 HNF1A的核酸分子，以及在適合于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的條件下培養(yǎng)所 述非肝細(xì)胞的細(xì)胞，由此從所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞。在特定的實施方案中，所 述非肝細(xì)胞的細(xì)胞是人類非肝細(xì)胞的細(xì)胞，并且所產(chǎn)生的誘導(dǎo)肝細(xì)胞是人類誘導(dǎo)肝細(xì)胞。
[0122] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法（例 如，將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法），所述方法包含：提供非肝細(xì)胞的細(xì) 胞，向所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼多肽的核酸分子， 其編碼含有SEQ ID N0:34的氨基酸序列、含有SEQ ID N0:38的氨基酸序列、和含有SEQ ID N0:40的氨基酸序列，以及在適合于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的條件下培 養(yǎng)所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞，由此從所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞。在特定的實施方案 中，所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞是人類非肝細(xì)胞的細(xì)胞，并且所產(chǎn)生的誘導(dǎo)肝細(xì)胞是人類誘導(dǎo)肝 細(xì)胞。
[0123] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法（例 如，將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法），所述方法包含：提供非肝細(xì)胞的細(xì) 胞，向所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含這樣的核酸分子，其包 含含有SEQ ID N0:33的核酸序列、含有SEQ ID N0:37的核酸序列、和含有SEQ ID N0:39 的核酸序列，以及在適合于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的條件下培養(yǎng)所述非肝 細(xì)胞的細(xì)胞，由此從所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞。在特定的實施方案中，所述非肝 細(xì)胞的細(xì)胞是人類非肝細(xì)胞的細(xì)胞，并且所產(chǎn)生的誘導(dǎo)肝細(xì)胞是人類誘導(dǎo)肝細(xì)胞。
[0124] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法（例 如，將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法），所述方法包含：提供非肝細(xì)胞的細(xì) 胞，向所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼F0XA1、F0XA2、和 HNF1A的核酸分子，以及在適合于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的條件下培養(yǎng)所 述非肝細(xì)胞的細(xì)胞，由此從所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞。在特定的實施方案中，所 述非肝細(xì)胞的細(xì)胞是人類非肝細(xì)胞的細(xì)胞，并且所產(chǎn)生的誘導(dǎo)肝細(xì)胞是人類誘導(dǎo)肝細(xì)胞。
[0125] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法（例 如，將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法），所述方法包含：提供非肝細(xì)胞的細(xì) 胞，向所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼多肽的核酸分子， 其編碼含有SEQ ID N0:34的氨基酸序列、含有SEQ ID N0:36的氨基酸序列、和含有SEQ ID N0:40的氨基酸序列，以及在適合于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的條件下培 養(yǎng)所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞，由此從所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞。在特定的實施方案 中，所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞是人類非肝細(xì)胞的細(xì)胞，并且所產(chǎn)生的誘導(dǎo)肝細(xì)胞是人類誘導(dǎo)肝 細(xì)胞。
