有利于將擴增的DNA片段組合插入表達載體 中。PCR技術描述于Saiki等，Science239:487(1988);RecombinantDNAMethodology;Wu等 編，AcademicPress，Inc.，SanDiego(1989)，第 189-196 頁；和PCRProtocols:AGuide toMethodsandApplications，Innis等編，AcademicPress，Inc. (1990) 〇
[0131] 本發(fā)明的核酸分子包括呈單鏈及雙鏈形式的DNA和RNA，以及相應的互補序列。就 從天然來源分離的核酸而言，"分離的核酸"是已與自其分離核酸的生物體的基因組中存在 的相鄰遺傳序列分離的核酸。在以酶促方式自模板或以化學方式合成的核酸（例如PCR產(chǎn) 物、cDNA分子或寡核苷酸）而言，例如，應理解自此類方法得到的核酸為分離的核酸。分離 的核酸分子是指呈單獨片段形式或作為較大核酸構建體組分的核酸分子。在一個優(yōu)選的實 施方案中，核酸基本上不含污染性內(nèi)源物質(zhì)。核酸分子優(yōu)選衍生自至少分離一次的基本上 純化形式的DNA或RNA，所述DNA或RNA的數(shù)量或濃度使得能通過標準生物化學方法（例 如Sambrook等，Molecular Cloning:A Laboratory Manual，第2版，Cold Spring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor，NY(1989)中所概述的那些）鑒定、操縱及回收其組分核 苷酸序列。此類序列優(yōu)選以未經(jīng)通常存在于真核基因中的內(nèi)部非翻譯序列或內(nèi)含子間斷的 開放閱讀框形式提供和/或構建。非翻譯DNA序列可位于開放閱讀框的5'或3'處，其中 其不干擾編碼區(qū)的操縱和表達。
[0132] 本發(fā)明的變體通常系通過使用盒式或PCR誘變或其它本領域所熟知的技術進行 編碼IL-2突變蛋白或IL-2突變蛋白Fc融合蛋白的DNA中的核苷酸的位點特異性誘變以 產(chǎn)生編碼該變體的DNA，并隨后在本文中所概述的細胞培養(yǎng)物中表達重組DNA來制備。然 而，IL-2突變蛋白和IL-2突變蛋白Fc融合蛋白可通過使用已確立的技術進行體外合成來 制備。通常所述變體呈現(xiàn)與天然存在的類似物相同的定性生物活性，例如Treg擴增，但所 述變體也可選擇具有如將在下文中更充分概述的經(jīng)修飾的特性的變體。
[0133] 本領域的技術人員應了解，由于遺傳密碼的簡并性，可制得極大量的核酸，其全部 編碼本發(fā)明的IL-2突變蛋白及IL-2突變蛋白Fc融合蛋白。因此，已鑒定特定氨基酸序 列，本領域的技術人員可通過簡單地以不會改變所編碼的蛋白質(zhì)的氨基酸序列的方法來修 飾一個或多個密碼子序列來制備任何數(shù)量的不同核酸。
[0134] 本發(fā)明還提供包含至少一個上述多核苷酸的呈質(zhì)粒、表達載體、轉錄或表達盒的 形式的表達系統(tǒng)及構建體。此外，本發(fā)明提供包含此類表達系統(tǒng)或構建體的宿主細胞。
[0135] 通常，任何宿主細胞中所用的表達載體都將包含維持質(zhì)粒以及克隆與表達外源核 苷酸序列的序列。在某些實施方案中，此類序列（統(tǒng)稱為"旁側序列"）通常包括下列一個 或多個核苷酸序列：啟動子、一個或多個增強子序列、復制起點、轉錄終止序列、包含供體和 受體剪接位點的完整內(nèi)含子序列、編碼用于多肽分泌的前導序列的序列、核糖體結合位點、 聚腺苷酸化序列、供插入編碼待表達的多肽的核酸的多接頭區(qū)和可選擇標記元件。這些序 列的每一者均在下文中討論。
