然而， 對(duì)于aufl /MSC，只有IFNy+TNFa預(yù)處理會(huì)引起ConA誘導(dǎo)肝損傷中的最大治療作用而無 需IL-17A (圖15A、15D)。與血清ALT活性模式吻合的是，在施用經(jīng)IFNy+TNFa和IL-17A 一起預(yù)處理的野生型MSC或者在用或者不用IL-17A的情況下經(jīng)IFNy+TNFa預(yù)處理的 aufl-/-MSC的小鼠中，肝中的單核細(xì)胞以及CD3 +CD4+和CD3 +CD8+T細(xì)胞浸潤急劇下降（圖 15B、15C)。因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠認(rèn)識(shí)到的是，通過利用經(jīng)IFN y+TNF a和IL-17A-起 預(yù)處理的MSC治療ConA誘導(dǎo)的肝損壞是一種新且新穎的療法，并且IL-17A的作用以AUF1 依賴型方式施加。
[0216] 實(shí)施例13
[0217] 1L-17A通過增強(qiáng)mRNA的穩(wěn)定性來促進(jìn)iNOS表達(dá)
[0218] 為了研究IL-17A如何增強(qiáng)由MSC引起的iNOS表達(dá)和免疫抑制的機(jī)制，研究了在 細(xì)胞因子誘導(dǎo)下iNOS的RNA穩(wěn)定性。如圖16A所示，在IFN y +TNF a處理組中iNOS mRNA半 衰減時(shí)間是約2. 5小時(shí)。有趣的是，增補(bǔ)IL-17A在檢驗(yàn)的時(shí)間點(diǎn)內(nèi)完全保護(hù)了 iNOS mRNA。
[0219] 在哺乳動(dòng)物中，很多編碼炎性蛋白的mRNAs能夠受到存在于它們的3'非翻譯區(qū) 的富含AU元件（AREs)的去穩(wěn)定化?？焖賛RNA降解與帶有這些mRNA的ARE結(jié)合蛋白（AUBP) 相關(guān)地發(fā)生。AUFI，即ARE/聚（U)-結(jié)合/降解因子1，是一種被表征最充分的AUBP之一， 其結(jié)合至很多ARE-mRNA從而介導(dǎo)降解。懷疑AUFI對(duì)于在MSC中IL-17A介導(dǎo)的iNOS過表 達(dá)中注意到的觀測結(jié)果是關(guān)鍵的。
[0220] 為了檢驗(yàn)這一點(diǎn)，使用siRNA敲低MSC中的AUF1并且使用IFNy+TNFa (用或者 不用E-17A)進(jìn)行處理。令人吃驚的是，在野生型MSC中，E-17A誘導(dǎo)了 iNOS表達(dá)，但是 AUF1的缺乏極大地消弭了這種作用，表明AUF1在MSC中的IL-17A介導(dǎo)的iNOS表達(dá)的重要 性。因此，IL-17A能夠穩(wěn)定MSC中的iNOS mRNA，這提供了在臨床環(huán)境中有效增強(qiáng)MSC介導(dǎo) 的治療的一種新穎的方法。
[0221] I型干擾素和成纖維細(xì)胞生長因子（FGF-2)通過下調(diào)iNOS表達(dá)對(duì)MSC介導(dǎo)的免疫 抑制起到負(fù)調(diào)節(jié)因子的作用
[0222] 如上所述，IL-17A可能是增強(qiáng)MSC介導(dǎo)的免疫抑制的潛在因子。然而，在很多情 況中，體外和體內(nèi)的這種免疫抑制作用需要予以正向或者負(fù)向控制。篩查了可能利用的生 長因子和細(xì)胞因子，并且令人吃驚的是，兩種因子下調(diào)MSC介導(dǎo)的免疫抑制：1型干擾素和 成纖維細(xì)胞生長因子（FGF-2)。
[0223] 這兩種因子可能潛在地抑制了 MSC對(duì)T細(xì)胞增殖的免疫抑制作用（圖16)。進(jìn)一 步分析表明，增補(bǔ)這些因子中的任意一種能夠令人驚訝地降低了 iNOS蛋白的表達(dá)和N0生 成（圖17)。
[0224] 這些發(fā)現(xiàn)證實(shí)了負(fù)向控制MSC介導(dǎo)的免疫抑制的方法。因此，抗I型干擾素和FGF 的抗體可以被用來加強(qiáng)MSC的免疫抑制作用。
[0225] 人類ID0表達(dá)小鼠iNOS-/-細(xì)胞（人源化IDO MSC)的構(gòu)建。
[0226] MSC介導(dǎo)的免疫抑制存在物種變化性：N0是小鼠MSC的效應(yīng)子分子，而人類和靈長 目動(dòng)物MSC利用吲哚胺2, 3-加雙氧酶（ID0)作為抑制性效應(yīng)子分子。