[0126] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法（例 如，將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法），所述方法包含：提供非肝細(xì)胞的細(xì) 胞，向所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含這樣的核酸分子，其包 含含有SEQ ID N0:33的核酸序列、含有SEQ ID N0:35的核酸序列、和含有SEQ ID N0:39 的核酸序列，以及在適合于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的條件下培養(yǎng)所述非肝 細(xì)胞的細(xì)胞，由此從所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞。在特定的實施方案中，所述非肝 細(xì)胞的細(xì)胞是人類非肝細(xì)胞的細(xì)胞，并且所產(chǎn)生的誘導(dǎo)肝細(xì)胞是人類誘導(dǎo)肝細(xì)胞。
[0127] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法（例 如，將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法），所述方法包含：提供非肝細(xì)胞的細(xì) 胞，向所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼F0XA2、F0XA3、和 HNF1A的核酸分子，以及在適合于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的條件下培養(yǎng)所 述非肝細(xì)胞的細(xì)胞，由此從所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞。在特定的實施方案中，所 述非肝細(xì)胞的細(xì)胞是人類非肝細(xì)胞的細(xì)胞，并且所產(chǎn)生的誘導(dǎo)肝細(xì)胞是人類誘導(dǎo)肝細(xì)胞。
[0128] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法（例 如，將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法），所述方法包含：提供非肝細(xì)胞的細(xì) 胞，向所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼多肽的核酸分子， 其編碼含有SEQ ID N0:36的氨基酸序列、含有SEQ ID N0:38的氨基酸序列、和含有SEQ ID N0:40的氨基酸序列，以及在適合于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的條件下培 養(yǎng)所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞，由此從所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞。在特定的實施方案 中，所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞是人類非肝細(xì)胞的細(xì)胞，并且所產(chǎn)生的誘導(dǎo)肝細(xì)胞是人類誘導(dǎo)肝 細(xì)胞。
[0129] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法（例 如，將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法），所述方法包含：提供非肝細(xì)胞的細(xì) 胞，向所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含這樣的核酸分子，其包 含含有SEQ ID N0:35的核酸序列、含有SEQ ID N0:37的核酸序列、和含有SEQ ID N0:39 的核酸序列，以及在適合于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的條件下培養(yǎng)所述非肝 細(xì)胞的細(xì)胞，由此從所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞。在特定的實施方案中，所述非肝 細(xì)胞的細(xì)胞是人類非肝細(xì)胞的細(xì)胞，并且所產(chǎn)生的誘導(dǎo)肝細(xì)胞是人類誘導(dǎo)肝細(xì)胞。