[0136] 任選地，載體可包含"標簽編碼序列，S卩，位于IL-2突變蛋白或IL-2突變蛋白 Fc融合蛋白編碼序列的5'或3'端的寡核苷酸分子；所述寡核苷酸序列編碼polyHis(例 如hexaHis(SEQ ID N0:21))的，或另一"標簽"例如FLAG、HA(血凝素流感病毒）或myc， 存在用于其的市售抗體。此標簽通常在多肽表達時與多肽融合，并且可用作親和純化或檢 測宿主細胞中的IL-2突變蛋白的方式。親和純化可例如通過使用針對標簽的抗體作為親 和基質(zhì)進行的管柱層析來實現(xiàn)。任選地，隨后可用各種方法（例如使用某些用于裂解的肽 酶）從純化的IL-2突變蛋白和IL-2突變蛋白Fc融合蛋白去除該標簽。
[0137] 旁側序列可以是同源的（S卩，來自與宿主細胞相同的物種和/或品系）、異源的 (即，來自與宿主細胞物種或品系不同的物種）、雜交體（即，來自多個來源的旁側序列的組 合），合成或天然旁側序列。因此，旁側序列的來源可為任何原核或真核生物體、任何脊椎動 物或非脊椎動物生物體或任何植物，前提是旁側序列可在宿主細胞機構中起作用，并且可 由宿主細胞機構活化。
[0138] 可用于載體中的旁側序列可通過本領域中熟知的若干種方法中的任一種獲得。通 常，本文中可用的旁側序列預先已通過定位和/或限制性內(nèi)切核酸酶消化加以鑒定，因此 可使用適當限制性內(nèi)切核酸酶將其從適當組織來源中分離。在一些情況下，旁側序列的全 核苷酸序列可能是已知的。在本文中，可使用本文所述的用于核酸合成或克隆的方法合成 旁側序列。
[0139] 不管已知全部或僅一部分的旁側序列，均可使用聚合酶鏈反應（PCR)，和/或通過 用合適的探針（諸如寡核苷酸和/或來自相同物種或另一物種的旁側序列片段）篩檢基因 組文庫來獲得所述旁側序列。如果旁側序列是未知的，則可從可能含有例如編碼序列或甚 至另一種或多種基因的較大DNA片段中分離出含有旁側序列的DNA片段。分離可如下實現(xiàn)： 通過限制性內(nèi)切核酸酶消化產(chǎn)生適當DNA片段，隨后使用瓊脂糖凝膠純化（Qiagenx_.柱色 譜法（Chatsworth，CA))加以分離；或技術人員已知的其它方法來實現(xiàn)分離。實現(xiàn)此目的的 合適的酶的選擇對于本領域的技術人員所而言是顯而易見的。
[0140] 復制起點通常為商購獲得的原核表達載體的一部分，并且該起點有助于載體在宿 主細胞中的擴增。如果所選載體不含復制起點位點，則可根據(jù)已知序列化學合成并與該載 體連接。例如，來自質(zhì)粒pBR322(NewEnglandBiolabs，Beverly，MA)的復制起點可用于 大多數(shù)革蘭氏陰性細菌，并且各種病毒起點（即SV40、多瘤病毒、腺病毒、水皰性口炎病毒 (VSV)或乳頭狀瘤病毒例如HPV或BPV)可用于在哺乳動物細胞中克隆載體。一般而言，哺 乳動物表達載體無需復制組分起點（例如，通常僅適用SV40起點，因為其也包含病毒早期 啟動子）。
[0141] 轉錄終止序列通常位于多肽編碼區(qū)末端的3'處，用于終止轉錄。通常，原核細胞 中的轉錄終止序列為富含G-C的片段，隨后為多聚T序列。盡管該序列易于由文庫克隆或 甚至作為載體的一部分收購獲得，但其也可使用核酸合成方法（諸如本文所述的方法）容 易地合成。
[0142] 可選擇標記基因編碼在選擇性培養(yǎng)基中生長的宿主細胞存活和生長所必需的蛋 白質(zhì)。典型的選擇標記基因編碼這樣的蛋白質(zhì)，其（a)賦予原核宿主細胞抗生素或其他毒 素，例如氨芐青霉素、四環(huán)素或卡那霉素抗性；(b)補足細胞的營養(yǎng)缺陷型缺陷；或（c)提供 從復合培養(yǎng)基或界定培養(yǎng)基無法獲得的關鍵營養(yǎng)素。特異性可選擇標記為卡那霉素抗性基 因、氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因。有利地，還可使用新霉素抗性基因進行原核與 真核宿主細胞的選擇。