[0227] 由于小鼠MSC在炎性細(xì)胞因子刺激后不表達(dá)吲哚胺2, 3-雙加氧酶（ID0)，因此難 以研究ID0在小鼠系統(tǒng)中的生物學(xué)作用。為了避開這個(gè)問題，使用在小鼠iNOS啟動(dòng)子的控 制下的人類ID0基因轉(zhuǎn)染小鼠iN0S-/-MSC。這允許ID0在炎性細(xì)胞因子刺激后在小鼠MSC 中表達(dá)。已經(jīng)成功地生成了表達(dá)小鼠iN0S-/-MSC的穩(wěn)定性人類ID0,證實(shí)小鼠炎性細(xì)胞因 子刺激下ID0的高表達(dá)。采用這些人源化的IDO MSC，顯示了 ID0在小鼠MSC的體內(nèi)和體外 具有免疫抑制性。人源化的ID0小鼠產(chǎn)生自iNOS-/-小鼠。
[0228] 還使用人類ID0基因來代替正常小鼠中的小鼠iNOS基因，使得ID0的表達(dá)受到小 鼠iNOS基因調(diào)節(jié)機(jī)制的控制，同時(shí)使iNOS沉默以進(jìn)一步研究藥物學(xué)、癌癥治療并評(píng)價(jià)免疫 反應(yīng)和免疫相關(guān)發(fā)病機(jī)理。
[0229] 實(shí)施例14
[0230] 轉(zhuǎn)導(dǎo)MSC群以釋放功能性IFN a
[0231] 在這個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明人使用編碼GFP(MSC-GFP)或GFP和小鼠 正以郵〇正以.）一起的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)|^。超過90%的細(xì)胞被成功轉(zhuǎn)導(dǎo)，如通過流式細(xì)胞 儀上顯示的GFP表達(dá)所示（圖18A)。觀測到MSC-GFP和MSC-IFNa之間沒有明顯的形態(tài) 學(xué)和增殖速度上的變化。為了檢查MSC-IFNa的IFN生成水平，對(duì)以5X 105細(xì)胞/ml培養(yǎng) 48小時(shí)的MSC的上清液中的IFNa水平進(jìn)行定量（圖18B)。
[0232] ELISA分析顯示，在MSC-IFNa的上清液中有19ng/ml的IFNa，而在相同條件下 培養(yǎng)的MSC-GFP的上清液沒有檢測到IFNa。為了檢驗(yàn)MSC-IFNa釋放的IFNa是否具有 生物學(xué)功能，通過流式細(xì)胞法評(píng)價(jià)了 MHC I分子H-2Kb在MSC表面上的表達(dá)。IFNa提高了 H-2Kb的表達(dá)水平。
[0233] 圖18C詳細(xì)展示了 H_2Kb的表達(dá)在MSC-GFP中是低的，這是MSC的本質(zhì)性能。然 而，令人驚訝的是，使用重組IFNa處理后，H-2Kb的表達(dá)在MSC-GFP中急劇上升。H-2b的 類似的表達(dá)上升在使用MSC-IFNa的上清液處理的細(xì)胞上也觀測到。相應(yīng)地，H_2Kb在 MSC-IFNa上的表面上的表達(dá)也上升到使用IFNa處理的MSC-GFP的類似水平。這些數(shù)據(jù) 證明MSC-IFNa生成了具有生物學(xué)功能的IFNa。
[0234] MSC-IFNa施加強(qiáng)效的體內(nèi)抗腫瘤作用。
[0235] 為了研究MSC-IFN-a對(duì)體內(nèi)腫瘤生長的作用，使用了小鼠B16黑素瘤模型。 在該體系中，所有細(xì)胞和小鼠都具有C57BL/6背景。通過肌肉內(nèi)方式單獨(dú)接種或者和 1X10 6MSC_GFP或MSC-IFN-a -起接種1X106B16黑素瘤細(xì)胞，在12天后移除腫瘤并稱 重。令人預(yù)料不到的是，觀測到MSC-IFNa使腫瘤生長完全停止，而MSC-GFP稍微增強(qiáng)了 腫瘤生長（圖19A)。為了檢測MSC-IFNa的效力，將IX 106B16黑素瘤細(xì)胞和不同數(shù)量的 MSC-IFNa -起注射到動(dòng)物中。令人驚訝的是，即使是IX 104MSC_IFNa (MSC-IFNa : B16 的比例=1 : 100)也仍然能夠有力地防止腫瘤的體內(nèi)生長（圖19B)。而且，單獨(dú)使用腫瘤 細(xì)胞接種的所有小鼠在30天內(nèi)死亡，而接受腫瘤細(xì)胞和MSC-IFNI的小鼠有將近一半存活 超過100天（圖19C)。