[0130] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法（例 如，將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法），所述方法包含：提供非肝細(xì)胞的細(xì) 胞，向所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞中引入核酸制劑，其中所述核酸制劑包含編碼CEBPA、GATA6、 HHEX、HNF1B、HNF6A、F0XA1、F0XA2、F0XA3、GATA4、HNF1A、和 HNF4A 的核酸分子，以及在適合 于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的條件下培養(yǎng)所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞，由此從所述 非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞。在特定的實施方案中，所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞是人類非肝 細(xì)胞的細(xì)胞，并且所產(chǎn)生的誘導(dǎo)肝細(xì)胞是人類誘導(dǎo)肝細(xì)胞。
[0131] 在其它實施方案中，本發(fā)明提供從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法（例 如，將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法），所述方法包含：提供非肝細(xì)胞的細(xì) 胞，向所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞中引入包含一種或多種重編程因子的蛋白質(zhì)制劑，在適合于將 非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞的條件下培養(yǎng)所述非肝細(xì)胞的細(xì)胞，由此從所述非肝 細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞。在一些實施方案中，所述蛋白質(zhì)制劑是一種或多種重編程因 子蛋白質(zhì)或多肽的混合物。
[0132] 在一些實施方案中，用于從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞（例如，用于將非肝 細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞）的蛋白質(zhì)制劑包含F(xiàn)0XA1、F0XA2、F0XA3、HNF1A、HNF4A、 和GATA4。在其它實施方案中，該蛋白質(zhì)制劑包含CEBPA、GATA6、HHEX、HNF1B、HNF6A、F0XA1、 F0XA2、F0XA3、GATA4、HNF1A、和HNF4A。在其它實施方案中，該蛋白質(zhì)制劑包含F(xiàn)0XA1、 F0XA2、F0XA3、HNF1A、和HNF4。在其它實施方案中，該蛋白質(zhì)制劑包含F(xiàn)0XA1、F0XA3、HNF1A、 和HNF4A。在其它實施方案中，該蛋白質(zhì)制劑包含F(xiàn)0XA1、F0XA2、HNF1A、和HNF4A。在其它 實施方案中，該蛋白質(zhì)制劑包含？(^八2、？(《43、顯?認(rèn)、和顯?44。在其它實施方案中，該蛋白 質(zhì)制劑包含F(xiàn)0XA1、HNF1A、和HNF4A。在其它實施方案中，該蛋白質(zhì)制劑包含F(xiàn)0XA3、HNF1A、 和HNF4A。在其它實施方案中，該蛋白質(zhì)制劑包含F(xiàn)0XA2、HNF1A、和HNF4A。在其它實施方 案中，該蛋白質(zhì)制劑包含F(xiàn)0XA1、F0XA3、和HNF1A。在其它實施方案中，該蛋白質(zhì)制劑包含 F0XA1、F0XA2、和HNF1A。在其它實施方案中，該蛋白質(zhì)制劑包含F(xiàn)0XA2、F0XA3、和HNF1A。在 特定的實施方案中，該蛋白質(zhì)制劑可用于將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞，其中所 述非肝細(xì)胞的細(xì)胞是人類非肝細(xì)胞的細(xì)胞，并且所產(chǎn)生的誘導(dǎo)肝細(xì)胞是人類誘導(dǎo)肝細(xì)胞。
[0133] 在一些方面，可用于本文所述方法中的重編程因子可包含一種、兩種、三種、四種、 五種或六種重編程因子，其中重編程因子選自由F0XA1、F0XA2、F0XA3、HNF1A、HNF4A、和 GATA4組成的組。在其它方面，重編程因子選自由CEBPA、GATA6、HHEX、HNF1B、HNF6A、F0XA1、 F0XA2、F0XA3、GATA4、HNF1A、和 HNF4A 組成的組。
[0134] 在一些實施方案中，可用于從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的重編程因子包含 F0XA1、F0XA2、F0XA3、HNF 1A、HNF4A、和GATA4。在一些實施方案中，可用于從非肝細(xì)胞的細(xì)胞 產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的重編程因子包含 CEBPA、GATA6、HHEX、HNF 1B、HNF6A、F0XA1、F0XA2、F0XA3、 GATA4、HNF1A、和HNF4A。在一些實施方案中，可用于從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的重 編程因子包含F(xiàn)0XA1、F0XA2、F0XA3、HNF1A、和HNF4A。在一些實施方案中，可用于從非肝細(xì) 胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的重編程因子包含F(xiàn)0XA1、F0XA3、HNF1AJPHNF4A;F0XA1、F0XA2、 HNF1A、和HNF4A ;或？