[0143] 可使用其它可選擇基因來擴增要表達的基因。擴增是基因在繼代重組細胞的染色 體內(nèi)連續(xù)復制的過程，所述基因對于生長或細胞存活的關鍵蛋白質(zhì)的產(chǎn)生而言是必要的。 哺乳動物細胞的合適的可選擇標記的實例包括二氫葉酸還原酶（DHFR)和無啟動子胸苷激 酶基因。使哺乳動物細胞轉化體處于選擇壓力下，其中由于載體中存在可選擇基因，因此僅 所述轉化體唯一適于存活。通過在連續(xù)增加培養(yǎng)基中選擇劑濃度的條件下培養(yǎng)經(jīng)轉化的細 胞來施加選擇壓力，從而引起可選擇基因與編碼另一基因（例如IL-2突變蛋白或IL-2突 變蛋白Fc融合蛋白）的DNA擴增。因此，自擴增的DNA合成增加量的多肽，例如IL-2突變 蛋白或IL-2突變蛋白Fc融合蛋白。
[0144] 核糖體結合位點通常是mRNA轉移啟始所必需的，并且通過Shine-Dalgarno序列 (原核生物）或Kozak序列（真核生物）表征。該元件通常位于啟動子的3'和待表達多肽 的編碼序列的5'。在某些實施方案中，一個或多個編碼域可操作地與內(nèi)部核糖體結合位點 (IRES)連接，使得兩個開放閱讀框從單個RNA轉錄物翻譯。
[0145] 在一些情況下，例如當需要在真核宿主細胞表達系統(tǒng)中進行糖基化時，可操縱各 種前置序列或前導序列以改良糖基化或產(chǎn)率。例如，可改變特定信號肽的肽酶切割位點，或 添加前導序列，這也可影響糖基化。最終的蛋白質(zhì)產(chǎn)物可能在-1位（相對于成熟蛋白質(zhì)的 第一個氨基酸）具有一個或多個可能末完全移除的易于表達的其它氨基酸。例如，最終的 蛋白質(zhì)產(chǎn)物可能具有一個或兩個存在于肽酶切割位點的氨基酸殘基，其與氨基末端連接。 或者，如果酶在成熟多肽內(nèi)的某些酶切割位點處切割，則使用此類區(qū)域可能產(chǎn)生呈略微截 短形式之所需多肽。
[0146] 本發(fā)明的表達和克隆載體通常包含被宿主生物識別并且可操作地與編碼IL-2突 變蛋白或IL-2突變蛋白Fc融合蛋白的分子連接的啟動子。啟動子是位于控制結構基因的 轉錄的結構基因起始密碼子（通常在約l〇〇bp至lOOObp內(nèi)）上游（即5'）的未轉錄序列。 啟動子通常歸類為兩類之一：誘導型啟動子和組成型啟動子。誘導型啟動子為應答培養(yǎng)條 件的一些改變（例如，養(yǎng)分的存在或不存在或溫度變化）而引發(fā)DNA在其控制下大量轉錄， 另一方面，組成型啟動子均一地轉錄與其可操作連接的基因，即，對基因表達具有極少控制 或無控制。由多種潛在宿主細胞識別的大量啟動子為人們所熟知。
[0147] 與酵母宿主一起使用的合適的啟動子為本領域所熟知。酵母增強了可有利地與 酵母啟動子一起使用。與哺乳動物宿主細胞一起使用的合適的啟動子為本領域所熟知，且 包括但小限于從諸如下列病毒的基因組獲得的啟動子：多瘤病毒、禽痘病毒、腺病毒（例如 腺病毒2)、牛乳頭瘤病毒、禽肉瘤病毒、巨細胞病毒、反轉錄病毒、乙型肝炎病毒和猿猴病毒 40 (SV40)。其它合適的哺乳動物啟動子包括異源哺乳動物啟動子、例如，熱休克啟動子和肌 動蛋白啟動子。
[0148] 值得關注的其它啟動子包括但不限于：SV40早期啟動子（Benoist和Chambon， 1981，Nature290:304-310);CMV啟動子（Thornsen等，1984，Proc.Natl.Acad. U.S.A.81:659_663);在勞氏肉瘤病毒的3'長末端重復序列中所含的啟動子（Yamamoto 等，1980,Cell22:787-797);皰疹胸苷激酶啟動子（Wagner等，1981，？『〇(：.恥七1.厶。&(1· Sci.U.S.A. 78:1444-1445);來自金屬硫蛋白基因的啟動子和調(diào)控序列Prinster等，1982， Nature296:39-42);和原核啟動子例如β-內(nèi)酰胺酶啟動子（Villa-Kamaroff等，1978， Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. 75:3727-3731);或tac啟動子（DeBoer等，1983,Proc.Natl. Acad.Sci.U.S.A. 80:21-25)。