[0236] 在接種B16黑素瘤細(xì)胞后3或4天后注射MSC-IFN a細(xì)胞時(shí)，腫瘤生長也得到有 效地抑制（圖19D和19E)。為了比較帶有重組IFNa的MSC-IFNa的抗腫瘤能力，在接種 B16細(xì)胞后3天，使用5 y g重組IFN a (50, 000U)或1 X 106MSC_IFN a處理小鼠。根據(jù)我們 的體外分析，我們粗略估計(jì)lxlO6注射MSC-IFNa細(xì)胞每天僅生成約19ng的IFNa。這遠(yuǎn) 低于所注射的5 y g重組IFNa。這個(gè)觀測結(jié)果是重要的，因?yàn)榘l(fā)明人觀測到即使使用少量 生成的IFNa (低于所注射的重組IFNa的量250倍），MSC-IFNa也具有比重組IFNa強(qiáng) 效得多的抗腫瘤作用（圖19F)。重復(fù)施用IFNa進(jìn)一步施加了強(qiáng)效的體內(nèi)抗腫瘤作用（補(bǔ) 充的圖18)。這些數(shù)據(jù)清楚地證明了分泌IFNa的MSC具有高效的體內(nèi)抗腫瘤活性。
[0237] MSC存在于（persist)腫瘤中，降低腫瘤細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。
[0238] 為了進(jìn)一步研究MSC-IFNa的強(qiáng)效的抗腫瘤作用的機(jī)制，追蹤了體內(nèi)施用 MSC-IFNa的去向（fate)。因此，使用熒光素酶標(biāo)記了 MSC-IFNa，使用現(xiàn)場成像技術(shù)sing Berthod NC100成像系統(tǒng)監(jiān)測了熒光素酶的體內(nèi)活性。
[0239] 當(dāng)與B16細(xì)胞共注射時(shí)，MSC-IFNa僅存在于腫瘤中超過兩周并逐漸下降（圖20A 和20B)?？紤]到MSC-IFNa的強(qiáng)效抗腫瘤作用（在MSC-IFNa : B16 = l : 100的比例 仍然有效），相信SC-IFNa停留在腫瘤內(nèi)部并且在腫瘤局部持續(xù)分泌低但有效的濃度的 IFNa至少兩周。
[0240] 本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠認(rèn)識(shí)到這種作用優(yōu)于需要體內(nèi)施用半衰期短且劑量高的 INF a的優(yōu)越性。當(dāng)采用組織學(xué)方式檢測腫瘤時(shí)，發(fā)現(xiàn)在B16加上MSC-IFN a組中有大量的 淋巴細(xì)胞浸潤。
[0241] MSC-IFNa抑制了腫瘤細(xì)胞增殖，如由Ki-67陽性細(xì)胞的下降比例和增加的腫瘤 細(xì)胞凋亡所顯示的，如通過TUNEL分析所示（圖20C)。
[0242] MSC-IFNa的抗腫瘤活性具有極大的免疫依賴性。
[0243] 研究了重組INF a對(duì)腫瘤生長的直接作用。發(fā)現(xiàn)重組IFN a即使在高濃度（高達(dá) 100ng/ml，相比于MSC-IFNa生成的19ng/ml)也只是少量地抑制B16黑素瘤細(xì)胞。因此， 考慮到體內(nèi)觀測到的由MSC-IFNa引起的完全腫瘤生長抑制，發(fā)明人推測除了腫瘤生長的 直接抑制之外，應(yīng)當(dāng)還涉及其他的機(jī)制。
[0244] 為了檢驗(yàn)免疫系統(tǒng)是否在MSC-IFNa的抗腫瘤作用中發(fā)揮任何作用，單獨(dú)地或 者和MSC-GFP或MSC-IFNa -起地將B16黑素瘤細(xì)胞平行接種到野生型和免疫缺陷型 N0D-SCID小鼠中，并比較這些小鼠中的腫瘤生長。在野生型小鼠，MSC-IFNa完全抑制了 腫瘤生長（圖21B)，但是在免疫缺陷型小鼠中，MSC-IFNa的腫瘤抑制作用被極大地消除 (圖21C)。為了更加清楚地分析免疫系統(tǒng)在MSC-IFN a的抗腫瘤作用中的作用，我們注射較 少的MSC-IFNa (和B16腫瘤細(xì)胞一起）以使直接腫瘤抑制的貢獻(xiàn)最小化。當(dāng)使用少量的 MSC-IFNa(1/100的腫瘤細(xì)胞）時(shí)，在野生型小鼠中的腫瘤生長仍然得到有效地抑制（圖 21D);然而，在免疫缺陷型小鼠中，這種作用完全消失（圖21E)。