(^八2、？(《43、11嚦認(rèn)、和11嚦44。在一些實施方案中，可用于從非肝細(xì)胞 的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的重編程因子包含F(xiàn)0XA1、HNF1A、和HNF4A。在一些實施方案中，可 用于從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的重編程因子包含F(xiàn)0XA3、HNF1A、和HNF4A。在一 些實施方案中，可用于從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的重編程因子包含F(xiàn)0XA2、HNF1A、 和HNF4A。在一些實施方案中，可用于從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的重編程因子包 含F(xiàn)0XA1、F0XA3、和HNF1A。在一些實施方案中，可用于從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞 的重編程因子包含F(xiàn)0XA1、F0XA2、和HNF1A。在一些實施方案中，可用于從非肝細(xì)胞的細(xì)胞 產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的重編程因子包含F(xiàn)0XA2、F0XA3、和HNF1A。在多個實施方案中，非肝細(xì)胞 的細(xì)胞是人類非肝細(xì)胞的細(xì)胞，并且誘導(dǎo)肝細(xì)胞是人類誘導(dǎo)肝細(xì)胞。
[0135] 在某些實施方案中，編碼用于本文所述方法中的重編程因子的核酸分子是mRNA 分子。在一些實施方案中，編碼重編程因子的mRNA是純化的mRNA。在一些實施方案中，通 過由編碼重編程因子的模板DNA體外轉(zhuǎn)錄來產(chǎn)生mRNA。在其它實施方案中，編碼用于本文 所述方法中的重編程因子的核酸分子是DNA分子。在一些實施方案中，編碼重編程因子的 DNA是基因組DNA。在其它實施方案中，編碼重編程因子的DNA是cDNA。在其它實施方案 中，編碼用于本文所述方法中的重編程因子的核酸包含在質(zhì)粒、載體、病毒等中。
[0136] 用于從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的本發(fā)明方法不限于體外方法或程序。 本發(fā)明還提供從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的體內(nèi)方法。這些體內(nèi)方法包括（但 不限于）使用基于反轉(zhuǎn)錄病毒的途徑引入編碼一種或多種重編程因子的核酸用于體內(nèi) 施用，以及用于體內(nèi)遞送編碼一種或多種重編程因子的mRNA分子（例如，體外轉(zhuǎn)錄的 mRNA 分子）（參見，例如，Qian 等人，（2012)Nature 485:593-598 和 Song 等人，（2012) Nature485:599-604)。可以應(yīng)用這些在體內(nèi)從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法來治 療多種疾病和病癥，例如，通過將內(nèi)源成纖維細(xì)胞或星狀細(xì)胞重編程成誘導(dǎo)肝細(xì)胞來治療 纖維化或肝硬化肝臟疾病。
[0137] 在本發(fā)明方法的一些實施方案中，向非肝細(xì)胞的細(xì)胞中引入核酸或核酸制劑的步 驟包括用轉(zhuǎn)染劑（例如，TRANSIT mRNA轉(zhuǎn)染試劑）將核酸遞送到細(xì)胞中。然而，本發(fā)明并 不受核酸或核酸制劑引入非肝細(xì)胞的細(xì)胞的途徑的性質(zhì)所限，并且本發(fā)明也不受所利用的 轉(zhuǎn)染方法的性質(zhì)所限。本文考慮了能夠?qū)⒑怂岱肿芋w外或體內(nèi)遞送或引入到細(xì)胞中的任何 已知的轉(zhuǎn)染方法或未來鑒定的方法，包括將核酸遞送到培養(yǎng)物中或維持生命的介質(zhì)中的細(xì) 胞的方法，無論這些細(xì)胞包含分離細(xì)胞或是包含真核組織或器官的細(xì)胞，或?qū)⒑怂狍w內(nèi)遞 送到生物體例如人的細(xì)胞中的方法?？捎玫霓D(zhuǎn)染試劑包括脂質(zhì)（例如脂質(zhì)體、微團(tuán)等）、納 米顆?；蚣{米管、陽離子化合物（例如聚乙烯亞胺或PEI)等?？梢允褂闷渌霓D(zhuǎn)染方法， 包括使用電流將核酸遞送到細(xì)胞（例如，通過電穿孔）或使用彈射方法將核酸遞送到細(xì)胞 (例如，"基因槍"或彈射顆粒遞送系統(tǒng)）。