以下表現(xiàn)組織特異性并且已用于轉基因動物中的動物轉錄控 制區(qū)也值得關注：在胰腺腺泡細胞中具有活性的彈性蛋白酶I基因控制區(qū)（Swift等，1984， Cell38:639-646 ;0rnitz等，1986，ColdSpringHarborSymp.Quant.Biol. 50:399-409; MacDonald，1987，！fepatology7:425-515);在胰島β細胞中有活性的胰島素基因控制 區(qū)（Hanahan，1985,Nature315:115-122);在淋巴細胞中有活性的免疫球蛋白基因控 制區(qū)（Grosschedl等，1984,Cell38:647-658;Adames等，1985,Nature318:533-538; Alexander等，1987,Mol.Cell.Biol. 7:1436-1444);在睪丸、乳腺、淋巴和肥大細胞中有活 性的小鼠乳腺腫瘤病毒控制區(qū)（Leder等，1986,Cell45:485-495);在肝中有活性的白蛋白 基因控制區(qū)（Pinkert等，1987，GenesandDevel. 1:268-276);在肝中有活性的甲胎蛋白 基因控制區(qū)（Krumlauf等，1985，Mol.Cell.Biol. 5:1639-1648;Hammer等，1987，Science 253:53-58);在肝中有活性的α?-抗胰蛋白酶基因控制區(qū)（Kelsey等，1987,Genesand Devel. 1:161-171);在骨髓細胞中有活性的β-球蛋白基因控制區(qū)（Mogram等，1985， Nature315:338-340 ;Kollias等，1986,Cell46:89-94);在腦中的少突膠質(zhì)細胞中有活性 的髓磷脂堿性蛋白基因控制區(qū)（Readhead等，1987,Cell48:703-712);在骨骼肌中有活性 的肌球蛋白輕鏈2-基因控制區(qū)（Sani，1985,Nature314:283-286);以及在下丘腦中有活 性的促性腺激素釋放激素基因控制區(qū)（Mason等，1986,Science234:1372-1378)。
[0149] 可在載體中插入增強子序列以增強高等真核生物的轉錄。增強子為DNA的順式作 用元件，通常為約10-300個堿基對長，其作用于啟動子以增強轉錄。增強子的取向和位置 相對獨立，已發(fā)現(xiàn)其位于位置轉錄單元的5'和3'。已知可自哺乳動物基因獲得的若干增強 子序列（例如球蛋白、彈性蛋白酶、白蛋白、α-胎蛋白質(zhì)和胰島素）。然而，通常使用來自 病毒的增強子。本領域中已知的SV40增強子、巨細胞病毒早期啟動子增強子、多瘤病毒增 強子和腺病毒增強子為用于活化真核啟動子的示例性增強元件。雖然增強子可能位于載體 中編碼序列的5'或3'端，但其通常位于啟動子的5'位點。可將編碼適當?shù)奶烊换虍愒葱?號序列的序列（前導序列或信號肽）結合到表達載體中，以促進IL-2突變蛋白或IL-2突變 蛋白Fc融合蛋白的細胞外分泌。信號肽或前導序列的選擇取決于供產(chǎn)生蛋白質(zhì)的宿主細 胞的類型，并且異源信號序列可置換天然信號序列。在哺乳動物宿主細胞中起作用的信號 肽的實例包括以下：美國專利號4, 965, 195中所述的白介素-7 (IL-7)的信號序列；Cosman 等，1984,Nature312:768中所述的白介素-2受體的信號序列；歐洲專利號0367566中所 述的白介素-4受體信號肽；美國專利號4, 968, 607中所述的I型白介素-1受體信號肽；歐 洲專利號0460846中所述的II型白介素-1受體信號肽。