[0245] 然后本發(fā)明人通過利用帶有抗缺乏唾液酸基GM1抗體的耗竭NK細(xì)胞來檢驗(yàn)NK細(xì) 胞是否參與MSC-IFNa的抗腫瘤作用。令人驚異的是，在對(duì)照小鼠中，腫瘤生長受到有效抑 制；然而，在使用NK細(xì)胞耗竭抗體處理的小鼠中，這種抑制得到很大逆轉(zhuǎn)（圖21F)。CD8+T 細(xì)胞也有助于MSC-IFNa的抗腫瘤作用，如CD8+T細(xì)胞缺陷型小鼠2m敲除小鼠）中 MSC-IFNa減少腫瘤生長抑制所示（圖21G)。這些數(shù)據(jù)清楚表明除了其對(duì)腫瘤細(xì)胞的直接 影響之外，免疫系統(tǒng)在MSC-IFN a的抗腫瘤作用中也是關(guān)鍵的。
[0246] 在該研究中，IFNa借助于MSC輸送到正常小鼠的腫瘤中。發(fā)現(xiàn)在這些具有免疫 能力的小鼠中，IFN a通過促進(jìn)抗腫瘤免疫力來施加其作用。即使少量的分泌IFN a的MSC 在正常小鼠中也具有抑制超過100倍的腫瘤細(xì)胞生長的能力，但是在免疫缺陷型小鼠中沒 有如此。而且，NK細(xì)胞和⑶8+T細(xì)胞均顯示出在分泌IFNa的MSC的體內(nèi)抗腫瘤作用中發(fā) 揮重要作用。
[0247] IFN a能夠克服MSC的免疫抑制。因此，考慮了IFN a有效地逆轉(zhuǎn)由IFN y和TNF a 誘導(dǎo)的MSC的免疫抑制性能。MSC-IFNa在腫瘤中的長期存在避免了如IFNa所見到的那 樣的頻繁注射。MSC-IFNa釋放的低且有效水平的IFNa不太可能導(dǎo)致任何的副作用。本 領(lǐng)域技術(shù)人員能夠認(rèn)識(shí)到經(jīng)過改造以表達(dá)免疫刺激因子的MSC對(duì)未來的腫瘤治療大有希 望。
[0248] 盡管已經(jīng)參照具體的實(shí)施方式描述了本發(fā)明，但是本發(fā)明的改動(dòng)和變化應(yīng)該被解 釋為沒有偏離由所附權(quán)利要求書所限定的本發(fā)明的范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種組合物，所述組合物包含： (a)分離的間充質(zhì)干細(xì)胞群，所述分離的間充質(zhì)干細(xì)胞群通過包括如下步驟的方法生 成： (i) 獲得多能祖細(xì)胞； (ii) 將所述多能細(xì)胞培養(yǎng)在培養(yǎng)基中以生成擴(kuò)繁間充質(zhì)干細(xì)胞亞群和分化細(xì)胞亞 群； (iii) 將所述培養(yǎng)基中的間充質(zhì)干細(xì)胞與分化細(xì)胞分開； (iv) 使用干擾素y (IFNy)和至少一種細(xì)胞因子激活至少一個(gè)亞組的所述經(jīng)分開的 間充質(zhì)干細(xì)胞足夠的一段時(shí)間，所述至少一種細(xì)胞因子選自由如下細(xì)胞因子組成的組：白 介素-I a (IL-1 a )、白介素-1 0 (IL-1 P )、:[L-17A、腫瘤壞死因子a (TNFa )、I型干擾素 (IFN-I)、TGF P 和卩6卩。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，所述組合物進(jìn)一步包含藥學(xué)可接受的載體。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，所述組合物進(jìn)一步包含至少一種另外的細(xì)胞因子， 所述至少一種另外的細(xì)胞因子選自由如下細(xì)胞因子組成的組=IFNy、IL-Ia、IL-I 0、 IL-17A、IFN-I a、IFN-I P、TNF a、TGF P 和 FGF。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述分離的間充質(zhì)干細(xì)胞包含經(jīng)培養(yǎng)的間充 質(zhì)干細(xì)胞。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述組合物抑制免疫T細(xì)胞群。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述組合物誘導(dǎo)免疫反應(yīng)。