[0138] 本發(fā)明提供通過向非肝細(xì)胞的細(xì)胞中引入核酸制劑將非肝細(xì)胞的細(xì)胞重編程為 誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法，其中核酸制劑包含編碼重編程因子的核酸分子。在本發(fā)明方法的某些 方面，可以以多種間隔、頻率和時間段將編碼重編程因子的核酸分子引入到非肝細(xì)胞的細(xì) 胞。例如，可以以至少每日一次、至少每隔一日一次、至少每第三天一次、至少每四天一次、 至少每五天一次、至少每六天一次、至少每七天一次、至少每八天一次、至少每九天一次等 的頻率將核酸分子引入到非肝細(xì)胞的細(xì)胞中。將核酸分子引入非肝細(xì)胞的細(xì)胞中可以以任 何這些頻率并以足以產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的持續(xù)時間發(fā)生，例如持續(xù)1天、持續(xù)2天、持續(xù)3天、 持續(xù)4天、持續(xù)5天、持續(xù)6天、持續(xù)7天、持續(xù)8天、持續(xù)9天等。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可 以容易地確定將編碼轉(zhuǎn)錄因子的核酸制劑引入非肝細(xì)胞的細(xì)胞從而有效產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞 的頻率和持續(xù)時間。
[0139] 本發(fā)明還顯示在非肝細(xì)胞的細(xì)胞中重編程因子的表達(dá)與引入（例如轉(zhuǎn)染）到非肝 細(xì)胞的細(xì)胞中的mRNA的量相關(guān)聯(lián)，表明可以以劑量依賴的方式調(diào)節(jié)單個mRNA所編碼的重 編程因子的表達(dá)程度。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以容易地確定和調(diào)節(jié)編碼用于重編程非肝 細(xì)胞的細(xì)胞的一種或多種轉(zhuǎn)錄因子的核酸（例如，mRNA)的量從而有效地產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞。 將非肝細(xì)胞的細(xì)胞有效地重編程為誘導(dǎo)肝細(xì)胞所需的核酸的量可以基于細(xì)胞類型、細(xì)胞數(shù) 量、細(xì)胞培養(yǎng)條件等而改變。從實驗上確定引入到非肝細(xì)胞的細(xì)胞中以有效產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì) 胞的核酸（例如，mRNA)的量在本領(lǐng)域人員的普通技術(shù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明的方法不局限于 使用任何特定量的核酸以引入非肝細(xì)胞的細(xì)胞中從而產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞。
[0140] 本發(fā)明的方法對于重編程細(xì)胞而言較之以前描述的方法提供多個優(yōu)點。在本發(fā) 明的某些方面，將mRNA引入非肝細(xì)胞以產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞中較之將例如DNA、質(zhì)粒、載體、病 毒等引入非肝細(xì)胞的細(xì)胞中提供多個優(yōu)點。本發(fā)明所提供方法的一個優(yōu)點是，將核酸引入 到非肝細(xì)胞的細(xì)胞中并不導(dǎo)致核酸并入到細(xì)胞的基因組中。本發(fā)明方法的另一優(yōu)點是，核 酸（例如mRNA)翻譯在核酸引入細(xì)胞中之后很快發(fā)生；因此所編碼產(chǎn)物的表達(dá)和出現(xiàn)迅 速。本發(fā)明方法的另一優(yōu)點是，可以通過向細(xì)胞遞送較多或較少的核酸來調(diào)節(jié)從核酸（例 如mRNA)表達(dá)的重編程因子蛋白質(zhì)的量。本發(fā)明方法的又一優(yōu)點是，核酸向細(xì)胞的重復(fù)遞 送不引發(fā)免疫反應(yīng)。本發(fā)明方法的另一優(yōu)點是，不要求引入到非肝細(xì)胞的細(xì)胞中的mRNA分 子進(jìn)入細(xì)胞核，提供了更快速且高效的重編程。
[0141] 根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，向非肝細(xì)胞的細(xì)胞群中引入核酸分子在沒有細(xì)胞基 因修飾的情況下發(fā)生，例如，沒有核酸并入到細(xì)胞的基因組中。在此語境中缺少或沒有基因 修飾將被理解為，意指不存在穩(wěn)定引入到誘導(dǎo)肝細(xì)胞的基因組中但未見于起始非肝細(xì)胞的 細(xì)胞中的異源核酸序列（例如，編碼轉(zhuǎn)錄因子的那些核酸序列）。異源是指所討論的核酸已 經(jīng)使用基因工程或操縱引入到細(xì)胞或其祖先中。異源核酸可通常不存在于該類型的細(xì)胞中 或可以對于細(xì)胞的內(nèi)源基因是額外的（例如，額外拷貝的重編程因子，其中該內(nèi)源拷貝已 經(jīng)失活或沉默），但在各情形中異源核酸通過人為干預(yù)引入。
[0142] 本發(fā)明還提供使用調(diào)節(jié)一種或多種本文所鑒定的重編程因子的表達(dá)或活性的方 法和/或活性劑從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)胞的方法。對一種或多種重編程因子的表 達(dá)或活性的調(diào)節(jié)可以是通過直接激活（例如直接激活一種或多種本文所鑒定的重編程因 子的表達(dá)或活性）或通過間接激活（例如間接激活一種或多種本文所鑒定的重編程因子的 表達(dá)或活性）進(jìn)行，其中直接激活或間接激活從非肝細(xì)胞的細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)肝細(xì)