[0150]當將載體整合至宿主細胞基因組中時，所述載體可含有一個或多個有助于表達的 元件。實例包括EASE元件（Aldrich等 2003BiotechnolProg. 19:1433-38)和基質(zhì)附著 區(qū)（MAR)。MAR介導染色質(zhì)的組織結構并且隔離整合的載體不受"位置"效應影響。因此， MAR在當載體用來產(chǎn)生穩(wěn)定的轉染子時尤其有用。許多天然的和合成的含有MAR的核酸為 本領域已知，例如美國專利號 6, 239, 328 ;7, 326, 567 ;6, 177, 612 ;6, 388, 066 ;6, 245, 974 ; 7, 259, 010 ;6, 037, 525 ;7, 422, 874 ;7, 129, 062。
[0151] 所提供的表達載體可由起始載體（例如市售載體）構建。此類載體可能含有或可 能不含所有所需旁側序列。如果本文所述的一個或多個旁側序列已不存在于載體中時，則 其可獨立獲得并連接到載體中。用于獲得各旁側序列的方法為本領域技術人員所熟知。
[0152] 在已構建載體且已將編碼IL-2突變蛋白或IL-2突變蛋白Fc融合蛋白的核酸分 子插入所述載體的適當位點中后，可將所完成載體插入核實的宿主細胞中用于擴增和/或 多肽表達?？赏ㄟ^眾所周知的方法，包括轉染、感染、磷酸鈣共沉淀、電穿孔、顯微注射、脂質(zhì) 轉染、DEAE-葡聚糖介導的轉染或其它已知技術，將表達載體轉化至所選宿主細胞中。所選 方法將部分取決于待使用的宿主細胞類型。這些方法和其它合適的方法為本領域的技術人 員所熟知，并且描述于例如Sambrook等，2001中，見上文。
[0153] 當在適當條件下培養(yǎng)時，宿主細胞將合成IL-2突變蛋白或IL-2突變蛋白Fc融合 蛋白，隨后可從培養(yǎng)基（如果宿主細胞將其分泌到培養(yǎng)基中）或直接從產(chǎn)生所述蛋白質(zhì)的 宿主細胞中（如果未分泌）收集。適當宿主細胞的選擇取決于多種因素，諸如所需表達水 平、活性所需或必需的多肽修飾（例如糖基化或磷酸化）以及折疊成生物活性分子的容易 度。宿主細胞可是為真核的或原核的。
[0154] 可用作宿主以供表達的哺乳動物細胞系為本領域所熟知，并且包括但不限于可得 自美國模式培養(yǎng)物保藏所（ATCC)的永生化細胞系，并且本領域中已知的表達系統(tǒng)中所用 的任何細胞系可用于制備本發(fā)明的重組多肽。通常，用包含編碼所需IL-2突變蛋白或IL-2 突變蛋白Fc融合蛋白的DNA的重組表達載體轉化宿主細胞。其中可采用的宿主細胞是原核 生物、酵母或高等真核細胞。原核生物包括革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物體，例如大腸桿菌 或桿菌。高等真核細胞包括昆蟲細胞及哺乳動物來源的確立細胞系。合適的哺乳動物宿主 細胞系的實例包括猴腎細胞C0S-7 系（ATCCCRL1651)(Gluzman等，1981，Cell23:175)， L細胞、293細胞、C127細胞、3T3細胞（ATCCCCL163)，中國倉鼠卵巢（CHO)細胞或其衍 生物（例如VeggieCHO和生長于無血清培養(yǎng)基中的相關細胞系）（Rasmussen等，1998， Cytotechnology28:31)，HeLa細胞、BHK(ATCCCRL10)細胞系，和衍生自非洲綠猴腎細胞 系CVI(ATCCCCL70)的CVI/EBNA細胞系（如McMahan等，1991，EMBOJ. 10:2821 所述）、 人胚胎腎細胞（例如293、293EBNA或MSR293)、人表皮A431細胞、人C〇1〇205細胞，其它 轉化的靈長類細胞系、正常二倍體細胞、衍生自初生組織體外培養(yǎng)的細胞株、初生外植體、 HL-60、U937、HaK或Jurkat細胞。任選地，當期望在各種信號轉導或報告基因測定中使用 多肽時，可使用諸如IfepG2/3B、KB、NIH3T3或S49的哺乳動物細胞系用于多肽表達。