7. -種用于增強(qiáng)需要的患者中的免疫抑制的方法，所述方法包括向所述患者施用有效 量的如下物質(zhì)： (a) 分離的馴化間充質(zhì)干細(xì)胞群； (b) 分離的IFNy ;和 (c) 選自由如下細(xì)胞因子組成的組的至少一種細(xì)胞因子：IL_la、IL-IP、IL-17A和 TNFa 08. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中，所述間充質(zhì)干細(xì)胞群、所述分離的IFNy和所述 細(xì)胞因子單獨(dú)施用。9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中，所述間充質(zhì)干細(xì)胞群、所述分離的IFNy和所述 細(xì)胞因子以混合物的形式施用。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中，所述需要的患者患有選自由如下病癥組成的組 的任意一種病癥：自體免疫性疾病、過敏癥、膿毒癥、硬化癥、癌癥、病毒性感染和器官移植。11. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，所述方法進(jìn)一步包括誘導(dǎo)NO合成酶（iNOS)、吲哚胺 2, 3-加雙氧酶（IDO)在至少一個(gè)亞組的所述間充質(zhì)干細(xì)胞中的表達(dá)。12. -種用于誘導(dǎo)需要的患者中的免疫反應(yīng)的方法，所述方法包括向所述患者施用有 效量的如下物質(zhì)： (a) 分離的馴化間充質(zhì)干細(xì)胞群； (b) 分離的IFNy ;和 (c) 選自由如下細(xì)胞因子組成的組的至少一種細(xì)胞因子：IL_1 a、IL-IfK IFN-Ia、 IFN-I P、TNF a、TGF P 和 FGF。13. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述間充質(zhì)干細(xì)胞群、所述分離的IFNy和所 述細(xì)胞因子單獨(dú)施用。14. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述間充質(zhì)干細(xì)胞群、所述分離的IFNy和所 述細(xì)胞因子以混合物的形式施用。15. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，所述方法進(jìn)一步包括向所述患者施用有效量的NOS 抑制劑或IDO抑制劑。16. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述馴化間充質(zhì)干細(xì)胞和NOS或IDO的抑制劑 單獨(dú)施用或者作為混合物的形式施用。17. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述馴化間充質(zhì)干細(xì)胞為疫苗形式。18. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述患者正在患有癌癥或病毒性感染。19. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述患者隨后接受免疫治療方案。20. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，所述方法進(jìn)一步包括向治療部位局部施用所述有效 量。21. -種用于誘導(dǎo)或抑制免疫反應(yīng)的方法，所述方法包括向需要的受試者施用有效量 的分離的馴化間充質(zhì)干細(xì)胞群，所述分離的馴化間充質(zhì)干細(xì)胞群通過包括如下步驟的方法 制備： (i) 獲得多能祖細(xì)胞； (ii) 將所述多能干細(xì)胞培養(yǎng)在培養(yǎng)基中； (iii) 將所述培養(yǎng)基中的間充質(zhì)干細(xì)胞與分化細(xì)胞分開； (iv) 通過將至少一個(gè)亞組的所述經(jīng)分開的間充質(zhì)干細(xì)胞暴露于分離的IFNy和至 少一種細(xì)胞因子足夠的一段時(shí)間來激活至少一個(gè)亞組的所述經(jīng)分開的間充質(zhì)干細(xì)胞，所 述至少一種細(xì)胞因子選自由如下細(xì)胞因子組成的組：IL_la、IL-1P、IL-17A、IFN-Ia、 IFN-I P、TNF a、TGF P 和 FGF。22. 根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中，所述一種細(xì)胞因子選自由IL-I a、IL-I 0、 11-174和了陬€[組成的組。23. 根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中，所述一種細(xì)胞因子選自由IL-I a、IL-I 0、 IFN-I a、IFN-I P、TNF a、TGF P 和 FGF 組成的組。24. 根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中，所述方法抑制所述受試者的免疫反應(yīng)。25. 根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述方法誘導(dǎo)所述受試者的免疫反應(yīng)。24. -種培養(yǎng)經(jīng)激活的間充質(zhì)干細(xì)胞群的方法，所述方法包括如下步驟： (i) 獲得多能祖細(xì)胞； (ii) 將所述多能細(xì)胞培養(yǎng)在培養(yǎng)基中； (iii) 將所述培養(yǎng)基中的無性系間充質(zhì)干細(xì)胞與分化細(xì)胞分開； (iv) 使用IFNy和至少一種細(xì)胞因子激活至少一個(gè)亞組的所述經(jīng)分開的間充質(zhì)干 細(xì)胞，所述至少一種細(xì)胞因子選自由如下細(xì)胞因子組成的組=IL-Ia、IL-I 、IFN-Ia、 IFN-I P、TNF a、TGF P和FGF以及它們的任意組合。25. -種用于誘導(dǎo)或者抑制需要的患者中的免疫反應(yīng)的方法，所述方法包括向所述患 者施用包含有效量的分離的馴化間充質(zhì)干細(xì)胞群的組合物，所述分離的馴化間充質(zhì)干細(xì)胞 群通過暴露于IFNy和至少一種細(xì)胞因子足夠的時(shí)間量來激活，所述至少一種細(xì)胞因子選 自由如下細(xì)胞因子組成的組：IL-I a、IL-I P、TNFa、IFN-I a、IFN-I P、TGFP 和 FGF。26. 根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中，所述組合物為疫苗形式。27. 根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中，所述組合物基本不含任何殘留的細(xì)胞因子。28. 根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中，所述組合物主要由至少兩個(gè)亞組的馴化間充 質(zhì)干細(xì)胞組成。29. 根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中，至少一個(gè)所述亞組的馴化間充質(zhì)干細(xì)胞主要 由克隆的間充質(zhì)干細(xì)胞組成。30. -種通過包括如下步驟的方法獲得的干細(xì)胞： (i) 獲得多能祖細(xì)胞； (ii) 將所述多能細(xì)胞培養(yǎng)在培養(yǎng)基中； (iii) 將所述培養(yǎng)基中的無性系間充質(zhì)干細(xì)胞與分化細(xì)胞分開； (iv) 使用IFNy和至少一種細(xì)胞因子激活至少一個(gè)亞組的所述經(jīng)分開的間充質(zhì)干細(xì) 胞，所述至少一種細(xì)胞因子選自由如下細(xì)胞因子組成的組=IL-Ia、IL-I 、IL_17A、TNFa、 IFN-I a、IFN-I P、TGFP和FGF以及它們的任意組合。31. -種組合物，所述組合物包含： (a) 分離的間充質(zhì)干細(xì)胞群，所述分離的間充質(zhì)干細(xì)胞群通過包括如下步驟的方法生 成： (i) 獲得多能祖細(xì)胞； (ii) 將所述多能細(xì)胞培養(yǎng)在培養(yǎng)基中； (iii) 將所述培養(yǎng)基中的間充質(zhì)干細(xì)胞與分化細(xì)胞分開； (iv) 使用IFNy和至少一種細(xì)胞因子激活至少一個(gè)亞組的所述經(jīng)分開的間充質(zhì)干 細(xì)胞，所述至少一種細(xì)胞因子選自由如下細(xì)胞因子組成的組=IL-Ia、IL-I P、TNFa、 IFN-I a、IFN-I P、TGFP和FGF以及它們的任意組合；和 (V)提取任何殘留的細(xì)胞因子；和 (b) 藥學(xué)可接受的載體。