[0155] 或者，可在諸如酵母的低等真核生物或在諸如細菌的原核生物中產(chǎn)生多肽。合適 的酵母包括釀酒酵母（Saccharomycescerevisiae)、粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe)、克魯維酵母菌株（Kluyveromycesstrains)、假絲酵母（Candida)或任何能表達異 源多肽的酵母菌株。合適的細菌菌株包括大腸桿菌（Escherichiacoli)、枯草芽孢桿菌 (Bacillussubtilis)、鼠傷寒沙門氏桿菌（Salmonellatyphimurium)或任何能表達異源多 肽的細菌菌株。如果多肽是在酵母或細菌中得到，則有利的是例如通過適當位點的磷酸化 或糖基化來修飾其中所產(chǎn)生的多肽，以獲得功能性多肽?？墒褂靡阎幕瘜W或酶促方法完 成此類共價連接。
[0156] 所述多肽也可將本發(fā)明的分離核酸與一或多個昆蟲表達載體中的合適控制序列 可操作地連接并采用昆蟲表達系統(tǒng)來產(chǎn)生。用于桿狀病毒/昆蟲細胞表達系統(tǒng)的材料 和方法可以試劑盒形式購自例如Invitrogen，SanDiego，Calif.，U.S.A. (MftlB.ac·' 試劑盒），并且此類方法為本領域中所熟知，如Summers和Smith，TexasAgricultural ExperimentStationBulletinNo. 1555 (1987)，以及Luckow和Summers，Bio/Technology 6:47 (1988)中所描述。也可采用無細胞翻譯系統(tǒng)并使用衍生自本文所公開的核酸構建體的 RNA來產(chǎn)生多肽。與細菌、真菌、酵母和哺乳動物細胞宿主一起使用的適當克隆和表達載體 由Pouwels等（CloningVectors:ALaboratoryManual，Elsevier，NewYork，1985)進行 了描述。包含優(yōu)選可操作地連接至至少一個表達控制序列的本發(fā)明分離核酸的宿主細胞是 "重組宿主細胞"。
[0157] 在某些方面，本發(fā)明包括編碼如下人IL-2突變蛋白的分離的核酸，其優(yōu)先刺激 T調(diào)節(jié)細胞并且包含V91K取代和與SEQIDN0:1中所示氨基酸序列具有至少90%、至少 91 %、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少 99%或100%同一性的氨基酸序列。分離的核酸可編碼本文所述的任何示例性IL-2突變蛋 白。
[0158] 也包括編碼本文所述的任何示例性IL-2突變蛋白Fc融合蛋白的分離的核酸。在 優(yōu)選的實施方案中，抗體的Fc部分和人IL-2突變蛋白在單個開放閱讀框內(nèi)編碼，任選地在 Fc區(qū)和IL-2突變蛋白之間編碼接頭。
[0159]在另一方面，本文提供包含可操作地連接至啟動子的上述IL-2突變蛋白或IL-2 突變蛋白Fc融合蛋白-編碼核酸的表達載體。
[0160]另一方面，本文中提供包含編碼上述IL-2突變蛋白或IL-2突變蛋白Fc融合蛋白 的分離核酸的宿主細胞。宿主細胞可以是原核細胞，例如大腸桿菌，或可為真核細胞例如哺 乳動物細胞。在某些實施方案中，宿主細胞是中國倉鼠卵巢（CH0)細胞系。
[0161]在另一個方面，本文提供制備人IL-2突變蛋白的方法。所述方法包括在其中表達 可操作地連接至人IL-2突變蛋白的啟動子的條件下培養(yǎng)宿主細胞。隨后，從所述培養(yǎng)物中 收集人IL-2突變蛋白。所述IL-2突變蛋白可從培養(yǎng)基和/或宿主細胞溶解物中收集。
[0162]在另一個方面，本文提供制備人IL-2突變蛋白Fc融合蛋白的方法。所述方法包 括在其中表達可操作地連接至人IL-2突變蛋白Fc融合蛋白的啟動子的條件下培養(yǎng)宿主細 胞。隨后，從所述的培養(yǎng)物中收集人IL-2突變蛋白Fc融合蛋白。所述人IL-2突變蛋白Fc 融合蛋白可從培養(yǎng)基和/或宿主細胞溶解物中收集。
[0163]藥物組合物
[0164]在一些實施方案中，本發(fā)明提供藥