32. -種用于改變需要的受試者中的免疫反應(yīng)的試劑盒，所述試劑盒包括： (a) 選自由生理鹽水、5%水性右旋葡萄糖以及它們的混合物組成的組的藥學(xué)可接受的 載體； (b) 間充質(zhì)干細(xì)胞群； (c) 分離的干擾素y ; (d) 選自由IL-I a、IL-I P、IL-17A和TNFa組成的組的至少一種細(xì)胞因子。33. 根據(jù)權(quán)利要求32所述的試劑盒，通過所述試劑盒將（a)、（b)、（c)和⑷的組合施 用于需要的受試者來實(shí)現(xiàn)免疫抑制。34. 根據(jù)權(quán)利要求32所述的試劑盒，所述試劑盒進(jìn)一步包括用于使用所述試劑盒引起 免疫抑制的說明書。35. -種用于刺激需要的患者中的免疫反應(yīng)的方法，所述方法包括： (a)向所述患者施用有效量的組合物，所述組合物包含可誘導(dǎo)性一氧化氮合成酶抑制 劑、吲哚胺2, 3-加雙氧酶抑制劑、可誘導(dǎo)性一氧化氮合成酶（iNOS)-缺陷型間充質(zhì)干細(xì)胞 群、吲哚胺2, 3-加雙氧酶（IDO)-缺陷型間充質(zhì)干細(xì)胞群或它們的任意組合； (b)抑制一氧化氮（N0)、吲哚胺2, 3-加雙氧酶（IDO)或前列腺素E2(PGE2)中的一種 或者多種的生成。36. 根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中，單獨(dú)施用或者作為混合物施用所述iNOS或 IDO的抑制劑。37. 根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中，所述混合物是疫苗。38. 根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中，所述患者正患有癌癥或病毒性感染。39. 根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中，所述患者隨后接受免疫治療方案。40. 根據(jù)權(quán)利要求39所述的方法，其中，所述免疫治療包括施用干擾素。41. 根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，所述方法進(jìn)一步包括施用馴化干細(xì)胞群，所述馴化 干細(xì)胞群通過包括如下步驟的方法獲得： (i) 獲得多能祖細(xì)胞； (ii) 將所述多能細(xì)胞培養(yǎng)在培養(yǎng)基中； (iii) 將所述培養(yǎng)基中的間充質(zhì)干細(xì)胞與分化細(xì)胞分開； (iv) 使用IFNy和至少一種細(xì)胞因子激活至少一個(gè)亞組的所述經(jīng)分開的間充質(zhì)干細(xì) 胞足夠量的時(shí)間，所述至少一種細(xì)胞因子選自由如下細(xì)胞因子組成的組：IL-1 a、IL-I P、 TNF a、IFN-I a、IFN-I P、TGF P、FGF 以及它們的任意組合。
【專利摘要】本發(fā)明提供了在預(yù)防和治療各種疾病例如多發(fā)性硬化癥、關(guān)節(jié)炎、狼瘡、膿毒癥、肝炎、硬化癥、帕金森氏病、慢性感染和移植物抗宿主病(GvHD)中使用炎性細(xì)胞因子對(duì)1-ISC進(jìn)行預(yù)處理以增大它們的免疫調(diào)節(jié)作用的方法或試劑盒。本發(fā)明涉及用于增強(qiáng)間充質(zhì)干細(xì)胞(JvfSCs)的免疫抑制活性或免疫刺激活性的新穎方法。
【IPC分類】C12N5/0775
【公開號(hào)】CN105008521
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201380072996
【發(fā)明人】時(shí)玉舫, 任光文, 張莉英
【申請(qǐng)人】羅格斯新澤西州立大學(xué)
【公開日】2015年10月28日
【申請(qǐng)日】2013年12月14日
【公告號(hào)】CA2895148A1, EP2931877A1, US20150313946, WO2014093948A1